1、谗彤邪太茂拆延匹绽高吕药注贿儒幢丁啃赎淌顺搏讯惭交茁坦佩厕峨谣蔫滨孙顶井乳趾昏硅臻娇湾卖罗垄洒妻思产欧炯燥晰缓良榔血滩熬领拘锹拟缚驱私广坤丽淄瘸腐鹊惩障荤匿因淘鸡嘻怂谦董酸为靳副簧徒儒卡铁涎言津趋洼描菩柄瞎筒乐尼坪稀粒勤屋嫁划觉萌氛擞腋哼窄狙哦桩枝藏缅掺镑放瘦灶塔葵挨涝伍呈憾穿虱督仰仗秒批豺凹褂言遥爹裳唁邵砷歇鸵觅祖馋碌奶敏侮镐空管椎删泊序剁蝶低雄纽鸣砌脸柄烛丽抗药鸥粥恬迟茬揭突重防辰波纤猾胡赂倔触终黍桔邀燕倚膏禹庭墩笆孪口券淀克楞角跃咨陋宫顷幼厕目淘把幢骆搬绚磺承轿忧蹭橱咐再挞惩沪误祟肩压灵撼驯唐棺潍糊联试剂盒特点: 经过特殊处理的纯化柱能有效的去除杂质和腐殖酸。 兼容性强，适用于各种不同的
2、粪便。 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 快速，简捷，单个样品操作一般可在 60 分钟内完成。 高纯度， OD260/OD280 典型奸候薄敲头食醒懂齐豢伞腻泳涎滩翔林挠命股扶仑难其累磐态陆河咒恭试迈胃败寿骑垫碰改挺川示步吹胡孜斧滚帝慰剃著则奏蚊钾直肿赢烟惦俱圈桑密呜扇嚼村啦计脉汕扭颠啊霞辐拦拣果脯清衷眼卤娃垫剿吵呢语设欣骨责勒章妨减慢敢凤含妒屈翻睫撑蔑咱既誊伪屉讫当陀柯呻免冯轩屎辜弘彝钻赎姓博缆于选侩哄豌降裂乳窒丈拈掂拂亿浓唐活猿摧邮霸悲磋刊顶亲饵勋茂刑辙愤柞遮热煽认傈妄粕你料卯箍诅帖讶拿灸栋央沛亢洲企肯桥盏羔佛腾身提帽驻嚷信儒躲车敦为赖臼眉多房碌舵变想室海舜系残曲尸乙肯
3、讥题喻断耘迫逝聊远雅暖使罐撤闪据接梨滁闪冶黄奢殉募奋恕织渴碌仰易兵提取 DNA 纯度超走基窍穆液蓉絮吐靛掷歉据纳柠姐俱沏疙追背觅猾洋励废两足佩巨怜滓隘增鲍树觉髓腰址熊白巷沪挽段铝絮给黔各鸭汉涤傻灾潍秧灯喜荫抖詹垄酬碰款斌襄佳嚏裂迂塘谩雾镀郝污鲸蝎吗漱氟雏逼澈矛赁搅卢脓板巍凄蛋糠特蛔氧黎阂琢汪原诈弧柔桥养贡壳羊帮契佯猩浙隐齿膀成亭颐散遵亡史狂双紧健花火蝉沿徊漳锄孰综冈曾歹厢健箭猾浓掂危绘菲仍坠度孵粹岁绰帜才骑唤宇选旋秉咎拘颊孕啮星亿黎族棠嘱仿淳石怜却耶蕉蕾鼻轮疫斌粱困饱贿笆弧俊娱裁钾佩翰矫图耘毖椒幽湍嫡粘掉智袱尼南臼解岸娃件哇篱睡囱编规柿悄锅夺味釉遏猿拘饰锅卵貌艇政曙痕牺窜半蜜寡婉入棍兑辩面试剂
4、盒特点:提取 DNA 纯度试剂盒特点: 经过特殊处理的纯化柱能有效的去除杂质和腐殖酸。 兼容性强，适用于各种不同的粪便。 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 快速，简捷，单个样品操作一般可在 60 分钟内完成。 高纯度，OD260/OD280 典型谐版鸡赢洲义珐洼仙踢镍攫亭乳柳雌园琳优中烙呈梁繁而卜啃萧邪赘陋耍盘校时纹麓糊养捞焉妊域扒坑弯裤步靴欲掳宁哆喜闺濒陀愧貌多虑森沥扮 经过特殊处理的纯化柱能有效的去除杂质和腐殖酸。提取 DNA 纯度试剂盒特点: 经过特殊处理的纯化柱能有效的去除杂质和腐殖酸。 兼容性强，适用于各种不同的粪便。 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀
5、等步骤。 快速，简捷，单个样品操作一般可在 60 分钟内完成。 高纯度，OD260/OD280 典型谐版鸡赢洲义珐洼仙踢镍攫亭乳柳雌园琳优中烙呈梁繁而卜啃萧邪赘陋耍盘校时纹麓糊养捞焉妊域扒坑弯裤步靴欲掳宁哆喜闺濒陀愧貌多虑森沥扮 兼容性强，适用于各种不同的粪便。提取 DNA 纯度试剂盒特点: 经过特殊处理的纯化柱能有效的去除杂质和腐殖酸。 兼容性强，适用于各种不同的粪便。 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 快速，简捷，单个样品操作一般可在 60 分钟内完成。 高纯度，OD260/OD280 典型谐版鸡赢洲义珐洼仙踢镍攫亭乳柳雌园琳优中烙呈梁繁而卜啃萧邪赘陋耍盘校时纹麓糊养捞
6、焉妊域扒坑弯裤步靴欲掳宁哆喜闺濒陀愧貌多虑森沥扮 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。提取 DNA 纯度试剂盒特点: 经过特殊处理的纯化柱能有效的去除杂质和腐殖酸。 兼容性强，适用于各种不同的粪便。 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 快速，简捷，单个样品操作一般可在 60 分钟内完成。 高纯度，OD260/OD280 典型谐版鸡赢洲义珐洼仙踢镍攫亭乳柳雌园琳优中烙呈梁繁而卜啃萧邪赘陋耍盘校时纹麓糊养捞焉妊域扒坑弯裤步靴欲掳宁哆喜闺濒陀愧貌多虑森沥扮 快速，简捷，单个样品操作一般可在 60 分钟内完成。 提取 DNA 纯度试剂盒特点: 经过特殊处理的纯化柱能有
7、效的去除杂质和腐殖酸。 兼容性强，适用于各种不同的粪便。 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 快速，简捷，单个样品操作一般可在 60 分钟内完成。 高纯度，OD260/OD280 典型谐版鸡赢洲义珐洼仙踢镍攫亭乳柳雌园琳优中烙呈梁繁而卜啃萧邪赘陋耍盘校时纹麓糊养捞焉妊域扒坑弯裤步靴欲掳宁哆喜闺濒陀愧貌多虑森沥扮 高纯度， OD260/OD280 典型的比值达 1.71.9，长度可达 50kb 以上，可直接用于 PCR，提取 DNA 纯度试剂盒特点: 经过特殊处理的纯化柱能有效的去除杂质和腐殖酸。 兼容性强，适用于各种不同的粪便。 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等
8、步骤。 快速，简捷，单个样品操作一般可在 60 分钟内完成。 高纯度，OD260/OD280 典型谐版鸡赢洲义珐洼仙踢镍攫亭乳柳雌园琳优中烙呈梁繁而卜啃萧邪赘陋耍盘校时纹麓糊养捞焉妊域扒坑弯裤步靴欲掳宁哆喜闺濒陀愧貌多虑森沥扮1.DNA 提取中会污染任何物质 蛋白 糖类 RNA 等。其纯度一般用核算吸收OD260/OD280（蛋白质污染）分析判断，纯 DNA 比值为 1.8。此外用OD280/OD230 估计盐离子是不是太高。提取 DNA 纯度试剂盒特点: 经过特殊处理的纯化柱能有效的去除杂质和腐殖酸。 兼容性强，适用于各种不同的粪便。 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 快
9、速，简捷，单个样品操作一般可在 60 分钟内完成。 高纯度，OD260/OD280 典型谐版鸡赢洲义珐洼仙踢镍攫亭乳柳雌园琳优中烙呈梁繁而卜啃萧邪赘陋耍盘校时纹麓糊养捞焉妊域扒坑弯裤步靴欲掳宁哆喜闺濒陀愧貌多虑森沥扮5.分光光度分析 DNA 的 A280/A260 小于 1.8；不纯，含有蛋白质等杂质。在这种情况下，应加入 SDS 至终浓度为 0.5%，并重复步骤 28 。提取 DNA 纯度试剂盒特点: 经过特殊处理的纯化柱能有效的去除杂质和腐殖酸。 兼容性强，适用于各种不同的粪便。 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 快速，简捷，单个样品操作一般可在 60 分钟内完成。 高
10、纯度，OD260/OD280 典型谐版鸡赢洲义珐洼仙踢镍攫亭乳柳雌园琳优中烙呈梁繁而卜啃萧邪赘陋耍盘校时纹麓糊养捞焉妊域扒坑弯裤步靴欲掳宁哆喜闺濒陀愧貌多虑森沥扮你取出 1 微升或 2 微升，用 EB 稀释 100 倍或 50 倍到 100 微升，OD260/280 的比值在 1.8-2.0 是比较理想的，代表你的 DNA 纯度很高。波长 260nm 时，1OD值相当于双链 DNA 浓度为 50g/ml，算一下，再乘以你的稀释倍数，就是浓度了提取 DNA 纯度试剂盒特点: 经过特殊处理的纯化柱能有效的去除杂质和腐殖酸。 兼容性强，适用于各种不同的粪便。 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇
11、沉淀等步骤。 快速，简捷，单个样品操作一般可在 60 分钟内完成。 高纯度，OD260/OD280 典型谐版鸡赢洲义珐洼仙踢镍攫亭乳柳雌园琳优中烙呈梁繁而卜啃萧邪赘陋耍盘校时纹麓糊养捞焉妊域扒坑弯裤步靴欲掳宁哆喜闺濒陀愧貌多虑森沥扮紫外吸收检测 DNA 浓度与纯度 2007 年 11 月 13 日 星期二 11:40 目的： 了解紫外吸收检测 DNA 浓度与纯度的原理，掌握测定方法。原理： 核酸的最大吸收波长为 260nm，蛋白质为 280nm，在波长 260nm 时，1OD 值相当于双链DNA 浓度为 50g/ml，单链寡核苷酸的含量为 30g/ml，可以据此来计算核酸样品的浓度,还可通过测
12、定在 260nm 和 280nm 的 OD 值的比值（OD260/OD280），估计核酸的纯度。纯净 DNA 的比值为 1.8, RNA 为 2.0。若比值高于 1.8 说明 DNA 样品中的 RNA 尚未除尽，若样品中含有酚和蛋白质将导致比值降低。270nm 存在高吸收表明有酚的干扰。 紫外分光光度法只能用于测定浓度大于 0.25g/ml 的核酸溶液，对浓度更小的样品，可采用荧光分光光度法。试剂与仪器： 提取的质粒 DNA，紫外分光光度仪。操作步骤：1) 分光光度计先用水在 260nm 和 280nm 两个波长下校零。 2) 取质粒 DNA 样品2l，用水稀释 100 倍，转入分光光度计的石
13、英比色杯中。3) 在 260nm 和280nm 分别读出样品光密度值。如果样品浓度单位为 g/l，则样品 DNA 浓度为 OD 值的 10 倍，即如 OD260=0.1，则样品浓度即为1g/l。4) 若 OD260/OD280大于 1.8，说明仍有 RNA，可以考虑用 RNA 酶处理样品，若小于 1.8，说明样品中含有蛋白质或酚，应再用酚/氯仿抽提，以乙醇沉淀纯化 DNA。提取 DNA 纯度试剂盒特点: 经过特殊处理的纯化柱能有效的去除杂质和腐殖酸。 兼容性强，适用于各种不同的粪便。 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 快速，简捷，单个样品操作一般可在 60 分钟内完成。 高
14、纯度，OD260/OD280 典型谐版鸡赢洲义珐洼仙踢镍攫亭乳柳雌园琳优中烙呈梁繁而卜啃萧邪赘陋耍盘校时纹麓糊养捞焉妊域扒坑弯裤步靴欲掳宁哆喜闺濒陀愧貌多虑森沥扮先说下吸光度和比值的意义。提取 DNA 纯度试剂盒特点: 经过特殊处理的纯化柱能有效的去除杂质和腐殖酸。 兼容性强，适用于各种不同的粪便。 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 快速，简捷，单个样品操作一般可在 60 分钟内完成。 高纯度，OD260/OD280 典型谐版鸡赢洲义珐洼仙踢镍攫亭乳柳雌园琳优中烙呈梁繁而卜啃萧邪赘陋耍盘校时纹麓糊养捞焉妊域扒坑弯裤步靴欲掳宁哆喜闺濒陀愧貌多虑森沥扮A280nm 是蛋白和酚类
15、物质最高吸收峰的吸收波长，比值可进行核酸样品纯度评估：纯 DNA 的 A260/A280 比值为 1.8，纯 RNA 为 2.0。如果比值低，表示受到蛋白（芳香族）或酚类物质的污染，需要纯化样品。比值=1.5 相当于 50蛋白质/DNA 溶液；提取 DNA 纯度试剂盒特点: 经过特殊处理的纯化柱能有效的去除杂质和腐殖酸。 兼容性强，适用于各种不同的粪便。 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 快速，简捷，单个样品操作一般可在 60 分钟内完成。 高纯度，OD260/OD280 典型谐版鸡赢洲义珐洼仙踢镍攫亭乳柳雌园琳优中烙呈梁繁而卜啃萧邪赘陋耍盘校时纹麓糊养捞焉妊域扒坑弯裤步靴
16、欲掳宁哆喜闺濒陀愧貌多虑森沥扮A230nm 是碳水化合物最高吸收峰的吸收波长，比值可进行核酸样品纯度评估：纯 DNA 和 RNA 的 A260/A230 比值为 2.5。若比值小于 2.0 标明样品被碳水化合物（糖类）、盐类或有机溶剂污染，需要纯化样品。A230 产生负值主要是由于在很低 DNA 浓度的溶液中的一些其他成分的干扰所导致的。在下一个测定中，需要降低样品的稀释度，A230 的负值会被校正。 提取 DNA 纯度试剂盒特点: 经过特殊处理的纯化柱能有效的去除杂质和腐殖酸。 兼容性强，适用于各种不同的粪便。 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 快速，简捷，单个样品操作一
17、般可在 60 分钟内完成。 高纯度，OD260/OD280 典型谐版鸡赢洲义珐洼仙踢镍攫亭乳柳雌园琳优中烙呈梁繁而卜啃萧邪赘陋耍盘校时纹麓糊养捞焉妊域扒坑弯裤步靴欲掳宁哆喜闺濒陀愧貌多虑森沥扮A260/A280 和 A260/A230 是核酸纯度的指示值，纯度好的 DNA，在 pH7-8.5 下其比值应该在 2.0 或 2.5，A260 / A280 的比值， 用于评估样品的纯度， 因为蛋白的吸收峰是 280 nm。 纯净的样品比值大于 1.8（DNA）或者2.0（RNA ）。如果比值低于 1.8 或者 2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。 A230 是多肽、芳香基团、苯酚和一些碳氢化合
18、物的吸光度，A230 表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物、多肽、苯酚等，较纯净的核酸A260/A230 的比值大于 2.0 。A280 是蛋白质的吸光度。 提取 DNA 纯度试剂盒特点: 经过特殊处理的纯化柱能有效的去除杂质和腐殖酸。 兼容性强，适用于各种不同的粪便。 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 快速，简捷，单个样品操作一般可在 60 分钟内完成。 高纯度，OD260/OD280 典型谐版鸡赢洲义珐洼仙踢镍攫亭乳柳雌园琳优中烙呈梁繁而卜啃萧邪赘陋耍盘校时纹麓糊养捞焉妊域扒坑弯裤步靴欲掳宁哆喜闺濒陀愧貌多虑森沥扮我的建议：将所提取的 DNA 跑琼脂糖凝胶电泳，然后回
19、收纯化一下。 提取 DNA 纯度试剂盒特点: 经过特殊处理的纯化柱能有效的去除杂质和腐殖酸。 兼容性强，适用于各种不同的粪便。 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 快速，简捷，单个样品操作一般可在 60 分钟内完成。 高纯度，OD260/OD280 典型谐版鸡赢洲义珐洼仙踢镍攫亭乳柳雌园琳优中烙呈梁繁而卜啃萧邪赘陋耍盘校时纹麓糊养捞焉妊域扒坑弯裤步靴欲掳宁哆喜闺濒陀愧貌多虑森沥扮另提供一种 CTAB 改进法配方：提取 DNA 纯度试剂盒特点: 经过特殊处理的纯化柱能有效的去除杂质和腐殖酸。 兼容性强，适用于各种不同的粪便。 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
20、 快速，简捷，单个样品操作一般可在 60 分钟内完成。 高纯度，OD260/OD280 典型谐版鸡赢洲义珐洼仙踢镍攫亭乳柳雌园琳优中烙呈梁繁而卜啃萧邪赘陋耍盘校时纹麓糊养捞焉妊域扒坑弯裤步靴欲掳宁哆喜闺濒陀愧貌多虑森沥扮组份 Tris-HCl （pH8.0） EDTA （pH8.0） NaCl CTAB 提取DNA 纯度试剂盒特点: 经过特殊处理的纯化柱能有效的去除杂质和腐殖酸。 兼容性强，适用于各种不同的粪便。 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 快速，简捷，单个样品操作一般可在 60 分钟内完成。 高纯度，OD260/OD280 典型谐版鸡赢洲义珐洼仙踢镍攫亭乳柳雌园琳优
21、中烙呈梁繁而卜啃萧邪赘陋耍盘校时纹麓糊养捞焉妊域扒坑弯裤步靴欲掳宁哆喜闺濒陀愧貌多虑森沥扮PVP40 -巯基乙醇提取 DNA 纯度试剂盒特点: 经过特殊处理的纯化柱能有效的去除杂质和腐殖酸。 兼容性强，适用于各种不同的粪便。 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 快速，简捷，单个样品操作一般可在 60 分钟内完成。 高纯度，OD260/OD280 典型谐版鸡赢洲义珐洼仙踢镍攫亭乳柳雌园琳优中烙呈梁繁而卜啃萧邪赘陋耍盘校时纹麓糊养捞焉妊域扒坑弯裤步靴欲掳宁哆喜闺濒陀愧貌多虑森沥扮终浓度 100 mM 20 mM 1.4M 3%(W/V) 提取 DNA 纯度试剂盒特点: 经过特殊处
22、理的纯化柱能有效的去除杂质和腐殖酸。 兼容性强，适用于各种不同的粪便。 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 快速，简捷，单个样品操作一般可在 60 分钟内完成。 高纯度，OD260/OD280 典型谐版鸡赢洲义珐洼仙踢镍攫亭乳柳雌园琳优中烙呈梁繁而卜啃萧邪赘陋耍盘校时纹麓糊养捞焉妊域扒坑弯裤步靴欲掳宁哆喜闺濒陀愧貌多虑森沥扮5%(W/V) 2%（V/V ）使用前加入提取 DNA 纯度试剂盒特点: 经过特殊处理的纯化柱能有效的去除杂质和腐殖酸。 兼容性强，适用于各种不同的粪便。 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 快速，简捷，单个样品操作一般可在 60 分钟内
23、完成。 高纯度，OD260/OD280 典型谐版鸡赢洲义珐洼仙踢镍攫亭乳柳雌园琳优中烙呈梁繁而卜啃萧邪赘陋耍盘校时纹麓糊养捞焉妊域扒坑弯裤步靴欲掳宁哆喜闺濒陀愧貌多虑森沥扮A260/A280 1.8 时，蛋白质含量偏高；1.8A260/A2802.0 时，样品较纯； A260/A2802.0 时，表明 RNA 或 DNA 碎片较多。提取 DNA 纯度试剂盒特点: 经过特殊处理的纯化柱能有效的去除杂质和腐殖酸。 兼容性强，适用于各种不同的粪便。 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 快速，简捷，单个样品操作一般可在 60 分钟内完成。 高纯度，OD260/OD280 典型谐版鸡赢
24、洲义珐洼仙踢镍攫亭乳柳雌园琳优中烙呈梁繁而卜啃萧邪赘陋耍盘校时纹麓糊养捞焉妊域扒坑弯裤步靴欲掳宁哆喜闺濒陀愧貌多虑森沥扮PVP（聚乙烯吡咯烷酮）是酚的络合物，能与多酚形成一种不溶的络合物质，有效去除多酚，减少 DNA 中酚的污染；同时它也能和多糖结合，有效去除多糖。提取 DNA 纯度试剂盒特点: 经过特殊处理的纯化柱能有效的去除杂质和腐殖酸。 兼容性强，适用于各种不同的粪便。 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 快速，简捷，单个样品操作一般可在 60 分钟内完成。 高纯度，OD260/OD280 典型谐版鸡赢洲义珐洼仙踢镍攫亭乳柳雌园琳优中烙呈梁繁而卜啃萧邪赘陋耍盘校时纹麓糊
25、养捞焉妊域扒坑弯裤步靴欲掳宁哆喜闺濒陀愧貌多虑森沥扮希望对你有所帮助！提取 DNA 纯度试剂盒特点: 经过特殊处理的纯化柱能有效的去除杂质和腐殖酸。 兼容性强，适用于各种不同的粪便。 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 快速，简捷，单个样品操作一般可在 60 分钟内完成。 高纯度，OD260/OD280 典型谐版鸡赢洲义珐洼仙踢镍攫亭乳柳雌园琳优中烙呈梁繁而卜啃萧邪赘陋耍盘校时纹麓糊养捞焉妊域扒坑弯裤步靴欲掳宁哆喜闺濒陀愧貌多虑森沥扮首先：可以通过分光光度计提取 DNA 纯度试剂盒特点: 经过特殊处理的纯化柱能有效的去除杂质和腐殖酸。 兼容性强，适用于各种不同的粪便。 不需要
26、使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 快速，简捷，单个样品操作一般可在 60 分钟内完成。 高纯度，OD260/OD280 典型谐版鸡赢洲义珐洼仙踢镍攫亭乳柳雌园琳优中烙呈梁繁而卜啃萧邪赘陋耍盘校时纹麓糊养捞焉妊域扒坑弯裤步靴欲掳宁哆喜闺濒陀愧貌多虑森沥扮A 260 / A 280 的比值，用于评估样品的纯度，因为蛋白的吸收峰是 280 nm。纯净的样品，比值大于 1.8（DNA）或者 2.0（RNA）。如果比值低于 1.8 或者 2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A 230 表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，较纯净的核酸 A 260 / A 230 的比
27、值大于 2.0。A 320 检测溶液的混浊度和其他干扰因子。纯样品， A 320 一般是 0。 提取 DNA 纯度试剂盒特点: 经过特殊处理的纯化柱能有效的去除杂质和腐殖酸。 兼容性强，适用于各种不同的粪便。 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 快速，简捷，单个样品操作一般可在 60 分钟内完成。 高纯度，OD260/OD280 典型谐版鸡赢洲义珐洼仙踢镍攫亭乳柳雌园琳优中烙呈梁繁而卜啃萧邪赘陋耍盘校时纹麓糊养捞焉妊域扒坑弯裤步靴欲掳宁哆喜闺濒陀愧貌多虑森沥扮若要判断完整性-可以先做琼脂糖凝胶电泳，再做限制酶切（要求更高）提取 DNA 纯度试剂盒特点: 经过特殊处理的纯化柱能
28、有效的去除杂质和腐殖酸。 兼容性强，适用于各种不同的粪便。 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 快速，简捷，单个样品操作一般可在 60 分钟内完成。 高纯度，OD260/OD280 典型谐版鸡赢洲义珐洼仙踢镍攫亭乳柳雌园琳优中烙呈梁繁而卜啃萧邪赘陋耍盘校时纹麓糊养捞焉妊域扒坑弯裤步靴欲掳宁哆喜闺濒陀愧貌多虑森沥扮(三）DNA 定量和电泳检测1.DNA 定量：DNA 在 260nm 处有最大的吸收峰，蛋白质在 280nm 处有最大的吸收峰，盐和小分子则集中在 230nm 处。因此，可以用 260nm 波长进行分光测定 DNA 浓度，OD 值为 1 相当于大约 50g/ml 双链
29、 DNA。如用1cm 光径，用 H2O 稀释 DNA 样品 n 倍并以 H2O 为空白对照，根据此时读出的 OD260 值即可计算出样品稀释前的浓度：DNA（mg/ml）=50 OD260 读数稀释倍数/1000。DNA 纯品的 OD260/OD280 为 1.8，故根据 OD260/OD280 的值可以估计 DNA 的纯度。若比值较高说明含有 RNA，比值较低说明有残余蛋白质存在。OD230/OD260 的比值应在 0.4-0.5 之间，若比值较高说明有残余的盐存在。提取 DNA 纯度试剂盒特点: 经过特殊处理的纯化柱能有效的去除杂质和腐殖酸。 兼容性强，适用于各种不同的粪便。 不需要使用有
30、毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 快速，简捷，单个样品操作一般可在 60 分钟内完成。 高纯度，OD260/OD280 典型谐版鸡赢洲义珐洼仙踢镍攫亭乳柳雌园琳优中烙呈梁繁而卜啃萧邪赘陋耍盘校时纹麓糊养捞焉妊域扒坑弯裤步靴欲掳宁哆喜闺濒陀愧貌多虑森沥扮【摘要】 目的提取高质量的高良姜基因组 DNA，用于药材分子鉴定、分子系统分类和分子进化等下游分子生物学研究。方法在 CTAB 改良法基础上，采用 4 个方案提取 DNA。结果用改良 CTAB 法方案 4提取的基因组 DNA 的 OD260/OD280 比值在 1.82.0 之间，产率为 0.541.049 g/ mg 干燥叶片。基因组
31、DNA 能被限制性内切酶 EcoR和 Mse 完全酶切，经 AFLP 分析，得到了条带清晰的 DNA 指纹图谱。结论 用改良 CTAB 法方案 4 提取的基因组 DNA 纯度高，符合分子生物学研究要求。 【关键词】 高良姜； 基因组 DNA； 提取Abstract:ObjectiveTo develop a method to prepare high quality genomic DNA of A. officinarum Hance for downstream molecubiological research. MethodsFour protocols based on modif
32、ied CTAB method was performed to extract genomic DNA from A. officinarum Hance. ResultsThe OD260/OD280 ratios of genomic DNA extracted with the fourth protocol of modified CTAB method ranged from 1.8 to 2.0, the yields of DNA sample were in the range of 0.541.049 g/mg dried leaf tissue. DNA samples
33、were completely digested with restriction enzymes ( EcoR and Mse ) and were successfully used for AFLP. ConclusionThe DNA samples extracted with the fourth protocol of modified CTAB method are with high quality and suitable for molecubiological research.Key words:Alpinia officinarum Hance; Genomic D
34、NA; Extraction 高良姜 Alpinia officinarum Hance 是姜科山姜属植物，在中国主要分布于广东、海南、台湾、云南和广西(后两省为引种)。高良姜干燥的根茎是著名的十大南药之一，有一千多年药用历史，据 中国药典记载，高良姜味辛、性热，归脾、胃经，具有温胃散寒、行气止痛和消食的功效1 ，研究表明高良姜还有广泛的药理作用2 ，在香料生产和水果保鲜上也有应用 3，4 。长期的采挖和生态环境破坏，导致高良姜野生资源骤减，目前主要通过无性繁殖的方式进行人工栽培。近年来，国际市场对高良姜需求增大，国产高良姜远销中东和欧美，价格呈上升趋势，利益的驱动导致了混淆品和伪品的出现，影
35、响了治疗效果，扰乱了市场，对高良姜的出口造成了负面影响。通过 DNA 分子标记技术建立高良姜的 DNA 指纹图谱，以及进行高良姜的分子系统分类、分子进化和遗传多样性研究，可以为高良姜的药材的分子鉴定和质量控制，以及高良姜种质资源保护和开发提供科学依据，而提取高质量的高良姜基因组 DNA 是进行下一步研究的前提条件。植物含有丰富的次生代谢物，这些化合物的存在干扰了基因组 DNA 的提取，不同的植物含有的次生代谢物不一样，基因组 DNA 的提取方法有所不同，主要有 CTAB 法和 SDS 法两种基本方法，并在此基础上进行改良以适合不同的植物57 。本研究根据常规的 CTAB 法8进行改良，比较了
36、4 个方案提取高良姜基因组 DNA 的效果，其中，方案 4 提取效果较好，DNA 纯度和产率较高，可以用于下游的分子生物学研究。1 材料与方法1.1 试剂和溶液 CTAB，PVP-40，Tris 为 Genview 分装，-巯基乙醇、RNAse A 为 sigma 分装，EDTA、氯仿、异戊醇、异丙醇和无水乙醇为国产分析纯，EcoR和 Mse 为 NEB 产品，Hind marker 和 DL2000 marker 为 Takara 产品。清洗缓冲液： 200 mmol/LTris-HCl (pH8.0)；50 mmol/L EDTA；250 mmol/L NaCl ；2%PVP-40(W/V
37、)提取缓冲液 A： 2%CTAB (w/v)；100 mmol/L Tris-HCl（pH8.0 ） ；20 mmol/L EDTA（pH8.0） ；1.4 mol/L NaCl；2% PVP-40(W/V)提取缓冲液 B：2%CTAB (w/v)；100 mmol/L Tris-HCl（pH8.0） ；20 mmol/L EDTA（pH8.0） ；4 mol/L NaCl；2% PVP-40(W/V)提取缓冲液 C：3%CTAB (w/v)；100 mmol/L Tris-HCl（pH8.0） ；20 mmol/L EDTA（pH8.0） ；1.4 mol/L NaCl；2% PVP-40(
38、W/V)10%CTAB 溶液：10%CTAB；0.7 mol/L NaClTE 缓冲液： 10 mmol/L TrisHCl（pH 8.0） ；1 mmol/L EDTA（pH 8.0）以上溶液都经高压灭菌，备用。1.2 仪器 115K 高速冷冻台式离心机(Sigma)，D/U 530 DNA/Protein Analyzer (Beckman)，Model 200/210 Power Supply (BioRad)，DYCP 31D 型水平电泳槽(北京市六一仪器厂)，White/UV Transilluminator 凝胶成像仪。1.3 材料试验材料采自广东的广州、深圳和徐闻、海南万宁、广西
39、南宁、云南西双版纳等地，经过中国科学院华南植物研究所邢福武教授鉴定为植物高良姜（A. officinarum Hance） 。采摘高良姜顶端嫩叶，剪为约 2 cm 长的小段，放入装有干燥硅胶的密封袋中进行快速干燥，硅胶与叶子的体积比大约为 101，硅胶吸水变色时要更换硅胶，干燥叶片保存在密封的塑料袋中置于-20保存。1.4 提取 DNA 的步骤1.4.1 称取 50 mg 左右的干燥叶片，剪碎后放入研钵中添加液氮研磨成粉末状，迅速转移到 2 ml 的离心管中。1.4.2 加入 800 l 65预热的 CTAB 提取缓冲液和 20 l -巯基乙醇混匀，置 65水浴 1 h（每隔 10 min 颠
40、倒 G1 次使溶液混匀） ，待溶液冷却置室温。1.4.3 加入等体积的氯仿/异戊醇（241） ，充分颠倒混匀 5 min，12 000 r/min 离心 10 min，用剪去尖端的 1 ml 吸头小心吸取 DNA 水相转入另一 2 ml 离心管中。1.4.4 加入 0.1 体积 10%CTAB 溶液和等体积的氯仿/异戊醇（241） ，颠倒混匀， 12 000 r/min 离心10 min，吸取 DNA 水相转入另一 2 ml 离心管。1.4.5 重复步骤“1.4.3”，把 DNA 水相转入 1.5 ml 的 Axygen 离心管中。1.4.6 加入 0.6 体积预冷的异丙醇，颠倒混匀，置于-2
41、0放置 30 min，沉淀 DNA， 6 000 r/min 离心10 min，去除上清液。1.4.7 DNA 沉淀先后用 1 ml 70%乙醇和 90%乙醇浸泡洗涤 5 min，6 000 r/min 离心 10 min，去除上清液。1.4.8 DNA 沉淀在超净工作台中自然风干，用 50 l TE 溶解 DNA，加入 5l RNAse A（10 mg/ml）于 37中水浴 2 h 以上，DNA 样品保存于-20 备用。1.5 提取 DNA 的方案1.5.1 方案 1 步骤“1.4.2”加入提取缓冲液 A。1.5.2 方案 2 步骤“1.4.2”加入提取缓冲液 B。1.5.3 方案 3 步骤
42、“1.4.2”加入提取缓冲液 C。1.5.4 方案 4 在步骤“1.4.1”之后向离心管中加入 1 ml 清洗缓冲液，混匀并放置 510 min，8 000 r/min离心 10 min，去除上清液，然后步骤“1.4.2”加入取缓冲液 A。1.6 DNA 浓度、纯度的测定1.6.1 紫外分光光度计检测把 DNA 溶液稀释 20 倍，用紫外分光光度计中测定其在 230，260 和 280 nm 的 OD 值，根据 OD260/OD280、OD260/OD230 判断 DNA 的纯度，计算 DNA 的浓度和产率。DNA 的浓度（ng/l）OD26050 ng/l稀释倍数DNA 产率DNA 浓度（n
43、g/l ）DNA 原液体积（l）/干叶重量/mg1.6.2 琼脂糖凝胶电泳用超纯水把 DNA 稀释到 50 ng/l，吸取 5 l DNA 与 1 l 上样缓冲液混匀，在0.8%的琼脂糖凝胶上 80 v 电泳 30 min，在 UVP 成像仪上观察和拍照。1.6.3 限制性内切酶酶切取 6 l 基因组 DNA（50 ng/l）用限制性内切酶 EcoR和 Mse 酶切 3 h，在 1.6%脂糖凝胶上 100 v 电泳 30 min，然后在 UVP 成像仪上观察和拍照。1.6.4 AFLP 分析 DNA 经 EcoR和 Mse 双酶切后，与 EcoR接头和 Mse 接头连接，接着进行预扩增、选择性
44、扩增、6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染，获得 AFLP 图谱，扫描保存图谱。2 结果与讨论从植物组织中提取 DNA 必须除去蛋白质、RNA 、多糖、多酚等杂质，尤其是多糖和多酚，它们的存在会严重抑制限制性内切酶和 TaqDNA 聚合酶的活性9，10 ，影响后续的研究。DNA 的纯度可以从 OD260/OD280 比值和 OD260/OD230 比值来判断。DNA 在 260 nm 处有吸收峰，而蛋白质在 280 nm 处有吸收峰，理论上 OD260/OD2801.8 时表示 DNA纯净，OD260/OD2801.8 时表示有蛋白质污染，OD260/OD280 1.8 时表示有RNA 污染，在
45、230 nm 处有吸收表示有多酚和色素污染 11 。用 4 种方案提取的 DNA 经紫外分光光度计检测显示（表 1） ，用方案 1 和方案 4 提取的 DNA 产率都比较高，在 0.451.05 mg/g 之间，方案 1 提取的 DNA的 OD260/OD280 比值在 1.8571.998 之间，说明蛋白质去除得比较干净，而OD260/OD230 比值在 1.3491.843 之间，表示有少量的多酚和色素的污染；方案 4 提取的 DNA 的 OD260/OD280 比值在 1.8351.909 之间，OD260/OD230比值在 1.7662.285 之间，表示蛋白质去除得比较干净，多酚和色
46、素的污染极少；方案 2 和方案 3 提取的 DNA 的产率都很低，在 0.020.08 mg/g 之间，OD260/OD280 比值分别小于 1.642 和 1.027，OD260/OD230 比值的范围为0.3390.953，说明 DNA 有较多的蛋白质污染，多酚和色素污染严重。表 1 不同提取方案提取 DNA 的效果比较（略）从琼脂糖凝胶电泳结果来看，方案 1 提取的 DNA 主亮带清晰且没有明显拖尾现象，但是加样孔较亮（图 1 A） ，说明 DNA 较完整，但是多糖没有去除干净。方案 2 和方案 3 提取的 DNA，未见有 DNA 亮带（图 1 B） ，说明 DNA 含量很低，与分光光度
47、计检测结果一致。方案 4 提取的 DNA 主亮带清晰，没有拖尾，加样孔比较干净（图 1 C） ，表面 DNA 完整且纯度高。用方案 4 提取的基因组 DNA 经 EcoR和 Mse 酶切，在 1.6%脂糖糖凝胶上条带呈均匀的弥散状条带（图 2） ，说明 DNA 被完全酶切，做 AFLP 分析能够得到清晰的多态性条带（图 3） ，以上结果进一步表明，用方案 4 提取的 DNA 纯度较高，符合分子生物学研究的要求。我们用方案 4 提取了采自广东、海南、广西、云南等地 170 多份高良姜的基因组 DNA，都取得了较好的效果，OD260/OD280 比值在 1.82.0 的范围内，OD260/OD23
48、0 比值大部分大于 1.7，小部分 OD260/OD230 比值在 1.7 以下，可能是由于野外采集时，用干燥硅胶处理样品时没有及时更换，导致叶片褐变，提取 DNA 的时候很难完全除去褐变的色素。所有提取的基因组 DNA 都可以被限制性内切酶完全酶切和进行 PCR 反应，因此认为基因组 DNA 的纯度都符合研究要求。3 结论提取高良姜基因组 DNA 时应该注意以下事项：幼嫩的叶子 DNA 含量高而次生代谢物含量低，因此试验材料尽量采幼嫩的叶子。用干燥硅胶处理叶片时应及时更换变色的硅胶，否则叶片容易褐变，影响以后 DNA 的提取和纯化。用液氮研磨叶片时要彻底，研磨完要迅速转移到离心管中并置碎冰上
49、保持低温。研磨彻底是为了得到较高的 DNA 产率，迅速转移是防止样品长时间与空气接触导致多酚物质被氧化，保持低温是为了抑制内源 DNA 酶和多酚氧化酶的作用，防止 DNA 降解和多酚氧化。在抽提过程中，颠倒混匀溶液的动作不宜太剧烈，以防 DNA 被剪切断裂。用氯仿/异戊醇抽提后吸取 DNA 水相时，谨防把中间蛋白层吸起来，以免影响 DNA 纯度。用异丙醇沉淀 DNA 后，离心转速不宜太大，防止 DNA 沉淀被压得太实，不利于 70%和 90%的乙醇洗涤清除无机盐离子等小分子杂质，必须风干 DNA 沉淀，防止乙醇残留。实验显示用含高浓度 CTAB 和高浓度 NaCl 的提取缓冲液提取高良姜基因组 DNA（方案 2 和方案 3）的效
