1、植物组织中还原糖含量的测定应用化学 1101A20110001程志永植物组织中还原糖含量的测定 程志永（东北农业大学理学院应用化学系，哈尔滨，150000）摘要：本实验以葡萄糖为标准，以 3,5- 二硝基水杨酸(DNS)作显色剂，用分光光度法测定黄瓜中还原糖的含量。在碱性条件下，3，5二硝基水杨酸与还原糖共热后被还原成棕红色的 3氨基5硝基水杨酸，该物质在 540nm 波长处有最大吸收。在一定浓度范围内，还原糖的量与棕红色物质的光吸收值成正比例关系，利用比色法可定量测定样品中的含糖量。关键词：还原糖；分光光度法；3,5-二硝基水杨酸中图分类号：Q5-33 文献标志码：A引言DNS 比色法的原理
2、是：3,5-二硝基水杨酸在碱性溶液中被还原糖还原成氨基化合物，在沸水浴中显色时间 5min，波长在 540nm 下有最大吸收峰。试验过程中的诸多因素如吸收光谱、显色剂用量、显色时间等均对测定结果的准确性有直接影响。因此，我们对用 3,5-二硝基水杨酸比色法测定马铃薯块茎还原糖含量的反应条件进行了一系列的试验，试图摸索最佳的试验条件以保证试验的精确度，以期获得可靠的数据为黄瓜品质育种的实践提供参考。1 材料与方法1.1 实验材料1.1.1 供试药剂3,5-二硝基水杨酸；蒸馏水；葡萄糖溶液。1.1.2 供试植物材料黄瓜 0.96g1.2 实验方法1.2.1 葡萄糖标准曲线的制作称取 0.0502g
3、 葡萄糖，定容至 500ml；吸取葡萄糖标准液0、0.20、0.30、0.40、0.60、0.80mL，分别置于 10mL 试管中，编号 1、2、3、4、5、6，各加蒸馏水使体积为 1.0mL，再加苯酚试液 0.51mL，摇匀，迅速滴加浓硫酸 2.5 mL，摇匀后放置 5min，置沸水浴中加热约 15min，取出后冷却至室温。以一号试管为对照组。用721 分光光度计，1cm 比色皿，在 490nm 处测定吸光度，绘制葡萄糖浓度-吸光度工作曲线。1.2.2 样品中还原糖含量的测定1.2.2.1 还原糖的提取准确称取样品 0.5g，用少量蒸馏水研磨成匀浆，然后加入蒸馏水定容至 50mL，摇匀，置于
4、 50恒温水浴中保温 10min，使还原糖浸出，移入离心管，4000r/min 下离心 10min，取上清液。1.2.2.2 显色和比色取 4 支试管，编号，按表 1 所示加入待测液和显色剂。表 1 还原糖的显色和比色管号 还原糖待测液（mL） 蒸馏水（mL） DNS(mL)1 2.0 0.0 1.52 2.0 0.0 1.53 2.0 0.0 1.50 0.0 2.0 1.5摇匀后，沸水浴保温 5min，冷却至室温，分别定容至 25mL，在 540nm 下进行比色。2 结果与分析2.1 葡萄糖标准曲线2.2 还原糖含量测定通过对黄瓜中还原糖含量的测定，得出结果如表 2表 2 黄瓜中还原糖含量
5、管号 1 2 3吸光值 A 0.407 0.403 0.386平均吸光值 A 0.399还原糖含量（%） 1.7%3 讨论（1） 研磨黄瓜时，黄瓜皮不容易研磨，应尽量选择黄瓜肉。（2） 在 50水浴时间要足够，否则会影响还原糖的测定。（3） 标准曲线制作与样品含糖量测定应同时进行，一起显色和比色。 4 结论利用 3,5-二硝基水杨酸比色法测定马铃薯还原糖含量，发现本实验方法比较方便快捷、安全、准确、低成本 DNS 比色法，适合于植物还原糖含量的批量和定量测定。参考文献1 罗志刚, 曾满枝, 凌晨, 等. 3 ,5-二硝基水杨酸比色法测定烟草中水溶性总糖J.中国烟草科学.2000(2):34-3
6、6.2 林颖, 吴毓敏. 天然产物中的糖含量测定方法正确性的研究J. 天然产物研究与开发, 1996, 8(4): 5-9.3 王照利, 吴万兴, 李科有 . 魔芋精粉中甘露聚糖含量的测定研究J.食品科学,1998(3):56-58.4 许庆芬, 吕文河, 石瑛, 等. 马铃薯块茎还原糖的测定方法比较J.中国马铃薯, 2004, 6(18): 338-340.5 张惟杰. 糖复合物生化研究技术M. 杭州: 浙江大学出版社, 1994: 14.6 NAGIE N, IBSEN K, JENNINGS E. A process economic approach todevelopadilute-acidcellulosehydrolysisprocesstoproduceethanolfrombiomassJ.ApplBiochemBiotechnol,1999(77-79):599-607.7 大连轻工业学院, 等.食品分析M. 北京:中国轻工业出版社,1994:10.8MILLERGL.UseofdinitrosalicylicacidreagentfordeterminationofreducingsugarJ.AnalChem,1959,31(3):426-428.
