1、硕士学位论文五味子多糖提取纯化及功能性研究Classified Index: U.D.C:Dissertation for the Master Degree in EngineeringSTUDIES ON EXTRACTION AND FUNCTIONALITY EFFECT OF THE POLYSACCHARIDES IN FRUCTUS SCHIZANDRAE目录I学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，
2、均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名： 日期： 年 月 日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权 大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。涉密论文按学校规定处理。作者签名： 日期： 年 月 日导师签名： 日期： 年 月 日东北农业大学工学硕士学位论文II目录摘要. VAbstract.VII1 引言 . 11.1 五味子的研究概况. 11.1.1 五味
3、子品种考证 . 21.1.2 五味子化学成份研究 . 21.1.3 五味子的功能 . 21.1.4 五味子在食品工业中的应用及其开发前景 . 51.2 多糖的研究概况. 51.2.1 多糖的来源 . 61.2.2 多糖的生物活性 . 81.2.3 多糖的提取和纯化 . 101.2.4 目前多糖研究中存在的问题 . 121.3 立题意义及研究内容. 132 材料与方法 . 152.1 材料和仪器. 152.1.1 原料 . 152.1.2 试剂 . 152.1.3 仪器设备 . 162.2 试验方法. 162.2.1 五味子多糖的提取工艺优化 . 162.2.2 五味子多糖的分级纯化 . 202
4、.2.3 五味子多糖得抗氧化性研究 . 212.2.4 五味子多糖对人肝癌细胞 HepG2 细胞凋亡的影响 . 223 结果与分析 . 253.1 五味子多糖提取工艺参数的选择. 253.1.1 提取次数对得率的影响 . 253.1.2 提取料液比对得率的影响 . 253.1.3 提取温度对得率的影响 . 263.1.4 提取时间对得率的影响 . 273.1.5 提取 pH 值对得率的影响 . 283.1.6 影响提取得率各因素正交分析 . 283.1.7 响应面分析 . 293.1.8 参数选择 . 343.2 五味子粗多糖纯化结果. 343.2.1 醇沉处理效果 . 343.2.2 脱脂效
5、果 . 353.2.3 复合法脱蛋白质效果 . 353.2.4 脱色与透析效果 . 35东北农业大学工学硕士学位论文3.2.5 苯酚硫酸法测五味子多糖的标准曲线 . 363.3 五味子多糖的分级纯化. 363.3.1 DEAE-52 对五味子多糖的分级结果 . 363.3.2 Sephadex G-100 对 SP-2 和 SP-4 的层析结果 . 373.3.3 SP-2a 和 SP-4b 纯度鉴定 . 373.4 SP-2 和 SP-4 的抗氧化性研究 . 383.4.1 SP-2 和 SP-4 对 DPPH清除试验 . 383.4.2 SP-2 和 SP-4 对超氧自由基的清除试验 .
6、393.5 SP-2 和 SP-4 对人肝癌细胞 HEPG2 增殖的影响 . 403.5.1 肝癌细胞 HepG2 的生长曲线 . 403.5.2 五味子多糖 SP-2a 对肝癌细胞 HepG2 的抑制作用 . 413.5.3 五味子多糖 SP-4b 对肝癌细胞 HepG2 的抑制作用 . 433.5.4 形态学观察结果 . 444 讨论 . 454.1 五味子多糖提取工艺的优化 . 454.1.1 提取工艺优化 . 454.1.2 除杂工艺优化 . 464.2 五味子多糖纯化 . 474.3 五味子多糖的抗氧化能力分析 . 484.4 SP-2a 和 SP-4b 对 HepG2 的影响 .
7、494.5 展望 . 505 结论 . 515.1 确定了五味子多糖的最佳提取工艺 . 515.2 五味子多糖的分级纯化 . 515.3 SP-2a 和 SP-4b 的抗氧化研究 . 515.4 SP-2a 和 SP-4b 对 HepG2 凋亡影响 . 52致 谢 . 53参考文献 . 54攻读学位期间发表的论文 . 59CONTENTSIVCONTENTSAbstract. VAbstract.VII1 Introduction . 11.1 Research advance of fructus schizandrae. 11.1.1 Species research of fructus
8、 schizandrae. 21.1.2 Chemical composition of fructus schizandrae . 21.1.3 Function of fructus schizandrae . 21.1.4 Fructus schizandrae was utilized in food industry and prospect . 51.2 Research advance of polysaccharide . 51.2.1 The source of polysaccharide . 61.2.2 The biological activities of poly
9、saccharide . 81.2.3 Extraction and purification of schzandrea. 101.2.4 The problem of polysaccharide actuality . 121.3 Research background and content . 132 Materials and Methods. . 152.1 Test materials and apparatus. 152.1.1 Raw materials . 152.1.2 Chemical reagentes. 152.1.3 Apparatuses . 162.2 Te
10、st methods. 162.2.1 Optimize extract technology of fructus schizandrae ploysaccharide. 162.2.2 Isolation and purification of fructus schizandrae ploysaccharide. 202.2.3 Antioxygen ability of fructus schizandrae ploysaccharide . 212.2.4 Apoptotic HepG2 influenced by fructus schizandrae ploysaccharide
11、 . 223 Results and Discussion . 253.1 Extraction Process Condition of fructus schizandrae ploysaccharide. 253.1.1 Effect of degree on yield diversity . 253.1.2 Effect of volume on yield diversity . 253.1.3 Effect of temperature yield diversity. 263.1.4 Effect of time on yield diversity. 273.1.5 Effe
12、ct of pH on yield diversity . 283.1.6 Orthogonality analysis. 283.1.7 Response surface analysis . 293.1.8 Preferences . 343.2 Purification of fructus schizandrae ploysaccharide . 343.2.1 Effect of alcohol precipitation . 343.2.2 Effect of reduction of lipoid . 353.2.3 Effect of reduction of protein
13、. 353.2.4 Efect of dialysis and reduction of colour. 353.2.5 The standard curve of phenol sulphuric acid . 363.3 Fructus schizandrae ploysaccharide classified. 363.3.1 Fructus schizandrae ploysaccharide classified by DEAE-52 . 363.3.2 SP-2 and SP-4 laminar analysised by Sephadex G-100 . 373.3.3 SP-2
14、a and SP-4b purity appraisement . 373.4 Antioxygenic activity of SP-2 and SP-4. 383.4.1 Test of scavenging DPPH with SP-2 and SP-4. 383.4.2 Test of scavenging superoxide radical with SP-2 and SP-4 . 393.5 The effect of HepG2 proliferation with SP-2 和 SP-4 . 403.5.1 Growth curve of HepG2 . 403.5.2 The depressant effect for HepG2 with SP-2a .
