1、学号：毕 业 论 文 （设 计）（ 2011 届本科）题 目： 绿僵菌抗药性菌株的驯化选育 学 院： 科学技术学院 专 业： 植物保护 姓 名： 指导教师： 副教授 完成日期： 2011 年 6 月 20 日毕业论文任务书论文(设计)题目 绿僵菌抗药性菌株的驯化选育下发任务日期 20109学生姓名 指导教师 副教授一. 论文（设计）主要内容(1) 制作培养基，菌落扩繁(2) 绿僵菌对嘧霉胺抗药性菌株的诱导(3) 绿僵菌菌株抗药性水平的确定(4) 绿僵菌 的抗性菌株与敏感菌株产孢量的比较(5) 绿僵菌的抗性菌株与敏感菌株丝生长速率的比较(6) 绿僵菌抗性菌株的遗传稳定性二.论文（设计）的基本要求
2、(1)掌握文献资料检索技术。(2)掌握试验方案设计方法并进行可行性论证。(3)学习真菌的纯化接种的方法。(4)掌握掌握产孢量和生长速率的测定方法。(5)掌握绿僵菌抗性菌株的遗传稳定性测定方法。(6)学会对数据采集、整理和分析的技能。(7)独立撰写出符合要求的论文。三.论文（设计）工作进度安排阶段 论文（设计）各阶段名称 日期1 查阅资料 2010.102010.112 分离真菌，纯化，扩繁 2010.112010.13 菌株的鉴定，抗药性水平的确定 2011.12011.24 绿僵菌的抗性菌株与敏感菌株产孢量和生长速率的比较 2011.22011.35 绿僵菌抗性菌株的遗传稳定性 2011.3
3、2011.46 整理数据撰写论文 2011.42011.6备注：四.应收集的资料及主要参考文献（指导教师指定）1. 植病研究法 ，方中达编著，北京：中国农业出版社，19982. 植物化学保护研究方法 ，慕立义编著，中国农业出版社，19913有关绿僵菌和嘧霉胺的相关文献资料.4有关绿僵菌研究进展和方面的文献资料说明：此任务由指导教师填写一式两份，一份发给学生，一份发给指导教师留存。沈阳农业大学毕业论文（设计）选题审批表选题名称 绿僵菌抗药性菌株的驯化选育 题目来源 导师指定学号 姓名 专业 植物保护指导教师 职称 副教授研 究内 容(1) 制作培养基，菌落扩繁(2) 抗药性菌株的诱导(3) 抗药
4、性水平的确定(4) 抗性菌株与敏感菌株产孢量的比较(5) 抗性菌株与敏感菌株丝生长速率的比较(6) 抗性菌株的遗传稳定性确定研 究计 划培养基制作，菌落扩繁 2010 年 11 月 1 日2010 年 11 月 20 日抗药性菌株的诱导 2010 年 11 月 20 日2011 年 1 月 20 日抗药性水平的确定 2011 年 1 月 20 日2011 年 2 月 10 日抗性菌株与敏感菌株 2011 年 2 月 11 日2011 年 3 月 11 日孢量和菌丝生长的比较抗性菌株的遗传稳定性确定 2011 年 3 月 12 日2010 年 4 月 11 日撰写论文 2010 年 4 月 12
5、 日2010 年 6 月 5 日特 色 试验通过室内化学药剂诱导，初步获得了对嘧霉胺的抗性菌株，研究了抗药性菌株的生物学性状，评估其抗药性，为嘧霉胺的合理推广应用提供依据。指 导 教 师 意 见教 研室意见学 院意见毕业论文指导记录学生姓名 专业 植物保护指导教师姓名 职称 副教授 本年度指导毕业生人数 11人论文（设计）题目 绿僵菌抗药性菌株的驯化选育时间 地点 指导内容指 导 过 程2010 11 62010 11 202010 11 252010 11 262010 12 102011 1 .202011 2 22011 2 52011 2 82011 3 202011 4 18农业大学
6、 248 实验室农业大学 246 实验室农业大学 246 实验室农业大学 246 实验室农业大学 248 实验室农业大学 248 实验室农业大学 246 实验室农业大学 250 实验室农业大学 248 实验室农药学教研室农药学教研室查阅相关绿僵菌文献如何制作 PDA 培养基如何使用无菌操作台识别菌落形态接种，扩繁分离出来的菌株鉴定分离出来的菌株测量生长速率测量产孢量绿僵菌菌株抗药性水平的确定绿僵菌抗性菌株的遗传稳定性总结试验，数据整理学生签字：年 月 日 指导教师签字：年 月 日教研室主任签字：年 月 日沈阳农业大学毕业论文考核表论文题目：绿僵菌抗药性菌株的驯化选育姓名： 学号： 专业： 植物
7、保护 指导教师评语：指导教师（签字）：年 月 日评阅人评审意见：评阅人（签字）：年 月 日答辩委员会意见：主任委员（签字）：年 月 日注：答辩委员会意见除填写简要评语、给出成绩外，还要提出是否授予学位的建议成绩：目 录摘 要 .1ABSTRACT.2前 言 .31 材料与方法 .51.1 材料 .51.1.1 供试病原菌 .51.1.2 供试药剂 .51.1.3 供试培养基 .51.1.4 仪器及用品 .51.2 试验方法 .51.2.1 绿僵菌对嘧霉胺抗药性菌株的诱导 .51.2.2 绿僵菌菌株抗药性水平的确定 .51.2.3 绿僵菌的抗性菌株与敏感菌株产孢量的比较 .61.2.4 绿僵菌的
8、抗性菌株与敏感菌株丝生长速率的比较 .61.2.5 绿僵菌抗性菌株的遗传稳定性 .62 结果与分析 .62.1 绿僵菌对嘧霉胺抗药性菌株的诱导 .62.2 绿僵菌菌株抗药性水平的确定 .72.3 绿僵菌的抗性菌株与敏感菌株产孢量的比较 .72.4 绿僵菌的抗性菌株与敏感菌株的菌丝生长速率的比较 .82.5 绿僵菌抗性菌株的遗传稳定性 .93 结论与讨论 .103.1 结论 .103.2 讨论 .10参考文献 .13致谢 .15绿僵菌抗药性菌株的驯化选育0摘 要绿 僵 菌 （ Metarhizium anisopliae） 半 知 菌 类 、 丛 梗 菌 目 、 丛 梗 霉 科 、 绿 僵 菌
9、属 ， 具 有 广谱 性 。 绿 僵 菌 对 寄 主 的 入 侵 是 寄 主 与 病 原 菌 之 间 的 生 理 生 化 作 用 的 综 合 结 果 ， 可 通 过 体 壁 、气 门 、 消 化 道 等 多 种 途 径 侵 染 宿 主 ， 其 中 体 壁 途 径 是 主 要 方 式 。 本文研究嘧霉胺驯化诱导绿僵菌产生抗性菌株，研究绿僵菌对嘧霉胺的抗性风险。绿僵菌在含嘧霉胺的培养基上经逐代驯化，获得了抗嘧霉胺的菌株 R1、R2 、R3、R4，经抗药性水平测定， R1、R2、R3、R4 的抗性倍数分别为 10ug/ml，100ug/ml ，500ug/ml，1000ug/ml 四株抗药性菌株均为
10、对嘧霉胺的抗性菌株。本文比较了抗药性菌株和敏感性菌株的生物学性状。采用菌丝生长速率法测定了抗性菌株与敏感菌株的菌丝生长速率，结果表明经 7d 培养抗性菌株菌落直径在 0.5-1.1cm 之间，而敏感菌株为1.3cm，生长速率存在明显差异；在及抗性菌株与敏感菌株的产孢量大约都在 3.6107 个/ml ，说明室内诱导的高抗突变体不能正常生长，菌株对药剂的抗药性水平与菌株产孢能力没有相关性，而是由菌株本身决定的。本试验初步研究了抗性菌株的遗传稳定性，抗性菌株的第零代到第六代的的结果表明绿僵菌的抗药性菌株与敏感菌株的不同转代的有差异性，从第零代第三代到第九代逐渐减小，第零代与第三代和第六代下降明显，
11、第三代与第六代下降幅度很小，但始终保持着对嘧霉胺的高等抗性，表明抗性菌株具有良好的遗传稳定性。关键词：绿僵菌；嘧霉胺；抗性菌株；生物学特性；遗传稳定性沈阳农业大学学士学位论文1Abstract Metarhizium anisopliae of imperfect fungi， bacteria present stem bundle， bundle pullulans Branch， Metarhizium genus， with a broad spectrum. Metarhizium anisopliae on the host and pathogen invasion of hos
12、t physiological and biochemical roles between the combined result of ， through the body wall， valves， and other ways to infect the host alimentary tract， which way is the main way the body wall. Domestication of this study pyrimethanil resistance induced by Metarhizium anisopliae strains of Metarhiz
13、ium pyrimethanil resistance risk.Metarhizium Pyrimethanil containing medium domesticated by each generation， access to the strains of anti Pyrimethanil R1， R2， R3， R4， measured by the resistance level， R1， R2， R3， R4 of the resistance ratio Respectively， 10ug/ml， 100ug/ml， 500ug/ml， 1000ug/ml four r
14、esistant strains were resistant to the strains of pyrimethanil.This paper compares the sensitivity of drug-resistant strains and strains of biological traits. Mycelial growth rate method with the resistant strains and sensitive strains of mycelium growth rate， the results show that the resistant str
15、ains by the 7d culture colony between 0.5-1.1 cm in diameter， and sensitive strains of 0.9 cm， growth Rate significantly different; in and resistant strains and sensitive strains in sporulation of about 3.6 107 个 / ml， shows high resistance to indoor induced mutants can not grow normally， the level
16、of strains and strains resistant pharmaceutical sporulation Ability of no correlation， but the decision by the strain itself.Preliminary study of the test the genetic stability of resistant strains， resistant strains of the zero generation to the sixth generation of the results showed that the resis
17、tant strains of Metarhizium anisopliae and sensitive strains have different transfer on behalf of the differences， from zero To the ninth generation of the third generation decreases， the zero and third-generation and sixth generation decreased significantly， the third decrease in generation and sixth generation of small， but always maintained the high resistance to pyrimethanil， indicating that the anti-Strains with a good genetic stability.Key words: Metarhizium anisopliae; pyrimethanil; resistant strain; biological characteristics; geneticstability
