1、RACE技术,辛德东,一. 实验目的,学习和了解RACE扩增特异基因的实验原理和步骤,二. 实验原理,RACE全名rapid amplification of cDNA ends，快速扩增cDNA末端方法。 扩增：用PCR技术扩增。 cDNA(complementary DNA)与RNA链互补DNA，由反转录酶以RNA为模板合成。,二. 实验原理,RT-PCR方法 RT-PCR的全名是Reverse Transcriptase PCR （反转录酶PCR），其技术原理简单的来说是将一段待测的RNA序列经反转录酶的作用转录成cDNA，再利用PCR技术将基因片段以几何级数倍增的方式增加到数十万倍的方
2、法。,mRNA,逆转录酶,聚合酶,cDNA,PCR扩增,mRNA,二. 实验原理,3RACE技术 是在反转录酶的作用下，以连有可以和polyA配对的oligo(dT)的锚定引物（Adapter primer, AP)启始cDNA第一条链的合成。 用锚定引物和基因片段内部特异引物(GSP1）进行PCR扩增得到目的3片段。,2019/4/26,5,二. 实验原理,6,5 RACE 在反转录酶的作用下，以已知基因片段内部。特异性引物启始cDNA第一条链的合成 。 用末端转移酶在cDNA链3端加入连续的dCTP 。 以连有oligo(dG) 的锚定引物和基因片段内部特异引物进行PCR扩增，以期得到目的片段。,二. 实验原理,溴化乙锭染料的化学结构及其对DNA分子的插入作用。由于插入了溴化乙锭分子，在紫外光照射下，琼脂糖凝胶电泳中DNA的条带便呈现出橘黄色荧光，易于鉴定。,三. 实验内容和操作方法,第二步 3 RACE PCR反应 在PCR仪上设置下列程序： 94 1min 94 30 sec 50 30 sec 72 30s 72 10,30,三. 实验内容和操作方法,第四步 PCR结果的琼脂糖电泳检测 配制琼脂糖凝胶 上样 电泳检测,琼脂糖凝胶电泳,
