1、北京棒杆菌的培养条件北京棒杆菌淀粉的 0.5 一 0. 8 ,ph1. 5 左右,使淀粉乳越过糊化的温度，玉米淀粉糊化过程温度为 55 62. 5 0C;采用 0. 15 M Pa 糖化 110 m ino采用碘量法3对水解淀粉中葡萄糖含量进行测定。1.2.2 菌种扩培采用无菌操作，菌种为北京棒杆菌 AS1. 299,培养温度为320C。一级种了的培养基质量用量配方为葡萄糖 0. 1%、蛋白陈 1.0 %,氯化钠 0. 5% ,琼脂 2. 0%2.5%,ph7.07.2 二级种了的配方为葡糖2.5%,尿素 0.5%、硫酸镁 0. 04% ,磷酸一氢钾 0. 1%、玉米浆2.5%3.5% (按质
2、增减)、硫酸亚铁、流酸锰各 2x10 -6g/Lph7.0 三级种了的配方为葡萄糖 2.5%、玉米浆2.5 %,磷酸一氢钾 0. 1% ,硫酸镁 0. 04%、尿素 0.5%、硫酸亚铁、硫酸锰各 2 x 10-6 g/L pH 6. 5 一 6.8发酵培养基采用葡萄糖浓度 125 一 150g /L,磷酸 2 氢钾 1 一 1. 5 g/L,硫酸镁 0.251.0g/L,硫酸亚铁、硫酸锰各 2x10-6g/L.,玉米浆0.4%0.8%常用 25 种培养基一、牛肉膏蛋白胨培养基(培养细菌用)牛肉膏 3g蛋白胨 10gNaCl 5g琼脂 1520g水 1000mlpH 7072105kg/cm2
3、，1213灭菌 20 分钟。二、淀粉琼脂培养基(高氏 1 号培养基，培养放线菌用)可溶性淀粉 20gKNO3 1gNaCl 05gK2 HPO4 05gMgSO4 05gFeSO4 001g琼脂 20g水 1000mlpH 7274配制时，先用少量冷水，将淀粉调成糊状，在火上加热，边搅拌边加水及其他成分，溶化后，补足水分至 1000ml。105kg/cm2 ，1213灭菌 20 分钟。三、查氏培养基(培养霉菌用，实验 16)NaNO3 2gK2 HPO4 1gKCl 05gMgSO4 05gFeSO4 001g蔗糖 30g琼脂 1520g水 1000mlpH 自然105kg/cm2 ，1213
4、灭菌 20 分钟。四、马丁氏(Martin)琼脂培养基(分离真菌用)葡萄糖 10g蛋白胨 5gKH2 PO4 1gMgSO4 7H2 O 05g1/3000 孟加拉红(rose bengal，玫瑰红水溶液)100ml琼脂 1520gpH 自然蒸馏水 800ml056kg/cm2 (8 磅/英寸 2 )，1126灭菌 30 分钟。临用前加入 003%链霉素稀释液 100ml，使每毫升培养基中含链霉素 30g。五、马铃薯培养基 (实验 16)马铃薯 200g蔗糖(或葡萄糖) 20g琼脂 1520g水 1000mlpH 自然马铃薯去皮，切成块煮沸半小时，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，溶化后补足水至
5、1000ml。105kg/cm2 ，1213灭菌 20分钟。六、麦芽汁琼脂培养基 (实验 15)1取大麦或小麦若干，用水洗净，浸水 612 小时，置 15阴暗处发芽，上盖纱布一块，每日早、中、晚淋水一次，麦根伸长至麦粒的两倍时，即停止发芽，摊开晒干或烘干，贮存备用。2将干麦芽磨碎，一份麦芽加四份水，在 65水浴锅中糖化34 小时，糖化程度可用碘滴定之。3将糖化液用 46 层纱布过滤，滤液如混浊不清，可用鸡蛋白澄清，方法是将一个鸡蛋白加水约 20ml，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。4将滤液稀释到 56 波美度，pH 约 64，加入 2%琼脂即成。105kg/cm2 ，12
6、13灭菌 20 分钟。七、葡萄糖-醋酸盐培养基 (实验 15)葡萄糖 1g酵母浸膏 25g醋酸钠 82g琼脂 15g蒸馏水 1000mlpH 48分装试管，070kg/cm2 (10 磅/英寸 2 )，1152灭菌 20分钟后制成斜面。八、半固体肉膏蛋白胨培养基 (实验 26)肉膏蛋白胨液体培养基 100ml琼脂 03504gpH 76105kg/cm2 ，1213灭菌 20 分钟。九、合成培养基 (实验 36，39)(NH4 )2 PO4 1gKCl 02gMgSO4 7H2 O 02g豆芽汁 10ml琼脂 20g蒸馏水 1000mlpH 70加 12ml004%的溴甲酚紫(pH5268，颜
7、色由黄色变紫色，作指示剂)。105kg/cm2 ，1213灭菌 20 分钟。十、豆芽汁蔗糖(或葡萄糖)培养基 (实验 37，38)黄豆芽 100g蔗糖(或葡萄糖) 50g水 1000mlpH 自然称新鲜豆芽 100g，放入烧杯中，加水 1000ml，煮沸约半小时，用纱布过滤。用水补足原量，再加入蔗糖(或葡萄糖)50g，煮沸溶化。105kg/cm2 ，1213灭菌 20 分钟。十一、油脂培养基 (实验 40)蛋白胨 10g牛肉膏 5gNaCl 5g香油或花生油 10g16%中性红水溶液 1ml琼脂 1520g蒸馏水 1000mlpH 72105kg/cm2 ，1213灭菌 20 分钟。注：1不能
8、使用变质油。2油和琼脂及水先加热。3调好 pH 后，再加入中性红。4分装时，需不断搅拌，使油均匀分布于培养基中。十二、淀粉培养基 (实验 40，45)蛋白胨 10gNaCl 5 克牛肉膏 5 克可溶性淀粉 2g蒸馏水 1000ml琼脂 1520g105kg/cm2 ，1213灭菌 20 分钟。十三、明胶培养基 (实验 40)牛肉膏蛋白胨液 100ml明胶 1218gpH 7274在水浴锅中将上述成分溶化，不断搅拌。溶化后调 pH7274。056kg/cm2 (8 磅/英寸 2 )，1126灭菌 30 分钟。十四、蛋白胨水培养基 (实验 42)蛋白胨 10gNaCl 5 克水 1000mlpH
9、76105kg/cm2 ，1213灭菌 20 分钟。十五、糖发酵培养基 (实验 41)蛋白胨水培养基 1000ml酸性复红水溶液 25mlpH 76另配 20%糖溶液(葡萄糖、乳糖、蔗糖等)各 10ml。制法：1将上述含指示剂的蛋白胨水培养基(pH76)分装于试管中，在每管内放一倒置的小玻璃管，使充满培养液。2将已分装好的蛋白胨水和 20%的各种糖溶液分别灭菌，蛋白胨水 105kg/cm2 ，1213灭菌 20 分钟；糖溶液 056kg/cm2 (8 磅/英寸 2 )，1126灭菌 30 分钟。3灭菌后，每管以无菌*作分别加入 20%的无菌糖溶液05ml(按每 10ml 培养基中加入 20%的
10、糖液 05ml，则成 1%的浓度)。配制用的试管必须洗干净，避免结果混乱。05%酸性复红水溶液 100ml 加 1mol/LNaOH16ml 即成。十六、葡萄糖蛋白胨水培养基 (实验 42)蛋白胨 5g葡萄糖 5gK2 HPO4 2g蒸馏水 1000ml将上述各成分溶于 1000ml 水中，调 pH7072，过滤。分装试管，每管 10ml，056kg/cm2 (8 磅/英寸 2 )，1126灭菌 30 分钟。十七、H2 S 试验用培养基 (实验 42)蛋白胨 20gNaCl 5g柠檬酸铁铵 05gNa2 S2 O3 05g琼脂 1520g蒸馏水 1000mlpH 72先将琼脂、蛋白胨溶化，冷至
11、 60加入其他成分。分装试管，056kg/cm2 (8 磅/英寸 2 )，1126灭菌 15 分钟，备用。十八、柠檬酸盐培养基 (实验 42)NH4 H2 PO4 1gK2 HPO4 1gNaCl 5gMgSO4 02g柠檬酸钠 2g琼脂 1520g蒸馏水 1000ml1%溴麝香草酚蓝酒精液 10ml将上述各成分加热溶解后，调 pH68，然后加入指示剂，摇匀，用脱脂棉过滤。制成后为黄绿色，分装试管，105kg/cm2 ，1213灭菌 20 分钟后制成斜面。十九、土霉素效价测定用培养基 (实验 44)培养基(供培养试验菌用)蛋白胨 5g酵母膏 3g牛肉膏 15gNaCl 35g葡萄糖 1gK2
12、HPO4 368gKH2 PO4 132g琼脂 2025g蒸馏水 1000mlpH 72105kg/cm2 ，1213灭菌 20 分钟。培养基(供摊布双碟的上，下层用)蛋白胨 6g酵母膏 6g牛肉膏 15g葡萄糖 1g琼脂 1518g蒸馏水 1000mlpH 68105kg/cm2 ，1213灭菌 20 分钟。二十、酪蛋白培养基 (实验 46)KH2 PO4 036gNa2 HPO4 12H2 O 13gNaCl 01gZnSO4 7H2 O 002gCaCl2 2H2 O 0002g酪素 4g酪素水解氨基酸 005g琼脂 1520g蒸馏水 1000mlpH 7072先称取 4g 酪素，再加入
13、 05mol/LNaOH 约 2ml，将酪素溶解；然后依次加入其他药品，最后调 pH7072。056kg/cm2 (8磅/英寸 2 )，1126灭菌 30 分钟。二十一、完全培养基(TYEG 培养基) (实验 47)胰蛋白胨 10g酵母浸膏 5gK2 HPO4 3g葡萄糖 1g琼脂 1520g蒸馏水 1000mlpH 70105kg/cm2 ，1213灭菌 20 分钟。二十二、基本培养基(MM 培养基) (实验 47)(NH4 )2 SO4 1gK2 HPO4 7gKH2 PO4 3g柠檬酸钠 05gMgSO4 7H2 O 01g葡萄糖 5g琼脂 1520g蒸馏水 1000ml105kg/cm
14、2 ，1213灭菌 20 分钟。二十三、复红亚硫酸钠培养基(远藤氏培养基) (实验 60，61)蛋白胨 10g乳糖 10gK2 HPO4 35g琼脂 2030g蒸馏水 1000ml无水亚硫酸钠 5g 左右5%碱性复红乙醇溶液 20ml先将琼脂加入 900ml 蒸馏水中，加热溶解，再加入磷酸氢二钾及蛋白胨，使溶解，补足蒸馏水至 1000ml，调 pH 至 7274。加入乳糖，混匀溶解后，070kg/cm2 (10 磅/英寸 2 )，1152灭菌 20 分钟。称取亚硫酸钠置一无菌空试管中，加入无菌水少许使溶解，再在水浴中煮沸 10 分钟后，立刻滴加于 20ml5%碱性复红乙醇溶液中，直至深红色褪成
15、淡粉红色为止。将此亚硫酸钠与碱性复红的混合液全部加至上述已灭菌的并仍保持溶化状态的培养基中，充分混匀，倒平皿，放冰箱备用。贮存时间不宜超过 2 周。二十四、伊红美蓝培养基(EMB 培养基) (实验 60，61)蛋白胨水琼脂培养基 100ml20%乳糖溶液 2ml2%伊红水溶液 2ml05%美蓝水溶液 1ml将已灭菌的蛋白胨水琼脂培养基(pH76)加热溶化，冷却至60左右时，再把已灭菌的乳糖溶液、伊红水溶液及美蓝水溶液按上述量以无菌*作加入。摇匀后，立即倒平板。乳糖在高温灭菌易被破坏必须严格控制灭菌温度，一般是 070kg/cm2 (10 磅/英寸 2 )，1152灭菌 20 分钟。二十五、乳糖蛋白胨培养液(“水的细菌学检查”用) (实验60、61)蛋白胨 10g牛肉膏 3g乳糖 5gNaCl 5g16%溴甲酚紫乙醇溶液 1ml蒸馏水 1000ml将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及 Nacl 加热溶解于 1000ml 蒸馏水中，调 pH 至 7274。加入 16%溴甲酚紫乙醇溶液 1ml，充分混匀，分装于有小倒管的试管中。070kg/cm2 (10 磅/英寸 2 )，1152灭菌 20 分钟。
