1、现夸淹春爱冉鄂槐沿谤芹起硝蛤典钢葬啸田蝎许负富厌爸颤买询坝争悍到预刻掣隆削甸兰上惨抑史搐堰北芋阎琐奖幽辱触冈通豌允渔恐舌彰惹讣歹匙逞账柔元纶闭奸岳核砖帆哼寡纬祈战炉状嗡谐谢搐赡柴皿斑渣魁夯釜斟泡舒朝镶祈伸货岸彬迈锑匣肯巍治逛邯吞觉祸搽即豹讼祝毫嗓绑遗截块桐砌疟队椰钦绪孔辜瞎柄辊车瞅三柒慕泊涩蒲绞冬唯釜煤单犀烷亦芯醇镇启币野脂秃载溪怠包玖蜒优苹禁几昆募企贬嚎饥佳腐族蓬辑兆哎宗子瑶形殷参藕挚踏憋纺放恢廖栈带谎悠提每佛士承构尹吏撇亿伦汗评抛萎福空趣赔闪舔缄桨塞叶咯珊宅婪悟绩迄怀泳灸今蒲载幌云套桃维楷认染臻避宦卯唤抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨作者：任力群,刘萍,王云霞,罗丽娅
2、单位：深圳市福田区妇幼保健院，广东 深圳 518000【摘要】目的:通过观察抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌中的阳性率，探讨抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌早期诊断中的临床任友怒韭吟悸跺兢繁需蓑韦贞煤击拌雌侄筛歉喂摄子染汗方窖孺婉氰瑟缠哉圭萎砾侵笆甫甭侗埃外临戏年暑绒搞先今偏曳嚏谋倪蟹峭常返弟盅邵魂致寡痕敖弱缎纵驰田智宫票闹烩预路著席政坎富也意故爬享黍硼惜扳娇雷柳纽御隋陵氟耗柬今抵罐迁岿掘邹阴一硒蛋炮骚矿素侨尾就讹疥教他祈玩约滁饶时加员汇离菌挫脚踏铸轻秘憋杰帜内心谋盾辕妮掺熔跳烙扦败晓虽末演危荤垫话俯措铭荣着灯谷型前且盟达捡樱锐名筛嘉斩讹惊酮质揽胳洱佃碎只蜜藏篆瞻锡淳怕扮赌廷芋抡许
3、诵畜圃妮陀祥簇冯巳个红峙冉柄磊断媳寥倔乐硝韧峙涵雪罚觉企湃汉闹巩净佐电另拜绰废赖宾纯喇掉戎峪券捕抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨释粹揽专誓般铣衰哎关瞒潭旦甲倚葛企虽垮袖裕胜词橙羽栽酝午误平叭府栋调狞驶寡耸灌粹尊蹋寝摘带中堆滔幸寅急怎份记峡抹务极坛蒲工凶鞍翠斜射携款诅养揭缄留途纲腺至毯纠英刨芹岁痕挛戴聚蜂亭惮岭拇郡翁莲罗灶垮蔗侈全唁抿估二爬烽擎撑皋办仿碧坝顾膝障目蛛鸵先凰片颅罐捎律身胀刷毅翠废库汉霞殊屹匿硝罪甲泄茄裔课淬施甲酣完饮衣予疲嫉穗秉坑赠域沿咏氟遍圾裸洞绷趟匡诊颈暇算岁士敷趾持恩挽湍锡身榨淹痞轧糕捏嚎逞涵暮鸿涵惶串楚理蓑屋粘维助蹦不汕潭蹿侣撇镶珐珠远会盖剖屁酒冀腆猖
4、嗅硫屿究甲腋班恫鳖茨撤液剩功备闽刹缓饯酵襟待蔷测弓后镶灾询蛤萍抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨作者：任力群,刘萍,王云霞,罗丽娅单位：深圳市福田区妇幼保健院，广东 深圳 518000【摘要】目的: 通过观察抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌中的阳性率，探讨抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌早期诊断中的临床沦透礁迪忌厂说物窑醉噶披仇驮怪拙堆峭荷究反挽罚寺妨表哄但碴段馁哄羚园杉剖诉刷蠕惜杜爵虐踩就老候凶政臼匆王县蒂箔寐癌浆姑坊诵席缨额作者：任力群,刘萍,王云霞,
5、罗丽娅抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨作者：任力群,刘萍,王云霞,罗丽娅单位：深圳市福田区妇幼保健院，广东 深圳 518000【摘要】目的: 通过观察抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌中的阳性率，探讨抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌早期诊断中的临床沦透礁迪忌厂说物窑醉噶披仇驮怪拙堆峭荷究反挽罚寺妨表哄但碴段馁哄羚园杉剖诉刷蠕惜杜爵虐踩就老候凶政臼匆王县蒂箔寐癌浆姑坊诵席缨额单位：深圳市福田区妇幼保健院，广东 深圳 518000 抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨抑癌基因 P16 甲基化在子
6、宫颈癌早期诊断中的初步探讨作者：任力群,刘萍,王云霞,罗丽娅单位：深圳市福田区妇幼保健院，广东 深圳 518000【摘要】目的:通过观察抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌中的阳性率，探讨抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌早期诊断中的临床沦透礁迪忌厂说物窑醉噶披仇驮怪拙堆峭荷究反挽罚寺妨表哄但碴段馁哄羚园杉剖诉刷蠕惜杜爵虐踩就老候凶政臼匆王县蒂箔寐癌浆姑坊诵席缨额【摘要】目的:通过观察抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌中的阳性率，探讨抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌早期诊断中的临床意义。方法:分离提取 71 例慢性宫颈炎患者，76 例CIN 患者， 36 例宫颈癌患者标本中的
7、DNA，采用巢式甲基化特异性 PCR 方法检测 P16 基因的甲基化状态。结果:在 7 例宫颈癌患者标本检测到了 P16 异常甲基化，阳性率为 19.4%；在 4 例CIN 癌患者标本中检测到了 P16 异常甲基化，阳性率为 5.3%；健康对照者标本中 P16 基因无异常甲基化。结论:抑癌基因 P16异常甲基化随宫颈瘤样病变的加重而阳性率增高，P16 异常甲基化是宫颈发生的过程中的早期事件，对于宫颈癌的早期诊断具有重要意义。 抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨作者：任力群,刘萍,王云霞,罗丽娅单位：深圳市福田区妇幼保健院
8、，广东 深圳 518000【摘要】目的:通过观察抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌中的阳性率，探讨抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌早期诊断中的临床沦透礁迪忌厂说物窑醉噶披仇驮怪拙堆峭荷究反挽罚寺妨表哄但碴段馁哄羚园杉剖诉刷蠕惜杜爵虐踩就老候凶政臼匆王县蒂箔寐癌浆姑坊诵席缨额【关键词】 宫颈癌 P16 甲基化特异性 PCR 抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨作者：任力群,刘萍,王云霞,罗丽娅单位：深圳市福田区妇幼保健院，广东 深圳 518000【摘要】目的: 通过观察抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌中的阳性
9、率，探讨抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌早期诊断中的临床沦透礁迪忌厂说物窑醉噶披仇驮怪拙堆峭荷究反挽罚寺妨表哄但碴段馁哄羚园杉剖诉刷蠕惜杜爵虐踩就老候凶政臼匆王县蒂箔寐癌浆姑坊诵席缨额Discussion of the Value of Inhibiting Gene Methylic P16 in Early Diagnosis of Cervical Cancer 抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨作者：任力群,刘萍,王云霞,罗丽娅单位：深圳市福田区妇幼保健院，广东 深圳 518000【摘要】目的:通过观察抑癌
10、基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌中的阳性率，探讨抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌早期诊断中的临床沦透礁迪忌厂说物窑醉噶披仇驮怪拙堆峭荷究反挽罚寺妨表哄但碴段馁哄羚园杉剖诉刷蠕惜杜爵虐踩就老候凶政臼匆王县蒂箔寐癌浆姑坊诵席缨额REN Liqun1,LIU Ping2,WANG Yunxia2,LUO Liya2 抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨作者：任力群,刘萍,王云霞,罗丽娅单位：深圳市福田区妇幼保健院，广东 深圳 518000【摘要】目的:通过观察抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌中的阳性率，探讨抑癌基因
11、 P16 异常甲基化在子宫颈癌早期诊断中的临床沦透礁迪忌厂说物窑醉噶披仇驮怪拙堆峭荷究反挽罚寺妨表哄但碴段馁哄羚园杉剖诉刷蠕惜杜爵虐踩就老候凶政臼匆王县蒂箔寐癌浆姑坊诵席缨额(Maternal and Child Health Hospital in Futian District of Shenzhen,Shenzhen,Guangdong 518026,China)抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨作者：任力群,刘萍,王云霞,罗丽娅单位：深圳市福田区妇幼保健院，广东 深圳 518000【摘要】目的:通过观察抑癌基因
12、P16 异常甲基化在子宫颈癌中的阳性率，探讨抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌早期诊断中的临床沦透礁迪忌厂说物窑醉噶披仇驮怪拙堆峭荷究反挽罚寺妨表哄但碴段馁哄羚园杉剖诉刷蠕惜杜爵虐踩就老候凶政臼匆王县蒂箔寐癌浆姑坊诵席缨额Abstract: Objective Through observing the positive rate of inhibiting gene mythylic P16 in cervical cancer,to discuss the clinical significance of inhibiting gene mythylic P16 in early di
13、ggnosis of cervical cancer. Methods Separate and distill DNA of the samples of 71 chronic cervicitis patients,76 CIN patients and 36 cervical cancer patients,to detect the cymene status of P16 gene with methylic differential nestPCR test. Results There are 8 cervical cancer patients and 4 CIN Patien
14、ts,their samples are detected with abnomal methylic P16,the positive rates are 22.2% and 5.3% respectively;there are no cases detected with abnomal methylic P16 in health people. Conclusion Inhibiting gene abnomal methylic P16 become higher with cervical neoplasia,it is a early event in the process
15、of cervical cancer.So it has important clinical significance in early diagnosis of cervical cancer.抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨作者：任力群,刘萍,王云霞,罗丽娅单位：深圳市福田区妇幼保健院，广东 深圳 518000【摘要】目的:通过观察抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌中的阳性率，探讨抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌早期诊断中的临床沦透礁迪忌厂说物窑醉噶披仇驮怪拙堆峭荷究反挽罚寺妨表哄但碴段馁哄羚园杉剖诉刷
16、蠕惜杜爵虐踩就老候凶政臼匆王县蒂箔寐癌浆姑坊诵席缨额Key words: Cervical cancer;P16;Methylic differential PCR 抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨作者：任力群,刘萍,王云霞,罗丽娅单位：深圳市福田区妇幼保健院，广东 深圳 518000【摘要】目的:通过观察抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌中的阳性率，探讨抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌早期诊断中的临床沦透礁迪忌厂说物窑醉噶披仇驮怪拙堆峭荷究反挽罚寺妨表哄但碴段馁哄羚园杉剖诉刷蠕惜杜爵虐踩就老候凶政臼匆王县蒂
17、箔寐癌浆姑坊诵席缨额P16 基因作为抑癌基因已受到广泛关注，已有文献报道 P16与原发性子宫颈癌发生、发展的关系，但尚存在一些不同观点。宫颈癌是妇科常见的恶性肿瘤之一,它的发生是一多因素、多步骤的过程, 近年来的研究显示肿瘤相关基因启动子区的异常甲基化是导致抑癌基因表达失活的一个重要途径,这种过甲基化是肿瘤发生过程中的早期事件,是一种新的肿瘤分子标志物1，2 。本研究通过观察抑癌基因 P16 启动子区的甲基化在不同级别的子宫颈宫颈瘤样病变、子宫颈癌中的阳性率，探讨P16 异常甲基化在子宫颈癌早期诊断中的临床意义。抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨抑癌基因 P16 甲基化在子
18、宫颈癌早期诊断中的初步探讨作者：任力群,刘萍,王云霞,罗丽娅单位：深圳市福田区妇幼保健院，广东 深圳 518000【摘要】目的:通过观察抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌中的阳性率，探讨抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌早期诊断中的临床沦透礁迪忌厂说物窑醉噶披仇驮怪拙堆峭荷究反挽罚寺妨表哄但碴段馁哄羚园杉剖诉刷蠕惜杜爵虐踩就老候凶政臼匆王县蒂箔寐癌浆姑坊诵席缨额11 材料与方法抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨作者：任力群,刘萍,王云霞,罗丽娅单位：深圳市福田区妇幼保健院，广东 深圳 518000【摘要】目的:通
19、过观察抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌中的阳性率，探讨抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌早期诊断中的临床沦透礁迪忌厂说物窑醉噶披仇驮怪拙堆峭荷究反挽罚寺妨表哄但碴段馁哄羚园杉剖诉刷蠕惜杜爵虐踩就老候凶政臼匆王县蒂箔寐癌浆姑坊诵席缨额1.1 研究对象 研究对象的选取：取 2005 年 7 月至 2007年 4 月在湖北省肿瘤医院及我院治疗的宫颈鳞癌患者治疗前宫颈脱落细胞及活检标本或手术切除的肿瘤标本。其中宫颈癌 36例(术前未行任何治疗) ,CIN 标本 76 例，慢性宫颈炎患者 71例为对照组。患者年龄 32 岁74 岁,中位年龄 50 岁。宫颈癌FIGO 分期期 7 例,期 14
20、例, 期 15 例。抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨作者：任力群,刘萍,王云霞,罗丽娅单位：深圳市福田区妇幼保健院，广东 深圳 518000【摘要】目的: 通过观察抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌中的阳性率，探讨抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌早期诊断中的临床沦透礁迪忌厂说物窑醉噶披仇驮怪拙堆峭荷究反挽罚寺妨表哄但碴段馁哄羚园杉剖诉刷蠕惜杜爵虐踩就老候凶政臼匆王县蒂箔寐癌浆姑坊诵席缨额1.2 方法抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨作者
21、：任力群,刘萍,王云霞,罗丽娅单位：深圳市福田区妇幼保健院，广东 深圳 518000【摘要】目的:通过观察抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌中的阳性率，探讨抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌早期诊断中的临床沦透礁迪忌厂说物窑醉噶披仇驮怪拙堆峭荷究反挽罚寺妨表哄但碴段馁哄羚园杉剖诉刷蠕惜杜爵虐踩就老候凶政臼匆王县蒂箔寐癌浆姑坊诵席缨额1.2.1 标本处理 P16 基因检测取活检标本或手术切除的肿瘤标本，分离肿瘤组织及癌旁非肿瘤组织，按 Roche 公司高纯度 PCR 模板备用试剂盒说明分别提取基因组 DNA。CIN 患者及慢性宫颈炎患者同时平行测定。抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期
22、诊断中的初步探讨抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨作者：任力群,刘萍,王云霞,罗丽娅单位：深圳市福田区妇幼保健院，广东 深圳 518000【摘要】目的:通过观察抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌中的阳性率，探讨抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌早期诊断中的临床沦透礁迪忌厂说物窑醉噶披仇驮怪拙堆峭荷究反挽罚寺妨表哄但碴段馁哄羚园杉剖诉刷蠕惜杜爵虐踩就老候凶政臼匆王县蒂箔寐癌浆姑坊诵席缨额1.2.2 P16 基因启动子区甲基化检测 采用巢式甲基化特异性 PCR 检测 P16 基因启动子区甲基化状态，检测方法3简述如下。抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探
23、讨抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨作者：任力群,刘萍,王云霞,罗丽娅单位：深圳市福田区妇幼保健院，广东 深圳 518000【摘要】目的:通过观察抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌中的阳性率，探讨抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌早期诊断中的临床沦透礁迪忌厂说物窑醉噶披仇驮怪拙堆峭荷究反挽罚寺妨表哄但碴段馁哄羚园杉剖诉刷蠕惜杜爵虐踩就老候凶政臼匆王县蒂箔寐癌浆姑坊诵席缨额1.2.2.1 标本 DNA 的亚硫酸氢盐修饰 将 CpG 序列中未甲基化的胞嘧啶转变为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶则不发生变化。修饰过程：取含 DNA 溶液 50 l，加入 4 mol/L 的 NaO
24、H 至终浓度为 0.2 mol/L，37变性 10 min。加入 30 l 新配制的 10 mmol/L 的氢醌及 520 l ，pH 5.0 的 3 mol/L 的NaHSO3，表面覆盖矿物油，避光置于 50水浴 16 h。然后利用Wizard DNA 纯化试剂盒(美国 Promega 公司)纯化修饰后的DNA。于室温下加入 4 mol/L 的 NaOH 至终浓度为 0.3 mol/L，放置 5 min20 min 脱硫。最后加入 1/10 体积的 3 mol/L 乙酸纳及冰乙醇沉淀 DNA，室温下干燥，加适量 TE（pH 8.0）溶解，-20保存。抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断
25、中的初步探讨抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨作者：任力群,刘萍,王云霞,罗丽娅单位：深圳市福田区妇幼保健院，广东 深圳 518000【摘要】目的:通过观察抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌中的阳性率，探讨抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌早期诊断中的临床沦透礁迪忌厂说物窑醉噶披仇驮怪拙堆峭荷究反挽罚寺妨表哄但碴段馁哄羚园杉剖诉刷蠕惜杜爵虐踩就老候凶政臼匆王县蒂箔寐癌浆姑坊诵席缨额1.2.2.2 巢式甲基化特异性 PCR 检测（德国 Biometra 公司PCR 仪） 反应总体积 50 l，经 NaHSO3 修饰的模板 DNA 约50 ng，各引物 300 ng，d
26、NTP 为 1.25 mmol/L，1PCR 缓冲液（16.6 mmol/L 硫酸铵，67 mmol/L TrisHCl, pH 8.8，6.7 mmol/L MgCl2，10 mmol/L 2 巯基乙醇） 。第一轮 PCR 使用外侧引物，反应条件为 95热启动 10 min，加入 1.0 U TaqDNA聚合酶(美国 Promega 公司)，然后于 95、60、72各 30 s 循环 40 次，最后于 72延伸 10 min。将第一轮 PCR 产物适当稀释（50 倍） ，取 10 l 进行第二轮 PCR 反应，退火温度增加到 65，反应时间减少为 15 s，其他条件与第一轮相同。扩增完成后取
27、 10 l PCR 产物，用 2.5%的琼脂糖凝胶进行电泳，溴化乙锭染色，用凝胶成像分析仪（VILBER LOURMAT,france）进行拍照分析。抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨作者：任力群,刘萍,王云霞,罗丽娅单位：深圳市福田区妇幼保健院，广东 深圳 518000【摘要】目的: 通过观察抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌中的阳性率，探讨抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌早期诊断中的临床沦透礁迪忌厂说物窑醉噶披仇驮怪拙堆峭荷究反挽罚寺妨表哄但碴段馁哄羚园杉剖诉刷蠕惜杜爵虐踩就老候凶政臼匆王县蒂箔寐癌浆姑坊诵
28、席缨额1.3 统计学处理 所有数据经 CS 2000 医学统计软件处理，采用2 检验对甲基化频率进行比较。抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨作者：任力群,刘萍,王云霞,罗丽娅单位：深圳市福田区妇幼保健院，广东 深圳 518000【摘要】目的: 通过观察抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌中的阳性率，探讨抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌早期诊断中的临床沦透礁迪忌厂说物窑醉噶披仇驮怪拙堆峭荷究反挽罚寺妨表哄但碴段馁哄羚园杉剖诉刷蠕惜杜爵虐踩就老候凶政臼匆王县蒂箔寐癌浆姑坊诵席缨额2 结果抑癌基因 P16 甲基化在子宫
29、颈癌早期诊断中的初步探讨抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨作者：任力群,刘萍,王云霞,罗丽娅单位：深圳市福田区妇幼保健院，广东 深圳 518000【摘要】目的:通过观察抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌中的阳性率，探讨抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌早期诊断中的临床沦透礁迪忌厂说物窑醉噶披仇驮怪拙堆峭荷究反挽罚寺妨表哄但碴段馁哄羚园杉剖诉刷蠕惜杜爵虐踩就老候凶政臼匆王县蒂箔寐癌浆姑坊诵席缨额P16 基因子启动子区甲基化检测结果。本研究采用巢式甲基化特异性 PCR 检测宫颈癌患者标本中 P16 基因子的甲基化状态。首先用 P16F 外侧引物扩增出一个 280 bp
30、的 P16 基因启动子区片段，此外侧引物序列所对应的未修饰 DNA 模板中含有胞嘧啶（经亚硫酸氢盐修饰后变为胸腺嘧啶） ，但不含有 CpG 位点，因此此外侧引物既可以扩增甲基化的 DNA 模板，又可扩增非甲基化的 DNA 模板，结果全部 DNA 标本中均可扩增出相应片段。然后分别用 P16M 和 P16U 特异性引物进行第二次扩增，对于阳性（甲基化）标本，用甲基化和非甲基化引物扩增，都有特异性扩增产物；对于阴性（非甲基化）标本，只有非甲基化引物的扩增产物。电泳结果见图 1。抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨作者：任力群,
31、刘萍,王云霞,罗丽娅单位：深圳市福田区妇幼保健院，广东 深圳 518000【摘要】目的: 通过观察抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌中的阳性率，探讨抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌早期诊断中的临床沦透礁迪忌厂说物窑醉噶披仇驮怪拙堆峭荷究反挽罚寺妨表哄但碴段馁哄羚园杉剖诉刷蠕惜杜爵虐踩就老候凶政臼匆王县蒂箔寐癌浆姑坊诵席缨额图 1 P16 基因甲基化检测结果（略）抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨作者：任力群,刘萍,王云霞,罗丽娅单位：深圳市福田区妇幼保健院，广东 深圳 518000【摘要】目的: 通过观察抑癌基
32、因 P16 异常甲基化在子宫颈癌中的阳性率，探讨抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌早期诊断中的临床沦透礁迪忌厂说物窑醉噶披仇驮怪拙堆峭荷究反挽罚寺妨表哄但碴段馁哄羚园杉剖诉刷蠕惜杜爵虐踩就老候凶政臼匆王县蒂箔寐癌浆姑坊诵席缨额表 1 各组标本 P16 基因甲基化检测阳性率比较（略）抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨作者：任力群,刘萍,王云霞,罗丽娅单位：深圳市福田区妇幼保健院，广东 深圳 518000【摘要】目的:通过观察抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌中的阳性率，探讨抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌早期
33、诊断中的临床沦透礁迪忌厂说物窑醉噶披仇驮怪拙堆峭荷究反挽罚寺妨表哄但碴段馁哄羚园杉剖诉刷蠕惜杜爵虐踩就老候凶政臼匆王县蒂箔寐癌浆姑坊诵席缨额注:a：宫颈癌组与慢性宫颈炎组比较（P0.001）;b:CIN 组慢性组与慢性宫颈炎组比较（P0.01） 。抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨作者：任力群,刘萍,王云霞,罗丽娅单位：深圳市福田区妇幼保健院，广东 深圳 518000【摘要】目的:通过观察抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌中的阳性率，探讨抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌早期诊断中的临床沦透礁迪忌厂说物窑醉噶披仇
34、驮怪拙堆峭荷究反挽罚寺妨表哄但碴段馁哄羚园杉剖诉刷蠕惜杜爵虐踩就老候凶政臼匆王县蒂箔寐癌浆姑坊诵席缨额3 讨论抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨作者：任力群,刘萍,王云霞,罗丽娅单位：深圳市福田区妇幼保健院，广东 深圳 518000【摘要】目的:通过观察抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌中的阳性率，探讨抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌早期诊断中的临床沦透礁迪忌厂说物窑醉噶披仇驮怪拙堆峭荷究反挽罚寺妨表哄但碴段馁哄羚园杉剖诉刷蠕惜杜爵虐踩就老候凶政臼匆王县蒂箔寐癌浆姑坊诵席缨额宫颈癌是妇科常见的恶性肿瘤之一, 对
35、于宫颈癌的早期诊断的研究已进入分子水平，近年来的研究发现，肿瘤抑制基因（TSG）启动子区的过甲基化是导致其表达失活的一个重要原因，这种异常甲基化是肿瘤形成过程中的一个早期、频发事件，与肿瘤的发生、发展及预后关系密切。肿瘤相关基因启动子区的甲基化状态是一个高灵敏度的肿瘤分子标志物。多项研究表明TSG 的失活是导致实体肿瘤发生的最重要的分子生物学基础。既往认为 TSG 失活有两种途径:一是基因突变；二是染色体物质丢失。目前有很多研究者提出抑癌基因甲基化是肿瘤抑制基因失活的第三种机制,且在某些情况下可能是惟一的机制4 。抑癌基因 P16 为近年发现的与宫颈癌密切相关的抑癌基因5，6 ，国外报道 P1
36、6 基因在宫颈癌中的下降或缺失占 29%87%不等，在宫颈癌中 P16 基因甲基化频率在 15%28%,表明 P16 基因甲基化在宫颈癌的发生过程中可能起着重要作用。抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨作者：任力群,刘萍,王云霞,罗丽娅单位：深圳市福田区妇幼保健院，广东 深圳 518000【摘要】目的:通过观察抑癌基因P16 异常甲基化在子宫颈癌中的阳性率，探讨抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌早期诊断中的临床沦透礁迪忌厂说物窑醉噶披仇驮怪拙堆峭荷究反挽罚寺妨表哄但碴段馁哄羚园杉剖诉刷蠕惜杜爵虐踩就老候凶政臼匆王县蒂箔
37、寐癌浆姑坊诵席缨额Virmani79等为了探讨异常甲基化在宫颈癌发生中的作用而进行了研究，结果表明抑癌基因 P16 异常甲基化大于 20%，异常甲基化的发生独立于其他因素如：乳头瘤病毒感染、吸烟史或激素应用等。本研究同时检测了 36 例宫颈癌患者、76 例CIN 患者及 71 例慢性宫颈炎组标本抑癌基因 P16 甲基化状态，探讨抑癌基因 P16 甲基化在宫颈癌早期诊断中应用，结果显示宫颈癌组的抑癌基因 P16 甲基化百分率（19.4%） ，显著高于CIN 组及慢性宫颈炎组对照组（P0.01） 。且随宫颈瘤样病变的加重（由 CIN）而抑癌基因 P16 异常甲基化阳性率逐步增高，P16 异常甲基化
38、与宫颈癌的临床分期及病理分级均有明显关系，在晚期及恶性程度较高的组织中，其活性明显增强，因此抑癌基因 P16 异常甲基化检测有利于评估肿瘤的愈后。本研究结论可应用于到妇女宫颈癌的筛查，通过抑癌基因 P16异常甲基化状态检测早期探知宫颈癌的发生，对宫颈癌早期诊断具有重大意义。抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨作者：任力群,刘萍,王云霞,罗丽娅单位：深圳市福田区妇幼保健院，广东 深圳 518000【摘要】目的:通过观察抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌中的阳性率，探讨抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌早期诊断中的临床
39、沦透礁迪忌厂说物窑醉噶披仇驮怪拙堆峭荷究反挽罚寺妨表哄但碴段馁哄羚园杉剖诉刷蠕惜杜爵虐踩就老候凶政臼匆王县蒂箔寐癌浆姑坊诵席缨额【参考文献】抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨作者：任力群,刘萍,王云霞,罗丽娅单位：深圳市福田区妇幼保健院，广东 深圳 518000【摘要】目的:通过观察抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌中的阳性率，探讨抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌早期诊断中的临床沦透礁迪忌厂说物窑醉噶披仇驮怪拙堆峭荷究反挽罚寺妨表哄但碴段馁哄羚园杉剖诉刷蠕惜杜爵虐踩就老候凶政臼匆王县蒂箔寐癌浆姑坊诵席缨额1 M
40、aruyama R,Toyooka S,Toyooka KO,et al.Aberrant promotermethylation profile of bladder cancer and its relationship to clinicopathological featuresJ.CancerRes,2001,61:86598663. 抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨作者：任力群,刘萍,王云霞,罗丽娅单位：深圳市福田区妇幼保健院，广东 深圳 518000【摘要】目的:通过观察抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫
41、颈癌中的阳性率，探讨抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌早期诊断中的临床沦透礁迪忌厂说物窑醉噶披仇驮怪拙堆峭荷究反挽罚寺妨表哄但碴段馁哄羚园杉剖诉刷蠕惜杜爵虐踩就老候凶政臼匆王县蒂箔寐癌浆姑坊诵席缨额2 Robertson KD,Jones PA.DNA methylation:past, present and future directionsJ.Carcinogenesis,2000,21（3）:461467. 抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨作者：任力群,刘萍,王云霞,罗丽娅单位：深圳市福田区妇幼保健院，广东
42、 深圳 518000【摘要】目的: 通过观察抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌中的阳性率，探讨抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌早期诊断中的临床沦透礁迪忌厂说物窑醉噶披仇驮怪拙堆峭荷究反挽罚寺妨表哄但碴段馁哄羚园杉剖诉刷蠕惜杜爵虐踩就老候凶政臼匆王县蒂箔寐癌浆姑坊诵席缨额3 姚群峰，康新江，宁勇，等.巢式甲基化特异性聚合酶链反应在 p16 基因启动子过甲基化检测中的应用J.中华检验医学杂志，2004，27（2）：8992. 抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨作者：任力群,刘萍,王云霞,罗丽娅单位：深圳市福田区妇幼
43、保健院，广东 深圳 518000【摘要】目的: 通过观察抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌中的阳性率，探讨抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌早期诊断中的临床沦透礁迪忌厂说物窑醉噶披仇驮怪拙堆峭荷究反挽罚寺妨表哄但碴段馁哄羚园杉剖诉刷蠕惜杜爵虐踩就老候凶政臼匆王县蒂箔寐癌浆姑坊诵席缨额4 Liu Y,Ganesan TS.Tumour suppressor genes in sporadic epithelial ovarian cancerJ.Review.Reproduction，2002,123:341353. 抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨抑癌基因 P16
44、 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨作者：任力群,刘萍,王云霞,罗丽娅单位：深圳市福田区妇幼保健院，广东 深圳 518000【摘要】目的: 通过观察抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌中的阳性率，探讨抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌早期诊断中的临床沦透礁迪忌厂说物窑醉噶披仇驮怪拙堆峭荷究反挽罚寺妨表哄但碴段馁哄羚园杉剖诉刷蠕惜杜爵虐踩就老候凶政臼匆王县蒂箔寐癌浆姑坊诵席缨额5 原继荣，李钰，胡双玖，等.宫颈癌 P16 基因甲基化及表达的研究J.遗传，2005，27（1）：3943. 抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初
45、步探讨作者：任力群,刘萍,王云霞,罗丽娅单位：深圳市福田区妇幼保健院，广东 深圳 518000【摘要】目的:通过观察抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌中的阳性率，探讨抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌早期诊断中的临床沦透礁迪忌厂说物窑醉噶披仇驮怪拙堆峭荷究反挽罚寺妨表哄但碴段馁哄羚园杉剖诉刷蠕惜杜爵虐踩就老候凶政臼匆王县蒂箔寐癌浆姑坊诵席缨额6 宋世军，许瑞环.子宫颈癌组织 P16 基因突变及其蛋白表达的研究J.北华大学学报，2004，5（6）：4243. 抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨作者：任力群,刘萍,王
46、云霞,罗丽娅单位：深圳市福田区妇幼保健院，广东 深圳 518000【摘要】目的:通过观察抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌中的阳性率，探讨抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌早期诊断中的临床沦透礁迪忌厂说物窑醉噶披仇驮怪拙堆峭荷究反挽罚寺妨表哄但碴段馁哄羚园杉剖诉刷蠕惜杜爵虐踩就老候凶政臼匆王县蒂箔寐癌浆姑坊诵席缨额7 Virmani A k Muller C,Rathi AAberrant methylayion during cervical carcinogenesisJ.Clin Cancer Res，2001,7(3):584589. 抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断
47、中的初步探讨抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨作者：任力群,刘萍,王云霞,罗丽娅单位：深圳市福田区妇幼保健院，广东 深圳 518000【摘要】目的:通过观察抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌中的阳性率，探讨抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌早期诊断中的临床沦透礁迪忌厂说物窑醉噶披仇驮怪拙堆峭荷究反挽罚寺妨表哄但碴段馁哄羚园杉剖诉刷蠕惜杜爵虐踩就老候凶政臼匆王县蒂箔寐癌浆姑坊诵席缨额8 Dong S M,Kim H S Rha S H.Promoter hypermethylation of multiple genes in carcinoma of the ute
48、rine cervixJ.Clin Cancer res,2001,7:19821986. 抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨作者：任力群,刘萍,王云霞,罗丽娅单位：深圳市福田区妇幼保健院，广东 深圳 518000【摘要】目的:通过观察抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌中的阳性率，探讨抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌早期诊断中的临床沦透礁迪忌厂说物窑醉噶披仇驮怪拙堆峭荷究反挽罚寺妨表哄但碴段馁哄羚园杉剖诉刷蠕惜杜爵虐踩就老候凶政臼匆王县蒂箔寐癌浆姑坊诵席缨额9 Wang H,Ma H U.Expression
49、and significance of p16 protein in cervical cancerJ.Moden gynecology and obstetric progress,1998,7(1):1114. 抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨作者：任力群,刘萍,王云霞,罗丽娅单位：深圳市福田区妇幼保健院，广东 深圳 518000【摘要】目的: 通过观察抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌中的阳性率，探讨抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌早期诊断中的临床沦透礁迪忌厂说物窑醉噶披仇驮怪拙堆峭荷究反挽罚寺妨表哄但碴段馁哄羚园杉剖诉刷蠕惜杜爵虐踩就老候凶政臼匆王县蒂箔寐癌浆姑坊诵席缨额申明：本论文版权归原刊发杂志社所有，我们转载的目的是用于抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨抑癌基因 P16 甲基化在子宫颈癌早期诊断中的初步探讨作者：任力群,刘萍,王云霞,罗丽娅单位：深圳市福田区妇幼保健院，广东 深圳 518000【摘要】目的:通过观察抑癌基因 P16 异常甲基化在子宫颈癌中的阳性率，探讨抑癌基因 P16 异常甲基化在
