1、避免 RNA 酶污染的方法RNase 酶非常稳定，是导致 RNA 降解最主要的物质。它在一些极端的条件可以暂时失活，但限制因素去除后又迅速复性。用常规的高温高压蒸气灭菌方法和蛋白抑制剂不能使所有的 RNase 完全失活。为了获得高质量的真核细胞mRNA，必须使用 RNA 酶的抑制剂或采用下述的破碎细胞和灭活 RNA 酶同步进行的方法，最大限度地降低细胞破碎过程中所释放的 RNA 酶的活性。同时，避免偶然引入实验室内其他潜在的痕量 RNA 酶也很重要。下面列举避免 RNA酶污染问题的一些注意事项。大多数有经验的研究者并不拘泥于这些注意事项，只是在遇到问题时可能采用其中的一种或几种方法加以解决。我
2、们谨将下述内容作为解决 RNA 酶污染问题的实验指南。1塑料制品 ：尽可能使用无菌、一次性塑料制品。已标明 RNase-free 的塑料制品，如没有开封使用过，通常没有必要再次处理。对于国产塑料制品，有些厂家提供的产品已达到 RNase-free，可以直接使用，再次处理容易造成二次污染，得不偿失。但原则上国产塑料制品处理后方可使用。处理方法如下：（1）在玻璃烧杯中注入去离子水，加入焦碳酸二乙酯（DEPC）使 DEPC 的终浓度为 0.1%。注意：DEPC 有致癌之嫌，须在通风柜中小心操作。（2）将待处理的塑料制品放入一个可以高温灭菌的容器中，注入 DEPC 水溶液，使塑料制品的所有部分都浸泡到
3、溶液中。（3）在通风柜中 37或室温下处理过夜。（4）将 EDPC 水溶液小心倒入废液瓶中，用铝箔封住含 DEPC 水处理过的塑料制品的烧杯，高温高压蒸气灭菌至少 30 分钟。上述处理可以除去器皿上痕量的 DEPC，以防 DEPC 通过羧甲基化作用对 RNA 的嘌呤碱基进行修饰。（5）用合适的温度（ 80-90）烘烤至干燥，置于干净处备用。2玻璃和金属制品 ： 实验室用的普通玻璃和金属器皿经常有 RNA 酶污染，使用前必须于 180干烤 8 小时或 250烘烤 3 小时以上。另一种方法是用 0.1%的DEPC 水溶液浸泡。3电泳槽： 用于 RNA 电泳的电泳槽应用去污剂洗干净，再用水冲洗，用乙
4、醇干燥，然后灌满 3%的 H2O2 溶液，于室温放置 10 分钟，然后用 0.1%DEPC 处理过的水彻底冲洗电泳槽。最好能留出一些玻璃器皿，塑料制品和电泳槽作上特殊标记，存放在指定地点，为 RNA 实验专用。4移液器： RNase 的又一污染源是移液器。根据移液器制造商的要求对移液器进行处理。一般情况下采用用 DEPC 配制的 70%乙醇擦洗移液器的内部和外部，基本达到要求。移液器金属退头器是 RNA 酶的一个重要来源，实验前最好取下它。5溶液：用高压灭菌的水和 RNA 研究专用的化学试剂配制溶液，用干烤过的药匙称取试剂，将溶液装入无 RNA 酶的玻璃器皿。可能的话溶液应用 0.1% DEPC 水于 37至少处理 12 小时，然后于 100加热 15 分钟或在 15 lbf/in2(1.034105Pa)的高压下蒸气灭菌 30 分钟。注：DEPC 可与胺类迅速发生化学反应，因此不能用来处理含有 Tris 一类的缓冲液，可存几瓶新的，未开封的 Tris 晶体以制备无 RNA 酶的溶液。6研究人员： RNA 酶广泛存在于人的皮肤上，最主要的潜在污染源是研究人员的手。因此，在准备分离和分析 RNA 的材料和溶液时，以及在涉及 RNA 的一切操作过程中，都应戴一次性手套，接触“脏的”玻璃器皿和其他物品以后，手套就可能沾染上 RNA 酶，因此进行 RNA 实验时应勤换手套。
