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DF-1细胞培养.doc

上传人:yjrm16270 文档编号:6814850 上传时间:2019-04-23 格式:DOC 页数:2 大小:33KB
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DF-1 细胞的传代培养和保存(一) 材料DMEM 细胞培养液:10% 的 DMEM 细胞培养液,含 10%胎牛血清。培养温度: 39.0C; (最大. 40.0 C, 最小 . 38.0C)胰酶-EDTA 消化液:0.25% (w/v) 胰酶- 0.53 mM EDTA 溶液。(二) 方法1. 弃掉细胞培养液。2. 用胰酶-EDTA 消化液冲洗细胞单层,除掉残余的细胞培养液。3. 向细胞瓶内加入 2.0 到 3.0 ml 的胰酶-EDTA 消化液,在倒置显微镜下观察细胞直到细胞单层分散开来(一般 5-15 分钟) 。注意: 消化细胞时禁止剧烈拍打或摇晃细胞瓶,不易消化的细胞可以放到 39C 助消化。 4. 加入 6.0 到 8.0 ml 的 DMEM 培养基至细胞瓶,轻轻吹吸混匀消化细胞。5. 取出部分细胞加入到新的细胞瓶中培养。6. 在 39C 培养。传代率:一般推荐 1:2 到 1:10 传代。注:1:2 指一瓶传两瓶。(三)保存: 10%CS 的 DMEM 细胞培养液加入 5% DMSO。保存温度: 液氮保存

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