1、附件:10中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准GB xxxxxxxxx-发布 -实施食品安全国家标准植物源性食品中 91 种有机磷类农药及其代谢物残留量的测定气相色谱法National food safety standardDetermination of 91 organophosphorus pesticides and metabolites residues in foodsof plant origingaschromatography method(征求意见稿)中 华 人 民 共 和 国 卫 生 和 计 划 生 育 委 员 会中 华 人 民 共 和 国 农 业 部国 家 食
2、 品 药 品 监 督 管 理 总 局发布GB前 言本标准系首次发布。1食品安全国家标准植物源性食品中 91 种有机磷类农药及其代谢物残留量的测定气相色谱法方法一 气相色谱双柱法1 范围本标准规定了植物源性食品中 91 种有机磷农药及其代谢物(见附录 A)残留量的气相色谱测定方法。本标准适用于植物源性食品中 91 种有机磷农药及其代谢物残留量的测定。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的应用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB 2763 食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量GB/T6682 分
3、析实验室用水规格和试验方法GB/T8855 新鲜水果和蔬菜的取样方法3 原理试样用乙腈提取,提取液经固相萃取或分散固相萃取净化,使用带火焰光度检测器的气相色谱仪检测,根据色谱峰的保留时间定性,外标法定量。4 试剂与材料除非另有说明,在分析中仅使用分析纯的试剂,水为GB/T6682规定的一级水。4.1试剂4.1.1 乙腈(CH 3CN,CAS 号:75-05-8)。4.1.2 丙酮(C 3H6O,CAS 号:67-64-1) ,色谱纯。4.1.3 甲苯(C 7H8,CAS 号:108-88-3),色谱纯。4.1.4 硫酸镁(MgSO 4,CAS 号:7487-88-9) 。4.1.5 氯化钠(N
4、aCl,CAS 号:7647-14-5) ,140 烘烤 4 h。4.1.6 醋酸钠(CH 3COONa,CAS 号: 6131-90-4) 。24.2 溶液配制乙腈-甲苯溶液(3+1):量取 100 mL 甲苯加入 300 mL 乙腈中,混匀。4.3 标准品农药标准品:名称见附录 A,纯度 96% 。4.4 标准溶液配制4.4.1 标准储备溶液(1000 mg/L):准确称取 10mg(精确至 0.1mg)农药各标准品,用丙酮溶解并分别定容到 10mL。标准储备溶液避光且低于-18保存,有效期一年。4.4.2 混合标准溶液(、和)详见附录 A。将 91 种农药及其代谢物分成 6 个组,分别准
5、确吸取一定量的单个农药储备溶液于 50mL 容量瓶中,用丙酮定容至刻度。混合标准溶液,避光 04保存,有效期一个月。4.5 材料4.5.1 固相萃取柱:石墨化炭黑(GCB)500 mg /氨基(NH 2)500 mg,6 mL。4.5.2 乙二胺-N-丙基硅烷硅胶(PSA),40m60m。4.5.3 C18 固相萃取填料, 40m60m。4.5.4 陶瓷均质子,2 cm(长)1 cm(外径) 。4.5.5 微孔滤膜(有机相):0.22 m25 mm。 。5 仪器和设备5.1 气相色谱仪:配有双火焰光度检测器(FPD 磷滤光片) 。5.2 分析天平:感量 0.1 mg 和 0.01 g。5.3
6、高速匀浆机:转速15000r/min。5.4 离心机:转速4 200r/min。5.5 组织捣碎机。5.6 旋转蒸发仪。5.7 氮吹仪,可控温。5.8 旋涡振荡器。6 试样制备6.1 试样制备蔬菜和水果的取样量按照GB/T 8855规定执行,食用菌样品随机取样 1 kg。样品取样部位按照GB 2763规定执行。对于个体较小的样品,取样后全部处理;对于个体较大的基本均匀样品,可在对称轴3或对称面上分割或切成小块后处理;对于细长、扁平或组分含量在各部分有差异的样品,可在不同部位切取小片或截成小段后处理;取后的样品将其切碎,充分混匀,用四分法取样或直接放入组织捣碎机中捣碎成匀浆,放入聚乙烯瓶中。取谷
7、类样品500 g,粉碎后使其全部可通过425 m的标准网筛,放入聚乙烯瓶或袋中。取油料作物、茶叶、坚果和香辛料各500 g,粉碎后充分混匀,放入聚乙烯瓶或袋中。植物油类搅拌均匀,放入聚乙烯瓶中。6.2 试样贮存将试样按照测试和备用分别存放。于-18条件下保存。7 分析步骤7.1 提取和净化7.1.1 蔬菜、水果和食用菌称取 20 g 试样(精确到 0.01 g)于 150mL 烧杯中,加入 40 mL 乙腈,用高速匀浆机 15000 r/min匀浆 2 min,提取液过滤至装有 5 g7 g 氯化钠的 100 mL 具塞量筒中,盖上塞子,剧烈震荡 1 min,在室温下静置 30 min。从具塞
8、量筒中准确吸取 10 mL 上清液于 100 mL 烧杯中,80水浴中氮吹蒸发近干,加入 2.0mL 丙酮溶解,盖上铝箔,备用。将上述备用液完全转移至 15 mL 刻度离心管中,再用约 3 mL 丙酮分三次冲洗烧杯,并转移至离心管,最后定容至 5.0 mL,涡旋 0.5 min,过微孔滤膜(4.5.5) ,分别移入两个 2 mL 样品瓶中,待测。7.1.2 油料作物和坚果称取 10 g 试样(精确到 0.01 g)于 150 mL 烧杯中,加入 20 mL 水,混匀后,静置 30 min,再加入 50 mL 乙腈,用高速匀浆机 15000 r/min 匀浆 2 min,提取液过滤至装有 5 g
9、7 g 氯化钠的 100 mL具塞量筒中,盖上塞子,剧烈震荡 1 min,在室温下静置 30 min。准确吸取 8 mL 上清液于 15 mL 刻度离心管中,加入 900 mg 无水硫酸镁, 150 mgPSA,150 mgC18,旋涡 0.5 min,4 200 r/min 离心 5 min,准确吸取 5 mL 上清液加入到 10 mL 刻度离心管中,80水浴中氮吹蒸发近干,准确加入 1.00 mL 丙酮,涡旋 0.5 min,过微孔滤膜(4.5.5) ,分别移入两个 2 mL 样品瓶中,待测。7.1.3 谷物称取 10g 试样(精确到 0.01 g)于 150 mL 具塞锥形瓶中,加入 2
10、0 mL 水浸润 30 min,加入 50 mL 乙腈,在振荡器上 200r/min 振荡 30 min,提取液过滤至装有 5 g7 g 氯化钠的 100 mL 具塞量筒中,盖上塞子,剧烈震荡 1 min,在室温下静置 30min。准确吸取 10 mL 上清液于 100 mL 烧杯中,80水浴中氮吹蒸发近干,加入 2.0 mL 丙酮溶解,4盖上铝箔,备用。将上述溶液完全转移至 10.0 mL 刻度试管中,再用 5 mL 丙酮分三次冲洗烧杯,收集淋洗液于刻度试管中,50 水浴氮吹蒸发近干,准确加入 2.00 mL 丙酮,涡旋 0.5 min,过微孔滤膜(4.5.5) ,分别移入两个 2 mL 样
11、品瓶中,待测。7.1.4 茶叶和香辛料称取 5 g 试样(精确到 0.01 g)于 150 mL 烧杯中,加入 20 mL 水浸润 30 min,加入 50 mL 乙腈,15000 r/min 高速匀浆 2 min 后用滤纸过滤,滤纸收集到装有 5 g7 g 氯化钠的 100 mL 具塞量筒中,盖上塞子,剧烈振荡 1 min,在室温下静置 30 min。准确吸取 10 mL 上清液于 100 mL 烧杯中,80水浴中氮吹蒸发近干,加入 2mL 乙腈-甲苯溶液(3+1)溶解残余物,待净化。将固相萃取柱(4.5.1)用 5mL 乙腈- 甲苯溶液(3+1)预淋洗,当液面到达柱筛板顶部时,立即加入上述
12、待净化溶液,用 100 mL 茄型瓶收集洗脱液,用 2 mL 乙腈-甲苯溶液(3+1)涮洗烧杯后过柱,并重复一次,再用 15 mL 乙腈 -甲苯溶液(3+1)洗脱柱子,收集的洗脱液于 40水浴中旋转蒸发近干,用 5mL 丙酮冲洗茄型瓶并转移到 10 mL 离心管中,50 水浴中氮吹蒸发近干,准确加入 1.00 mL 丙酮,旋涡混匀,过微孔滤膜(4.5.5) ,分别移入两个 2 mL 样品瓶中,待测。7.1.5 植物油称取 3 g 试样(精确到 0.01 g)于 50 mL 离心管中,加入 5 mL 水后,再加入 15 mL 乙腈,剧烈振荡 1 min 后,加入 6 g 无水硫酸镁,1.5 g
13、醋酸钠,涡旋混合,4 200 r/min 离心 5 min。准确吸取 8 mL 上清液到内有 900 mg 无水硫酸镁,150 mgPSA,150 mgC18 的 15 mL 离心管中,涡旋 0.5 min,4 200 r/min 离心 5min,准确吸取 5 mL 上清液放入 10 mL 刻度离心管中,80水浴中氮吹蒸发近干,准确加入 1.00 mL 丙酮,涡旋 0.5 min,过微孔滤膜(4.5.5) ,分别移入两个 2 mL 样品瓶中,待测。7.2 测定7.2.1仪器参考条件a) 色谱柱:A 柱:50%聚苯基甲基硅氧烷石英毛细管柱,30m0.53mm(内径)1.0m,或相当者;B 柱:1
14、00%聚苯基甲基硅氧烷石英毛细管柱,30m0.53mm (内径)1.5m,或相当者;b) 色谱柱温度:150保持 2 min,然后以 8/min 程序升温至 210,再以 5/min 升温至 250,保持 15min;c) 载气:氮气,纯度99.999%,流速为 8.4 mL/min;5d) 进样口温度:250;e) 检测器温度:300;f) 进样量:1L;g) 进样方式:不分流进样;h) 燃气:氢气,纯度99.999%,流速为 80mL/min。助燃气:空气,流速为 110mL/min。7.2.2 标准曲线将混合标准中间溶液用丙酮稀释成质量浓度为0.005 mg/L、0.01 mg/L、0.
15、05 mg/L、0.1 mg/L和1 mg/L的系列标准溶液,参考色谱条件测定。以农药质量浓度为横坐标,色谱的峰面积积分值为纵坐标,绘制标准曲线。7.2.3 定性及定量7.2.3.1 定性测定以目标农药的保留时间定性。被测试样中目标农药双柱上色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间相比较,相差应在0.05 min 之内。7.2.3.2 定量测定以外标法定量。7.3 试样溶液的测定将混合标准工作溶液和试样溶液依次注入气相色谱仪中,保留时间定性,测得目标农药色谱峰面积,根据公式(1) ,得到各农药组分含量。待测样液中农药的响应值应在仪器检测的定量测定线性范围之内,超过线性范围时应根据测定浓度进行
16、适当倍数稀释后再进行分析。7.4 平行试验按以上步骤对同一试样进行平行试验测定。7.5 空白试验除不加试料外,采用完全相同的测定步骤进行平行操作。8 结果计算试样中被测农药残留量以质量分数 计,数值以毫克/千克(mg/kg)表示,按公式(1)计算:(1)6式中:标准溶液中农药的质量浓度,单位为毫克每升(mg/L);A试样溶液中被测农药的峰面积;As标准溶液中被测农药的峰面积;V1提取溶剂总体积,单位为毫升(mL);V2吸取出用于检测用的提取溶液的体积,单位为毫升(mL);V3试样溶液定容体积,单位为毫升(mL);m试样的质量,单位为克(g)。计算结果应扣除空白值,计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,保留两位有效数字,结果超过 1 mg/kg 时保留三位有效数字。9 精密度在重复性条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过重复性限( r),参见附录 B。在再现性条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过再现性限( R),参见附录 B。10 其他本标准方法各农药组分定量限见附录 C 表 C.1。11 色谱图色谱图见图 1图 6,质量浓度均为 0.1mg/L 标准溶液。