1、红细胞检查,红细胞（red blood cell, RBC; erythrocyte）,血液中数量最多的有形成分 主要成分：血红蛋白 主要功能：呼吸载体 直径：6.7 9.5 um，平均7.2 um 形状：双凹圆盘状,RBC,红细胞的生成,Stem cellEpo 原始红细胞早幼红细胞 中幼红细胞晚幼红细胞网织红细胞成熟红细胞释放入血,72h,48h,平均寿命120 d,红细胞计数 （red blood cell count，RBC）,定义：单位体积（每升）血液内的红细胞数量 原理：用等渗稀释液将血液稀释一定倍数，充入计数池，于显微镜下计数一定体积范围的红细胞数，并换算得每升血液中红细胞数(/
2、L),红细胞稀释液,稀释液：保护计数细胞，破坏非计数细胞，同时抗 凝，要求不含杂质 红细胞稀释液：Hayem液，由氯化钠、结晶硫酸钠、氯化高汞组成 作用： 氯化钠调节渗透压，结晶硫酸钠防止细胞 粘连，氯化高汞防腐,计数方法,手工法 ：取样 稀释 计数 计算 仪器法 ：电阻抗分析或激光分析,手工法,10 uL末梢血+2 ml稀释液混匀稀释充池计数计算,成年男性（4.0 - 5.5）1012/L 成年女性（3.5 - 5.0）1012/L 初生儿 （6.0 - 7.0）1012/L,外周血红细胞参考值,思 考,手工法VS仪器法？,血红蛋白测定,（ hemoglobin，Hb）,血红蛋白的组成,珠蛋
3、白（globin）（4条肽链）,亚铁血红素（heme）（1个）,血红蛋白,珠蛋白具有种属特异性，含有两条链和两条非链正常成人的Hb包括：HbA 22 （90%以上）HbA2 22 （2 3%）HbF 22 （2%以下；新生儿占70%）,受激素调节红细胞生成素：直接雄激素：直接和间接自身调节血红素过多 氧化为高铁血红素,负反馈,血红蛋白的合成,血红蛋白的代谢,珠蛋白 氨基酸 血红素 胆色素（胆绿素、胆红素、 胆素原及胆素）,血红蛋白,还原血红蛋白（reduced hemoglobin，Hbred） 氧合血红蛋白（oxyhemoglobin，HbO2） 高铁血红蛋白（hemiglobin，Hi）
4、碳氧血红蛋白（HbCO） 硫化血红蛋白（SHb）,血红蛋白的种类,血红蛋白的测定,定义指单位体积血液中所含血红蛋白的量 参考值成年男性： 120-160g/L成年女性： 110-150g/L初生儿： 170-200g/L,Hb测定方法,分光光度计比色氰化高铁血红蛋白测定法（HiCN）（国际标准参考方法）十二烷基硫酸钠血红蛋白测定法（SDS-Hb）（次选方法）叠氮高铁血红蛋白测定法（HiN3）碱羟血红蛋白测定法（AHD575） 目视比色沙利法、测铁法、测氧法、比重法、折射仪法、光谱分析法 仪器法,氰化高铁血红蛋白测定法（HiCN）,为国际标准参考方法 步骤： 取样 加转化液（溶血、转化） 比色,
5、原理：血液在血红蛋白转化液中溶血后，除SHb外各血红蛋白均可被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白，再与CN-结合生成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白，通过比色根据吸光度测得血红蛋白的浓度。,方法：,计算：有三种方法求得Hb浓度1. A367.7 2. 得A值后，在标准曲线上直接查找3. AK KHb / A,转化液 5ml + 血 20ul(5min)，比色读吸光度（A）(540nm),标准曲线的绘制,用一组已知浓度的HiCN参考液，在分光光度计上分别测定A值，以A为纵座标，血红蛋白参考值为横座标，绘制标准曲线。例如：HiCN参考品 Hb g/L： 50 100 150 200A ： 0.14 0.27
6、 0.41 0.54如果标本A为0.32，则标本Hb = 0.32370.37 = 118.52（g/L）,KHb / A = 370.37,优点 操作简单 呈色快且稳定 除SHb外均可检测 根据吸光度直接定值,方法学评价,缺点 KCN有剧毒 HbCO转化较慢 高WBC和高球蛋白血症可致溶液浑浊,红细胞计数与血红蛋白测定的临床意义,生理变化,年龄与性别 新生儿：RBC高，两周后 下降，6-7岁最低 男性：25-30岁高峰 女性：13岁-15岁达高值， 21岁-35岁低水平，以后 渐渐增高,精神因素肾上腺素 RBC 剧烈体力劳动或运动相对缺氧 Epo RBC 气压降低缺氧 代偿性RBC 妊娠中后
7、期血液稀释 RBC 老年人造血功能减退 RBC,病理变化,红细胞和血红蛋白增多 相对增多：血浆中水分丢失，血液浓缩所致，如呕吐、腹泻 绝对增多：原发性 真性红细胞增多继发性 低氧血症 Epo （如心血管病、肺疾病、异常血红蛋白病）肾上腺皮质功能亢进,红细胞生成素代偿性增加,生理性：新生儿 高原居民 病理性：严重慢性心、肺疾患、异常血红蛋白病 红细胞生成素非代偿性增加：某些肿瘤或肾脏疾患,红细胞和血红蛋白量减少,主要见于贫血：由于各种原因引起的全身血循环中红细胞总数、血红蛋白和红细胞比积减少，低于该地区、该年龄及性别组的参考范围低限时称贫血。,贫血病因,生成减少 破坏过多 失血过多,1）骨髓造血
8、功能减退药物、物理因素、慢性肾衰、再障、白血病、恶性肿瘤骨髓转移 2）造血原料不足缺铁（缺铁性贫血）、缺乏VitB12或叶酸（巨幼细胞性贫血） 3）红细胞破坏增加溶血性贫血（输血不合、蚕豆病、遗传性球形细胞增多症） 4）红细胞丢失过多各种原因的失血（如消化性溃疡、痔疮、钩虫病）,注意问题,Hb测定对贫血程度的判断优于RBC计数 在某些病理情况下，Hb和RBC的浓度不一定能正确反映全身红细胞的总容量，如：急性失血、水潴留、失水等发生大细胞贫血或小细胞低色素贫血时，RBC计数与Hb浓度不成比例,红细胞形态检查,红细胞形态观察,大小及均匀程度红细胞形状血红蛋白含量细胞内结构,红细胞大小改变,直径 例
9、如 小红细胞 10um 巨幼细胞贫血 巨红细胞 15um 巨幼细胞贫血 大小不均 增生性贫血,A,C,B,A： normal B： megalocyte C： anisocytosis,红细胞形状改变,球形红细胞 遗传性或获得性 椭圆形红细胞 遗传性 靶形红细胞 珠蛋白生成障碍性贫血、HbC病 口形红细胞 遗传性 镰形红细胞 异常血红蛋白S（HbS） 棘形红细胞 遗传性或获得性-脂蛋白缺乏症 新月形红细胞 阵发性睡眠性血红蛋白尿症 泪滴形红细胞 贫血、骨髓纤维化症 缗钱状形成 纤维蛋白原和球蛋白增高 裂红细胞 DIC、微血管病性溶血性贫血 红细胞形态不整 巨幼细胞性贫血,spherocyte,
10、Elliptocyte,人为假椭圆红细胞,Target cell,stomatocyte,Sickle cell,镰形红细胞,acanthocyte,meniscocyte,Tear drop cell,Rouleaux formation,schistocyte,poikilocytosis,血红蛋白含量改变,正常色素性 急性失血、再障、白血病 低色素性 缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血 高色素性 巨幼细胞性贫血 嗜多色性 溶血性或急性失血性贫血 细胞着色不一 铁粒幼红细胞性贫血,normochromic,hypochromic,hyperchromic,polychromatic,人为面包
11、圈红细胞,铁粒幼红细胞性贫血,细胞内的异常结构, 嗜碱性点彩红细胞：RNA， 铅中毒 染色质小体（豪焦小体）：核残余物，巨幼细胞贫血、脾切除后 卡波环：脂蛋白变性，巨幼细胞贫血、铅中毒 寄生虫：疟原虫、微丝蚴、杜利什曼原虫 有核红细胞： 溶血性贫血、造血系统恶性疾患或骨髓转移性肿瘤、慢性骨髓增生性疾病、脾切除后,Basophilic stippling cell,Howell Jollys body,Cabot ring,疟原虫（malarial parasite）,有核红细胞,红细胞的各种改变,红细胞比容测定 （Hematocrit，HCT）,定义：抗凝血在一定条件下离心沉淀，求出单位体积血
12、液中红细胞占的体积百分比（L/L）。与红细胞数量以及红细胞大小有关,温氏法（常量，中速离心）微量法首选常规方法放射性核素法参考方法折射计法、黏度法、比重法、电阻抗法（仪器）,测定方法,参 考 值,温氏法：男性0.4 0.54 女性0.37 0.47微量法：男性0.42 0.52 女性0.37 0.48仪器法：男性0.40 0.52 女性0.37 0.48,离 心 法,EDTA抗凝 离心PlasmPLTWBCRBC-redRBC-O2,诊断贫血并判断其严重程度，结合有关指数变化可推断贫血病因，并对贫血进行分类； 评估血浆容量有无增减或稀释浓缩程度，有助于补液量的控制。增高：血液浓缩、原发性或继发
13、性红细胞增多症降低：贫血、稀释血症（充血性心力衰竭、妊娠、 输液过多）,临床意义,红细胞平均指数,通过RBC计数、Hb测定、HCT测定可计算出红细胞平均指数,定义：每个红细胞的平均体积。以飞升（fL）为单位 计算：MCV = HCT / RBC 例如：RBC为3.501012 / L，Hct为0.36，则：MCV = 0.36 3.501012 / L = 103 fL 参考值：手工法 80 92 fL 仪器法80 100 fL,红细胞平均容积 （mean corpuscular volume, MCV）,红细胞平均血红蛋白量 （mean corpuscular hemoglobin，MCH）
14、,定义：每个红细胞内所含平均血红蛋白的量，以皮克 （pg）为单位 计算：MCH = Hb / RBC 例如：RBC为3.501012 / L，Hb为120 g/L，则：MCH = 120 g/L 3.501012 / L = 34.20 pg 参考值：手工法 27 31 pg 仪器法 27 34 pg,红细胞平均血红蛋白浓度 (mean corpuscular hemoglobin concentration, MCHC）,定义：单位容积红细胞的平均血红蛋白浓度，以g/L为单位 计算：MCHC = Hb / Hct 例如：Hb为120 g/L，Hct为0.36，则：MCHC = 120 g/L
15、 0.36 = 333 g/L 参考值：320 360 g/L,临床意义,MCV、MCH、MCHC可从不同侧面反映红细胞的病理变化，有利于分析病人红细胞形态特征，进行贫血分类、诊断和鉴别诊断。,贫血的红细胞形态学分类,红细胞体积分布宽度 （RBC Volume Distribution Width，RDW）,定义 红细胞体积分布宽度是由血液分析仪根据红细胞体积的直方图导出，反映周围血红细胞体积异质性的参数，是反映红细胞大小均一程度的客观指标，常用变异系数（CV）或标准差（S）表示。,临床意义,与MCV结合进行贫血分类：这种分类法更能反映贫血的病理变化，对贫血的鉴别诊断有一定的价值。 诊断缺铁性
16、贫血：IDA的病人95%以上RDW增高，可与-珠蛋白生成障碍性贫血（88%RDW正常）鉴别。,贫血类型 常见疾病 大细胞均一性 部分再障 大细胞不均一性 巨幼细胞性贫血 正细胞均一性 急性失血 正细胞不均一性 再障、部分溶贫 小细胞均一性 地中海贫血 小细胞不均一性 缺铁性贫血,思 考,某女性病人，测得红细胞为 2.8*1012/L，血红蛋白为65g/L，血细胞比积0.20。 计算：MCV、MCH、MCHC 该病人属于哪种类型的贫血 下一步检测的方向,网织红细胞计数 （reticulocyte，Ret）,Ret是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间尚未完全成熟的红细胞，其胞质中残存嗜碱性物质（核糖体
17、和RNA），可被某些染料（如煌焦油蓝等）活体染色呈蓝色网状或颗粒状结构，故而得名。,直径：8 9.5 um 骨髓中网织红细胞数比外周血高约3倍,定 义,根据Ret的形态特征和成熟程度分为五型：0 型（花冠型）：有核网织红细胞 型（丝球型）：红细胞几乎被网织物充满 型（网 型）：红细胞中央线团样结构开始松散 型（破网型）：网织结构稀小，呈不规则枝点状排列 型（点粒型）：呈分散的细颗粒、短丝状 ICSH将网织红细胞分为I IV型,方法学选择,手工法（manual）染料： 新亚甲蓝、煌焦油蓝等新亚甲蓝对Ret染色力强且稳定，为WHO推 荐染料。煌焦油蓝应用历史长，但易产生沉淀。,原理： RNA带负电
18、荷，与带正电荷的染料形成复合物，呈深染的颗粒状或彼此连缀成网状结构。凡含两个以上的深染颗粒或具有线网状结构的无核红细胞，即为Ret。,玻 片 法,10 g/L 煌焦油蓝乙醇溶液加染液 加血液 制备涂片 观察，计算混合血液中水分易蒸发，染色时间短，染料沉渣干扰，计数结果不准确。,试 管 法,10 g/L 煌焦油蓝生理盐水溶液染液 + 血液（等量），混匀，置室温 15 20分钟 制备涂片观察、计算 重复性好，染色时间长。,Miller窥盘计数法,将Miller窥盘置于接目镜内，选择红细胞散在且分布均匀的部位计数。,计算1. 网织红细胞%= 1002. 绝对值计算：（ 109/L）,大格网织红细胞总
19、数,小格红细胞总数9,仪 器 法,染料：荧光染料（吖啶橙等） 原理：荧光染色，激光测量。 方法：流式细胞仪网织红细胞计数仪,可同时将Ret分为高荧光强度（HFR）、中荧光强度（MFR）、低荧光强度（LFR） 测量细胞多，避免主观因素的影响，方法易于标准化 如遇NRBC、Howell-Jolly小体、巨大血小板可呈假阳性,Reference value,成人：0.008 0.0225 75 109/L 新生儿：0.02 0.06,临床意义,正常外周血中网织红细胞多为型（0.20.3）和型（0.70.8） 判断骨髓红细胞生成情况 观察贫血疗效的重要指标 骨髓移植后监测其造血功能 放/化疗时骨髓功能
20、监测,网织红细胞其它参数,Reticulocyte maturity index（RMI）RMI =（HFR+MFR）/ LFR100增高：溶贫、ITP、CLL、AL、PV、AA、MM降低：骨髓衰竭、无效造血，如巨幼贫,Reticulocyte production index（RPI）,被测Hct,正常人Hct,表示网织红细胞的生成相当于正常人的多少倍,Ret成熟天数,1,RPI = Ret%,LFR和HFR作为鉴别诊断的初筛指标溶贫：Ret、LFR和HFR升高肾性贫血：HFR升高、LFR降低、Ret正常 IRF（Immature reticulocyte fraction）未成熟网织红细胞
21、比率IRF = MFR + HFR估计骨髓移植后造血恢复的早期指标,点彩红细胞计数 （Basiphilic stippling count）,红细胞在发育过程中受到损害，胞质中残存的嗜碱性物质RNA变性沉淀，瑞氏染色时呈现粗细不等的蓝黑色颗粒。,参考值：0.01% 临床意义：重金属及硝基苯、苯胺中毒、贫血,点彩红细胞（%）=,50个视野内点彩红细胞数,5个视野内红细胞总数10,红细胞沉降率 （Erythrocyte sedimentation rate，ESR）,定义单位时间内红细胞在一定条件下沉降的速度， 以mm/h表示,红细胞与血浆的密度差 离体抗凝血逐渐形成缗钱状红细胞，自然下沉，堆积于
22、试管的底部,原 理,1期：缗钱状红细胞形成期，数分钟10min 2期：快速沉降期，约40 min 3期：红细胞堆积期,血沉过程一般分为三期：,方法选择与评价,手工法魏氏法（Westergren）：简便实用，为血沉测定的标准法温氏法（Wintrobe）、潘氏法 血沉仪法动态记录整个血沉过程的变化，描绘出红细胞沉降的曲线,血沉动态曲线,魏 氏 法,0.4 ml抗凝剂 + 1.6 ml静脉血 将混匀全血吸入血沉管至“0”刻度，拭去管外余血，将血沉管直立于血沉架上 1 h后读取ESR,Reference value,魏氏法成年男性：0 15 mm/h成年女性：0 20 mm/h 潘氏法成年男性：0 1
23、0 mm/h成年女性：0 12 mm/h,影响ESR 的因素,血浆血浆逆阻力 红细胞沉降力血浆蛋白成分 红细胞表面电荷、形状、数量、聚集程度 血沉管与血沉架每倾斜3。，血沉加快30%,白蛋白、卵磷脂ESR,纤维蛋白原、球蛋白、急性反应蛋白ESR,血标本脂肪血ESR；抗凝剂浓度ESR；抽血在30 s内完成，血液凝固ESR 温度18 25，温度ESR 及时测定室温标本2 h；4标本6 h 其它注射器、试管、血沉管干燥洁净，以避免溶血,临床意义,血沉增快生理性： 儿童，妊娠，老年人病理性： 感染或炎症组织损伤及坏死恶性肿瘤贫血慢性肾炎、肝硬化高球蛋白血症、高胆固醇血症,血沉减慢新生儿真性红细胞增多症镰状红细胞贫血等高粘滞性综合征肝病、肿瘤等严重疾病,血沉的测定缺乏特异性，可用于疾病的动态观察以及疗效判断,总 结,
