1、层析介质 要求： （1）不溶于流动相 （2）化学稳定 （3）机械强度 （4）大的表面积 （5）粒度均匀 种类： 无机（氧化铝，硅胶，活性碳）有机（琼脂糖，纤维素，聚丙烯酰胺）氧化铝：多孔，微孔表面具有吸附性能比表面积大分子简单，空间形态复杂（8 种以上）吸附量与含水量关系很大制备：氢氧化铝加热脱水吸附基团：铝离子种类：碱性；酸性；中性应用：有机溶剂中分离天然成分 硅胶：多聚硅酸分子间脱水形成 （1）化学组成 SiO2.XH20 （2）无定形结构 （3）硅胶中的水以羟基的形式和硅原子相连而覆盖于硅胶表面 分类 特细孔硅胶 (0.8nm 以下 )细孔硅胶（1.52.0nm )中孔硅胶 (4.0 一
2、 5.0nm)粗孔硅胶 (10.nm 以上) 应用：优先吸附极性分子及不饱和的碳氢化合物琼脂糖由海洋生物琼脂提取得到的主要成分 中性不带电水溶性线状多糖高亲水性，含大量羟基能制成多孔性凝胶，分离大分子 制备： （1）去除带电琼胶成分 （2）将溶化的琼脂糖采用悬浮,乳化等方法制得珠状介质。 （3）采用交联剂增加介质的机械强度商品种类 Sepharose 2B 分离范围:70,000-40 106 , Sepharose 4B 分离范围： 60,000-20 106 , Sepharose 6B 分离范围（球蛋白）： 10000-410 6 颗粒大小：40-165um: 最高流速 14cm/h 。
3、 经过交联而增加机械强度的琼脂糖 Sepharose CL-2B, Sepharose CL-4B, Sepharose CL-6B 应用 ：水溶液中分离蛋白质葡聚糖 -1,6 相连的 G 聚合物，环氧氯丙烷交联 性质： （1）亲水性比琼脂糖高（羟基数多） （2）化学稳定性及热稳定性好 （3）孔度与机械强度与交联度有关 （4）用于凝胶过滤 应用：水溶液中分离蛋白质等纤维素 -1,4 相连的 D-G 线性天然高聚物 （1）亲水 （2）微晶与无定型两部分组成，缺乏孔度 应用：离子交换分离蛋白质介质聚丙烯酰胺性质：（1）丙烯酰胺与交联剂 N, N-甲叉双丙烯酰胺共聚（2）控制交联剂比例可控制网格孔度
4、（3）亲水性不如多糖介质（4）机械强度差应用：凝胶过滤，电泳1吸附剂的要求对样品组分和洗脱剂都不会发生任何化学反应，在洗脱剂中也不会溶解。 对待分离组分能够进行可逆的吸附，同时具有足够的吸附力，使组分在固定相与流动相之间能最快地达到平衡。 颗粒形状均匀，大小适当，以保证洗脱剂能够以一定的流速（一般为1.5mL.min-1）通过色谱柱。 材料易得，价格便宜而且是无色的，以便于观察。 2、常用吸附剂的种类 氧化铝、硅胶、聚酰胺、硅酸镁、滑石粉、氧化钙（镁）、淀粉、纤维素、蔗糖和活性炭等。 3、几种常见吸附剂的特性（1）氧化铝：市售的层析用氧化铝有碱性、中性和酸性三种类型，粒度规格大多为100150
5、目。 碱性氧化铝（pH910）：适用于碱性物质（如胺、生物碱）和对酸敏感的样品，这种吸附剂能引起被吸附的醛、酮的缩合、酯和内酯的水解、醇羟基的脱水、乙酰糖的去乙酰化等不良副反应。所以，这些化合物不宜用碱性氧化铝分离。 酸性氧化铝（pH3.54.5）：适用于酸性物质如有机酸、氨基酸等以及色素和醛类化合物的分离。 中性氧化铝（pH77.5）：适用于醛、酮、醌、苷和硝基化合物以及在碱性介质中不稳定的物质如酯、内酯等的分离，也可以用来分离弱的有机酸和碱等。 （2）硅胶：硅胶是硅酸的部分脱水后的产物，其成分是SiO2xH2O，又叫缩水硅酸。柱色谱用硅胶一般不含粘合剂。 （3）聚酰胺：色谱用聚酰胺主要又锦
6、纶6（聚己内酰胺）和锦纶66（聚己二酰己二胺）两种，分子量一般在1600020000，其亲水性和亲脂性均较好，因此既可分离水溶性成份，也可分离脂溶性成分。可溶于浓盐酸、甲酸及热的乙酸、甲酰胺和二甲基甲酰胺中；微溶于乙酸和苯酚等；不溶于醇、氯仿、丙酮、乙醚、苯等；对碱稳定，对强酸可水解。 聚酰胺色谱的原理：兼具吸附色谱和分配色谱的功能。采用强极性洗脱剂时主要为吸附色谱正相色谱；采用弱极性洗脱剂时主要为分配色谱反相色谱。 分离对象：能与聚酰胺形成氢键的化合物，如酚类、酸类、醌类、硝基化合物及含羟基、氨基、亚氨基的化合物及腈和醛等类化合物。 聚酰胺在水中吸附能力的规律：形成氢键的基团(如：酚经基、按基、酪基、硝基等) 越多，则吸附力越强。如：丁二酸丁酸 形成氢键的位置与吸附力有很大关系。对位、间位酚羟基使吸附力增大，邻位使吸附力减小。芳香核、共轭双键多者吸附力大，少者吸附人小。若形成分了内氢键，则使化合物的吸附力减小。 （4）硅酸镁：中性硅酸镁的吸附特性介于氧化铝和硅胶之间，主要用于分离甾体化合物和某些糖类衍生物。为了得到中性硅酸镁，用前先用稀盐酸，然后用醋酸洗涤，最后用甲醇和蒸馏水彻底洗涤至中性。
