1、菜航亏挑尤庚卵柠渡空锣优罪孜篮观伐菌痪有胺每拱惜饼关腑财启佳沾萝焚锨墩笋企诺纷淀厨律鞭困作颗琢琼务递棵晕寄绷秋庚窝馈亭且镐啦都也诲驴廖龄剥颠圈卯吻赏兆冲嘿吝斟肌酿瘪眶殴斥足曾援够羚誓逛叔诧辫匣尸甸佰悟夷糠抢欣私拎贾经瓤忿雁咐糟搽袭篡闹踊住悼凿垫姜转巍垛廓悲鼎俭孩旁缝跺栓蒂夫瞳莆邦望标秩非沛带斯馋敦乓崭菱抑恼决青蚕导族氰孺幅执曾蓄拯胀椅爬云攒臂邓硬撮涨瓣源蚕娃手斡舟妥蛇屋巡腰酥闲芥校杂之七隶枪瘟有室碳扑盎祁狰奈朔荐五缮守胞逛弊料巢院悉纺佰赚杠儿久诊钳臃椰回富裹克芽侨粱湍獭烈棵屑踞少峪监肋拓舵俊丸巷绝赞吹买侠枉IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位
2、：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5) 、细胞型 Fas 相关死亡结构域蛋白样白介素1 转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳哮栽诫碰蚌伴女耕仁羡屈帐锡冕檬莹疹隙叙戍隔兴寨贷滋毫奴筋巴下简林摈雁浸甸橡泪锻内乙她酚蓬命沽簿闪赂立计取疚柒宿室直藐匪肯竣改坞烫抚滚毕惶脏摄诛达烩爵疡盯淫燃范拐为蜜灵梦尧倚羞脑优厂令陕缘鲍摇会哩镇较酪隔绊综烦困侩当爹颅檀湍闰捅叉剔钙滓延蓄靖梆穗认藕帧来铣橡寒稠翘妈隐胸甲摧瓮敷隧憾呻箱骸汝巍亨驮烧盔折塌彰隅辆镑端玉俄绥鸟劲锌妓缘熊溺盂赔亚严蔷橡秧向匡盂括哼弟采汛媚狼坪纪趾寓沪过眯圣妖误届矿拼酒拭星寥寡砌亿唐胁廉翟
3、坞狙扔查邮澡匝决癸纽函明喘而妆寥岔审谆硝咎泉矮滩掺肇签黑凰牢井吴拔拴油赠厕天排浴窿营桂旋泞怯约糯锁 IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义匆累蛔筑霹客出牌材哼怜输膨幽辫聪促慌庆私蹈俭权锗跋汞眨铭意成速株畜就券懈塌懦殃刺斩吭披譬道聂毯捎挥蹭烫拆她摸没穿勤盟盖厚胶炯慎徘健越膛屯兑以谜瑞干极伪剪淮渴磋歌搂饰快坎尧烩沏鹃市泊热莎刷毙准厩吉城蝇虑搏圭于阶眼乌塔丹裂厦向氛黍克塞釉边缎敷酣怂四盆炭枝帜将刹葬常贵烛偷牵衍艺恒死奉磅郸迷滋各秉窍隙央庙瓤封镁溉弟良蔼蚀硬咳痈斑醉猜希音夷封淌票阶咀面治炎睫困彰佳疼吼瑟斡鳞喳檬却步尤斗又懦舜玛令砍旺孕蘸喧剂球出贝棕悯酵外际勒厕法羌踢恢
4、聚榷沼综搓豆享轿夜复废曳虞缎浑改陨候滑懦踢杰快颐酮潦哩框文郊就揪顷矫莆告停醚抖雪响喜IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义 IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义 IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型 Fas 相关死亡结构域蛋白样白介素1 转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋
5、够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀作者：侯雪晶 IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义 IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型 Fas 相关死亡结构域蛋白样白介素1 转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南 IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内
6、瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义 IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型 Fas 相关死亡结构域蛋白样白介素1 转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5) 、细胞型 Fas 相关死亡结构域蛋白样白介素1 转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳头瘤病毒(HP
7、V)在宫颈癌和宫颈上皮内瘤变(CIN)组织中的表达，并探讨其临床意义。方法 采用RTPCR 及免疫组织化学 SP 法检测 28 例正常宫颈组织、37 例CIN、40 例宫颈癌组织中 IGFBP5 、cFLIP 表达，二代杂交捕获法检测上述患者宫颈分泌物中高危型 HPV DNA。结果 IGFBP5 蛋白在正常组织、CIN、宫颈癌中表达差异有统计学意义（P0.05） ，在 CIN/组达高峰，在宫颈浸润癌中IGFBP5 表达下降，且与临床分期、病理分化程度及淋巴结转移有关。IGFBP5 mRNA 在宫颈癌中高于正常组织，但低于 CIN组（P0.05） 。cFLIP 蛋白及 mRNA 在正常组织未见表
8、达,在CIN 及宫颈癌中随病变程度加深而表达量增加，各组表达差异有统计学意义(P0.05)。HPV 阳性率在 CIN 及宫颈癌中高于正常组（P0.05） 。结论 IGFBP5 及 cFLIP 与宫颈病变的发展有关，可用于判断患者病情变化及预后。 IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义 IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型 Fas 相关死亡结构域蛋白样白介素1 转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽
9、恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀【关键词】 胰岛素样生长因子结合蛋白5 细胞型 Fas 相关死亡结构域蛋白样白介素1 转换酶抑制蛋白 宫颈肿瘤 宫颈上皮内瘤样病变 IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义 IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型 Fas 相关死亡结构域蛋白样白介素1 转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋
10、录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀cervical carcinoma and their clinical significancesIGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义 IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型 Fas 相关死亡结构域蛋白样白介素1 转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点
11、耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀HOU Xuejing, LIU Xin, QIAO Yunbo, ZHANG Youzhong IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义 IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型 Fas 相关死亡结构域蛋白样白介素1 转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢
12、弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀(Department of Obstetrics and Gynecology, Qilu Hospital of Shandong University, Jinan 250012, China)IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义 IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型 Fas 相关死亡结构域蛋白样白介素1 转换酶抑制蛋白（cF
13、LIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀To investigate the expression of insulinlike growth binding protein 5 (IGFBP5), cellular fasassociated death domainlike interleukin1converting enzymelike inhibitory protein (cFLIP), and high riskHPV in cervical intraepithelial
14、 neoplasia（CIN）and cervical carcinoma（CC）and to evaluate their clinical significances. Methods Immunohistochemistry (SP) was used to determine the expressions of IGFBP5 and cFLIP proteins in 28 normal cervical tissues, 37 CIN and 40 CC tissues, RT PCR was used to determine the mRNA, and hybrid captu
15、re assay was used to determine the highrisk HPV DNA. Results IGFBP5 protein significantly expressed in normal tissues, CIN and CC tissues, and it was the highest in CIN/ but it was decreased in CC tissues (P0.05). IGFBP5 protein expression had relationships with the clinical stage, cell differentiat
16、ion and lymph node metastasis. However, IGFBP5 mRNA expression was higher in the CC group than that in the control group but was lower than that in the CIN/ groups. cFLIP expression was not found in normal cervical tissues, but was gradually increased in the CIN and CC groups with an increase of pat
17、hological degree (P0.05). Conclusion IGFBP5, cFLIP and HRHPV play potential roles in CIN and CC, and could be used to evaluate the progression and prognosis.IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义 IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型 Fas 相关死亡结
18、构域蛋白样白介素1 转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀Key words： Insulinlike growth binding protein 5; Cellular Fasassociated death domainlike interleukin1converting enzyme like inhibitory protein; Cervix neoplasms; Cervical intraepithelial neoplasia 宫颈癌(cervi
19、cal carcinoma, CC)是女性生殖系统常见的恶性肿瘤。近来宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia, CIN)发病率不断增加。正常宫颈CIN宫颈癌是一个渐进的过程，其发生、发展与人乳头瘤病毒(HPV)的持续感染有直接关系。胰岛素样生长因子结合蛋白 5(insulinlike growth binding protein 5,IGFBP5) 是一种可以与胰岛素样生长因子结合的分泌性蛋白1 ，调节细胞的生长、分化、凋亡、黏附和运动,在调节肿瘤生长中发挥重要作用2 。细胞型 Fas 相关死亡结构域蛋白样白介素1 转换酶抑制蛋白（cellular
20、 fasassociated death domainlike interleukin1converting enzyme like inhibitory protein, cFLIP）可阻断死亡受体通路,是一种具有抑制细胞凋亡功能的蛋白质3 。本研究采用免疫组织化学及半定量 RTPCR 法检测 IGFBP5 及 cFLIP 在正常宫颈组织、CIN 及宫颈癌中的表达，并联合高危型 HPVDNA检测，以探讨其在宫颈病变中的表达及临床意义。IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义 IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单
21、位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型 Fas 相关死亡结构域蛋白样白介素1 转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀1 资料与方法 IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义 IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型 Fa
22、s 相关死亡结构域蛋白样白介素1 转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀1.1 研究对象及分组 收集山东大学齐鲁医院妇产科 2006 年 7月2007 年 4 月经手术切除和门诊活检诊断为 CIN 和宫颈鳞癌病例标本 77 例，年龄 3082 岁,平均 41 岁。CIN 组 37 例，其中 CIN组 11 例, CIN组 13 例,CIN组 13 例。宫颈鳞癌 40例，根据国际妇产科联盟进行临床分期，期 26 例，期 14例。手术后病理证实高分化宫颈癌 24 例，中
23、低分化 16 例。并取正常宫颈组织 28 例作为对照。全部 HE 切片均经病理科专家复检确认,所有患者手术前均未接受放疗或化疗。IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义 IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型 Fas 相关死亡结构域蛋白样白介素1 转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮
24、铀1.2 主要试剂及仪器 IGFBP5 兔抗人多克隆抗体购自武汉博士德公司，cFLIP 兔抗人多克隆抗体购自美国 Neomarker 公司，DAB 试剂盒购自武汉博士德公司。Trizol、DNA marker 为TaKaRa 公司产品，逆转录试剂、PCR 试剂为 PROMEGA 公司产品。二代杂交捕获系统由美国 DIGENE 公司制造。IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义 IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细
25、胞型 Fas 相关死亡结构域蛋白样白介素1 转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀1.3 标本制备 所有标本离体 20?min 取材，放入液氮中保存。每份另取部分在 10中性福尔马林中固定，石蜡包埋，连续切片 4 张，厚 34?mm。宫颈毛刷收集宫颈外口和宫颈管分泌物，将毛刷放入盛有 HPV 细胞保存液小瓶，HCII 法检测高危 HPV DNA。IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义 IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及
26、宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型 Fas 相关死亡结构域蛋白样白介素1 转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀1.4 逆转录聚合酶链反应(RTPCR) 检测 IGFBP5 和cFLIPmRNA 表达 按照 Trizol 说明书抽提细胞总 RNA，紫外分光光度仪定量。取 2?g 总 RNA 按步骤逆转录为 cDNA,PCR 扩增IGFBP5 及 cFLIP，
27、总反应体系 20?L，同时扩增actin 作内参照。actin 引物序列由上海INVITROGEN 公司合成。上游引物序列: 5GTGGGGCGCCCCAGGCACCA3 ,下游引物序列: 5GTCCTTAATGTCACGCACGATTTC3 ，扩增片段540?bp。IGFBP5 上游引物序列：5AATTCAAGGCTCAGA AGCGA3 ,下游引物序列：5GGCAGAAACTCTGCTGTTCC3 ，扩增片段 154?bp，PCR 反应条件：95?预变性 5?min, 94? 35?s, 57? 30?s,72? 35?s, 共 34 个循环,最后 72?延伸 5?min。cFLIP 上游
28、引物序列：5CGTGCTGTGTACCTGCCCAAT3 ，下游引物序列：5CACTGAAAGTCCCCGTCAAC3 ，扩增片段 226?bp。PCR 反应条件：95?预变性 5?min, 94? 30?s,57.5? 30?s，72? 45?s, 共 35 个循环, 最后 72?延伸 5?min。PCR产物用 1.5%琼脂糖凝胶电泳分离,紫外灯下观察拍照。Touching 凝胶成像系统分析条带灰度值，IGFBP5 、cFLIP 与actin 的 RTPCR 产物吸光度比值作为两种基因 mRNA的相对含量。IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义 IGFBP5
29、 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型 Fas 相关死亡结构域蛋白样白介素1 转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀1.5 免疫组织化学 SP 法检测 IGFBP5 和 cFLIP 蛋白表达 两种抗体均采用免疫组化 SP 法,每次染色均同步设阴性和阳性对照(阳性对照为正常宫颈组织,阴性对照采用磷酸盐缓冲液代替一抗,操作步骤与常
30、规方法相同)。石蜡切片常规脱蜡至水，微波抗原修复，血清封闭，cFLIP、IGFBP5 兔抗人多克隆抗体150 稀释，4?孵育过夜，再以生物素标记羊抗兔 IgG 37?孵育 15?min，辣根酶标记链霉卵白素 37?孵育 30?min，最后用 DAB 显色，苏木素复染，酒精逆度脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。每一步骤间均用 pH 7.2 PBS 缓冲液漂洗 3 次，每次5?min。IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义 IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛
31、素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型 Fas 相关死亡结构域蛋白样白介素1 转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀1.6 二代杂交捕获法（HC ）检测高危型 HPVDNA 检测HPV 病毒 13 种亚型。其方法为将样本中 DNA 双链变性为单链，再与 RNA 探针结合成 DNARNA 杂交体，用特异性抗体将杂交体固定并且结合第二抗体使酶底物发光，通过判断光强弱信号计算出样本的 DNA 含量。结果判定：所有标本的 RLU 值测量值/RLU 阳性对照值(CO
32、),标本的 RLUs/CO0.81.2 为弱阳性，RLUs/CO0.8 为阴性。IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义 IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型 Fas 相关死亡结构域蛋白样白介素1 转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀1.7 结果判断 高倍镜(400)下半定量测定
33、综合染色强度和阳性细胞所占比例，组织细胞浆内出现明确棕黄色颗粒者为 IGFBP5 及 cFLIP 蛋白阳性细胞，观察至少 10 个具有代表性高倍镜视野。对照组阳性测定区域定位于子宫颈鳞状上皮,CIN 定位于 CIN 病灶部位,鳞癌定位于癌灶。分别对染色强度(0:无着色；1:淡黄色；2:棕黄色；3:棕褐色)和阳性细胞百分数(0:5%；1:5%25%；2:26% 50%；3:51% 75%；4:75% )进行计分,两者相加为免疫组化评分，02 分为(-)，34 分为(+)，56 分(+IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义 IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮
34、内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型 Fas 相关死亡结构域蛋白样白介素1 转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀2 结 果 IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义 IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因
35、子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型 Fas 相关死亡结构域蛋白样白介素1 转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀2.1 高危型 HPV 表达结果 CIN I 组与 CIN II/III 组 HPV 感染率分别为 54.55（6/11）,92.31（24/26） ， CIN 各组和鳞癌组的 HPV 感染率均高于对照组 21.4%(6/28)，P0.05，各组比较差异具有统计学意义(P0.05)。而 CIN II/III 组与早期宫颈癌组 92.5%(37/40)相
36、比，差异无统计学意义（P0.05） 。IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义 IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型 Fas 相关死亡结构域蛋白样白介素1 转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀2.2 各组 IGFBP5 、cFLIP 的表达 IGFBP5 蛋白在正常组织中存在一定
37、表达，在 CIN 组表达水平升高，在 CIN II/CIN III组中表达水平最高，而在宫颈癌中表达的阳性率明显下降，与正常组织相比差异有统计学意义（P0.05） 。cFLIP 在CIN/CIN组中表达水平高于 CIN组和正常对照组，CIN/CIN组与癌组织比较差异无统计学意义（P0.05） ，见表 1，图 1。表 1 IGFBP5 、cFLIP 在各类宫颈组织中的表达IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义 IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因
38、子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型 Fas 相关死亡结构域蛋白样白介素1 转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀tissues(C,200) and expression of cFLIP in cervical cancer tissues（D,400）2.3 IGFBP5 及cFLIP 表达与临床病理参数间的关系 IGFBP5 在宫颈癌中的表达与临床病理分期、淋巴结转移及细胞分化程度均有关。肿瘤细胞分化越差，临床分期越晚,出现淋巴结转移时 IGFBP5 的蛋
39、白表达越低；cFLIP 与宫颈癌病理分化程度有关（P0.05） ，见表 2。表 2 宫颈癌及 CIN 中 IGFBP5 及cFLIP 的表达与临床病理参数之间的关系 IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义 IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型 Fas 相关死亡结构域蛋白样白介素1 转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃
40、能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀P1、P2 为组内两两比较 2.4 RTPCR 检测 IGFBP5 、cFLIP mRNA 结果 IGFBP5 在 CIN/组中表达呈现高峰（1.05000.0875） ，为正常组(0.21240.0795)的 4.94 倍，为宫颈癌组（0.36000.0575）的 2.92 倍，宫颈癌组 mRNA 的表达高于正常组（P0.05） ，见图2。cFLIP 在宫颈癌中表达最高（6.88740.6663） ，为CIN/组（3.04260.0819）的 2.26 倍，正常组织中表达最低（0.02460.0100） （P0.05） ，见图 3。IGFBP5 及 c
41、FLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义 IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型 Fas 相关死亡结构域蛋白样白介素1 转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀3 讨 论 IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义 IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中
42、的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型 Fas 相关死亡结构域蛋白样白介素1 转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀胰岛素样生长因子是人体中重要的促生长因子，其在血液及组织液中并不游离存在，而是与胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBPs)结合，主要包括 IGFBP164 ，IGFBPs 通过与 IGF高度粘合抑制 IGF 活性5 。IGFBP5 是最保守的胰岛素样生长因子结合
43、蛋白, 能以 IGF 依赖性和 IGF 非依赖性两种形式调控细胞增殖、分化和凋亡,并与肿瘤发生密切相关67 。在乳腺癌中，IGFBP5 与各种细胞外基质间的相互作用既受到蛋白水解影响，也受到对乳腺功能有作用的激素的调节8 。IGFBP5 能增强肿瘤坏死因子（TNF ）的生长抑制作用,在癌细胞中 IGFBP5 可激活 caspase8 信号传导途径，增加病变组织对 TNF 的敏感性，诱导内在凋亡途径9 ，使肿瘤逃避机体的免疫监视，向着恶性方向发展。IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义 IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者
44、：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型 Fas 相关死亡结构域蛋白样白介素1 转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀本研究结果表明，在宫颈癌前病变进展中，IGFBP5 在基因水平或蛋白水平的表达增加，机体代偿性上调 IGFBP5 的表达，激活 caspase8 信号传导途径，诱导内在凋亡途径，延缓肿瘤的进展。而宫颈癌中的 IGFBP5 与正常组织和 CIN 组相比表达呈下降趋势，其下降原因可
45、能与 HPV 编码的蛋白下调IGFBP5mRNA 的转录有关，且肿瘤细胞分化越差，临床分期越晚, 有远处淋巴结转移者 IGFBP5 的表达水平越低。IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义 IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型 Fas 相关死亡结构域蛋白样白介素1 转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派
46、童氰朵懒泥巍停型氛邮铀cFLIP 含有死亡效应结构域(Death effect domains, DED)蛋白,可阻断死亡受体通路, 发挥凋亡抑制效应。cFLIP 通过其 N端的 2 个 DED 竞争性结合 FADD 和/或 caspase8,10 ，阻断死亡诱导信号复合物的形成和 caspase8,10 的活化，使caspases 级联反应不能继续，起到抑制凋亡的作用。在生理状态下, cFLIP 可保护正常细胞不被肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL)诱导凋亡，在恶性肿瘤组织中，如黑色素瘤10及胃癌11等均过表达。本研究结果表明，cFLIP 在宫颈癌中的表达明显高于正常组及 CIN 组,
47、提示 cFLIP 表达异常与宫颈鳞状上皮恶变有关。在宫颈癌中，IGFBP5 表达减少导致胞内 caspase8 不能被有效激活，同时 cFLIP 表达上调，caspase8 信号传导途径被抑制，使级联反应不能继续，二者共同作用抑制宫颈癌细胞的凋亡并促进了肿瘤细胞的增殖，使Fas、TRAIL 等介导的凋亡信号转导途径受阻, 出现癌细胞过度增殖。此外，本研究结果显示 CIN 组中 HPV 表达率显著高于健康对照组(P0.05),提示联合检测高危型 HPV DNA 核酸以筛查宫颈高度病变可明显降低漏诊率。IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义 IGFBP5 及 cF
48、LIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型 Fas 相关死亡结构域蛋白样白介素1 转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍停型氛邮铀综上所述,IGFBP5 是宫颈病变过程中的肿瘤抑制因子，其表达下调与宫颈癌的浸润、转移和分化有密切关系，cFLIP 在宫颈癌中高表达，二者共同作用于宫颈病变的发生、发展。在宫颈病变组织中联合检测 IGFBP5 、cFLIP 及高危型 HPV 对判断病情变化及预后有重要的临床意义。IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义 IGFBP5 及 cFLIP 在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中的表达及意义作者：侯雪晶单位：山东大学齐鲁医院妇产科, 济南【摘要】 目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白5 (IGFBP5)、细胞型 Fas 相关死亡结构域蛋白样白介素1 转换酶抑制蛋白（cFLIP）及高危型人乳屋录简拽恋氮聋皇合拐售决点耙掸祥虫物喂驯缺熟瘟丘谐疗敢弓辉第烟漳烂贬匪省师胀终奠幢贴善圃能贫吹蒋够壳荐拭派童氰朵懒泥巍
