1、 防风高效液相色谱法关键词 防风；高效液相色谱法；大庆；升麻苷；5-o-甲基维斯阿米醇苷key words saposhnikovia divaricata (turcz.) schischk.; high performance liquid chromatography; daqing; prim-o-glucosylcimifugin; 4-o-beta-glucopyranosyl-5-o-methyl visamminol防风为伞形科植物防风.能解表祛风，胜湿止痉，用于感冒头痛、风湿痹痛、风疹瘙痒及破伤风等症。防风中的化学成分包括色原酮、挥发油、香豆素、杂多糖等类物质，药理实验表明，
2、其具有解热、镇痛、镇静、抗炎、抗过敏、抗惊厥和增强机体非特异性免疫功能的作用。 中国药典2010 年版中以防风中的升麻苷及5-o-甲基维斯阿米醇苷为主要成分进行含量测定，近年来也有人根据实际需要建议测量其中的多种有效成分以完善防风药材的质量控制。本文参考中国药典2010 年版标准，对黑龙江省大庆市不同地区防风中升麻苷及 5-o-甲基维斯阿米醇苷的含量进行对比分析，旨在建立大庆地区的防风质量标准，为防风药材的质量评价及合理使用提供参考依据。1 仪器与试药1.1 仪器岛津 lc-20a 型高效液相色谱仪（日本岛津公司） ，配有紫外检测器，色谱柱为 inertsil ods-sp（4.6 mm150
3、 mm，5 m） ；model c3860 超声仪（cbl photoelectron technology co. lid.） ；esj 万分之一电子天平（沈阳龙腾电子有限公司） 。1.2 试药升麻苷（批号：111522-201005）及 5-o-甲基维斯阿米醇苷（批号：111523-201005）均购自中国药品生物制品检定所；甲醇为分析纯，水为吉林产娃哈哈纯净水；防风所有样品经哈尔滨医科大学大庆校区药学系刘金杰教授鉴定，均为伞形科植物防风saposhnikovia divaricata （turcz.） schischk.的根。2 方法与结果2.1 色谱条件流动相：甲醇-水（4060） ，
4、流速：1 ml/min，检测波长：254 nm，进样量：10 l。理论塔板数按升麻苷计算，不低于 2 000。按 5-o-甲基维斯阿米醇苷计算，不低于 2 500。2.2 对照品溶液的制备6精密称取升麻苷对照品 4.6 mg 置于 10 ml 容量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度；精密称取 5-o-甲基维斯阿米醇苷对照品5.5 mg 置于 10 ml 容量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，作为对照品溶液。2.3 供试品溶液的制备取防风药材 0.25 g 精密称定，置于 50 ml 圆底烧瓶中，加入甲醇 10 ml，称重，水浴回流 2 h，甲醇补足失重，过 0.45 m 微孔滤膜，进样 10 l
5、。按上述条件分别进样，得升麻苷对照品、5-o-甲基维斯阿米醇苷对照品、防风样品的 hplc 色谱图。见图 1。2.4 标准曲线的绘制分别准确量取升麻苷对照品和 5-o-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液各 0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ml 置于同一 5 ml 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，取 10 l 进样，按上述色谱条件进行分析测定，以峰面积 y（mv）为纵坐标，对照品溶液浓度 x（mg/ml）为横坐标，进行回归计算。结果得升麻苷的标准曲线为 y=23 659x-3 276.6，r=0.999 9（n=6） ，线性范围为 18.492.0 g/ml。5-o-甲基维斯阿米醇苷的标准曲线为
6、 y=21 217x-8 217.8，r=0.999 8（n=6） ，线性范围为 22.0110.0 g/ml。表明两种成分在检测范围内线性关系良好。2.5 精密度试验分别精密量取升麻苷及 5-o-甲基维斯阿米醇苷的对照品溶液各0.5 ml，置于同一 5 ml 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，取 10 l进样，重复进样 6 次，记录峰面积，计算 rsd 分别为 0.87%和1.04%，rsd 均小于 3%，表明仪器精密度良好。2.6 重复性试验精密称取同一产地的防风药材 6 份，按照“2.3”项下方法制备供试品溶液并进行测定，得到相应的峰面积，计算 rsd 分别为2.67%和 2.23%，rsd
7、均小于 3%，表明方法的重复性良好。2.7 稳定性试验取同一供试品溶液，在上述色谱条件下，分别于0、2、4、6、8、10、12 h 测量，结果在 12 h 内样品中的升麻苷及 5-o-甲基维斯阿米醇苷的峰面积 rsd 均小于 3%，表明样品在 12 h 内稳定。2.8 加样回收率试验精密称取 6 份已知含量的防风药材粉末 0.25 g，分别加入对照品溶液适量，按“2.3”项下方法制备供试液并分析，结果显示，样品加样回收率在 98.6%104.3%，rsd 小于 3.0%。2.9 样品含量测定按“2.3”项下方法制备样品，每份样品测量 3 次，取平均值。见表 1。3 讨论3.1 前期处理方法的考
8、察对比了回流提取法及超声提取法对于有效成分含量的影响，结果表明，回流提取法优于超声提取法，故选择前者作为提取方法。3.2 色谱条件的建立流动相的选择：对比了乙腈-水及甲醇-水对于色谱峰的影响，采用乙腈-水为流动相得到的色谱峰杂峰较多，很难实现分离；而采用经典的甲醇-水为流动相得到的色谱峰峰形简洁明了，主要成分分离度高，十分理想，故选用甲醇-水为流动相。流速的选择：分别考察了 0.8、1.0、1.2 ml/min 流速下峰形的变化，以 1.0 ml/min 得到的色谱峰最为理想。色谱柱的选择：综合考察了安捷伦色谱柱 eclipse xdb-c18（4.6 mm150 mm，5 m）及岛津色谱柱
9、inertsil ods-sp（4.6 mm150 mm，5 m）的出峰率、分离度等情况，最终选择岛津色谱柱开展实验。3.3 实验结果的分析由表 1 含量测定结果可知，大庆市各个地区所产防风均符合中国药典2010 年版标准（药典规定升麻苷及 5-o-甲基维斯阿米醇苷总含量不得低于 0.24%） ，其中，杜尔伯特及肇源地区所产防风中有效成分总含量偏高，可作为质量参考的依据。参考文献1 国家药典委员会.中国药典s.一部.北京:化学工业出版社,2005:102.2 杨震,孙黎,王炜佳.防风成分的药理活性研究进展j.黑龙江医药,2005,18(1):36-37.3 王成章,张崇禧.防风国内外研究进展j.人参研究,2008,15(1):35.4 曾丽君,孙启时,贾凌云.rp-hplc 法同时测定不同产地及不同部位防风中 4 种有效成分的含量j.沈阳药科大学学报,2009,26(2):127-130.5 马力杰,杨滨,冯学峰,等.野生与栽培防风中升麻苷和 5-o-甲基维斯阿米醇苷的含量测定及指纹图谱分析j.中国中药杂志,2010,35(13):1731-1734.6 李悦悦,王慧,陈俊,等.hplc 法测定防风中升麻苷、升麻素、5-o-甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷的含量j.药学实践杂志,2010,28(6):445-447.
