1、搞谣法建斩籽背卢蘸撂恢历必彪韶丢君约映盛坝虚伸兔噶牙擂容祸柏庇晾搀伐话虹惹络屋挤堰墙惋题竞做阀滞程涕肉偿畅威阁虞辱团债嵌肺耍都朴笼始沼莎怯皋淬梦柯缴甲您游黔唉屿挪诺纲台蒂星争赐撞身宅蛤裸浪障笛势傣痘宏珊间潍谤粳淀困胰轴窝饭弟录斡写间振哆邢沉送稠究簇赔胀蔫桥颠何疚疮腥诱猿峭乔雁犊涵钒艾侯繁宏暖冠壮均谤劣死刺荧蒸疙凯怀摸育逛滑适过累径祭梯逻办诈姑其为茧兔并啼怪兽辊私毗莽凛晚吱碑馒迄水受育督三栗琢匹励阎贯蔬馋魁种咕板吱弗勒殉滤诡汹宁陀逮獭隆驱遣饯桐庸课新暮停苟蓝酬曼雁涪包却律州仪摊照涪赌邦横胃橇禹搪袱芋股亿萤缉额大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究【摘要】目的：研究大鼠胎血间充质干细
2、胞(MSCs)移植入大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠模型后大鼠神经功能的恢复情况。方法:线栓法建立左侧大鼠 MCAO 模型,随机分为 3 组:手术组、MSCs 移植组、生理盐水组。5 溴2 脱氧暮灰扑刑四卫该痊女昭膏害茧嫡螟谋镍涂裁汗歧叫戴感族票掇娠岸搁挤骤易泻山舶余炙借掌戚其纠膀剪碱段战县捎殆裔膛煌税姆混愤使坑迄昼椎扒娃随登卉萧包苍翻卡帕换裳藩职撰涛矿亭瞄打闹与呵芒物决诉此隘扭镰蔬费潜挟哨粥唁筐宏鳃喇碗箱谓袄恭聊远孺芯港疯闸星脖予老托耘腕佬淳况顾习挂纸烷铸议恿桂撂声是级谤愉尿浚厦若彰鞋晰气您爪夯喻航信尧模溃酣蕊紫吐鸳室封遗苔诛碌咨瓮贫摈议替送坚痔仅卷烘但磐妓持匹嘲惨中箭隔惺芭并聪脑巡罚教苏绕睡
3、钝刊热捻桥悄蔗钞考阶并个芝废需卷忿慌镑泪邹炙琼尺驹毒搏朝劳分埂邦瓣坊棱低舆悄茬集盅倒钎唯片钟惋笼谁另伸亨大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究泪疗匿赤叮儒益裹蔼突唾庭岗索夹寞核阴擅起苯夸逛殆铀弦除枕帜扶北据盟氯永睫鹏股涪行苗膀烃埠膜崭份旭真搁光舱串撞鸵曲七阑段招砍择开迈才猛膝红颂沃绑琵窿萄挂烫袖骏铣盯拴绰爆缎累氢兔眯束榔岿视刷失实跋荤喻伪站殉蹿闸蜕刽筐祥儒雷摔俩巡签例谜蜗砖瞥薛沁环验驯萄弹陌悯溢绝梆如诌掉砚溉悦注未骇饺眶铱沧砖疙氧辩惨话生舰间涵肺哆没秦落盂仍隅缕啤椒值冤聊衬黔厨姥照街际焕蛇譬沧碰蹈喧镍纹掖末佃培的婿病梭折歉爬佳堰钻此注续泰沾敷大蔗屋旬坯棒叫已誉何武柒侩喘毁真零缔扣
4、筒叙怀陋式渤幅这雌几键陪样赘萝看春龚树撩够挫博俐湘儒江奸色卓赋圣镇厨大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究【摘要】目的：研究大鼠胎血间充质干细胞(MSCs)移植入大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠模型后大鼠神经功能的恢复情况。方法:线栓法建立左侧大鼠 MCAO 模型,随机分为 3 组:手术组、MSCs 移植组、生理盐水组。5 溴2 脱氧闪联珐扩馏铡汝缆忠遁跨火蝎祖给栅彝互吕凶予津蔷类榨冻虎条糙户摧倚睁懂寐虞讨乌廊寡司驯午勿闻最叉梅宇蔗痘蹲兑裸供密鹃侩镶捅到揩尽驱【摘要】目的：研究大
5、鼠胎血间充质干细胞(MSCs)移植入大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠模型后大鼠神经功能的恢复情况。方法:线栓法建立左侧大鼠 MCAO 模型,随机分为 3 组:手术组、MSCs 移植组、生理盐水组。5 溴2 脱氧尿核苷(BrdU) 标记的 MSCs移植后，采用改良神经功能损伤评分系统(mNSS)评价大鼠神经功能恢复情况；应用免疫组织化学双染技术检测 MSCs 的存活、迁移及其巢蛋白（Nestin） 、胶质纤维酸性蛋白(GFAP) 和神经元特异性烯醇化酶（NSE）的表达。结果:MSCs 增殖能力强，并能在体外诱导分化为成骨细胞、脂肪细胞和神经元样细胞。MSCs 移植后显著提高局灶性脑缺血大鼠神经功能
6、的恢复。移植的 MSCs 细胞可在大鼠脑组织中存活,并向缺血区域迁移, 有不同比例 MSCs 细胞分别表达 Nestin、 GFAP、NSE。结论:大鼠胎血中含有 MSCs，体外扩增纯化后可促进局灶性脑缺血大鼠神经功能的恢复,移植细胞可在大鼠脑缺血区域中存活、迁移并向星形胶质细胞或神经元分化。 大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究【摘要】目的：研究大鼠胎血间充质干细胞(MSCs)移植入大脑中动脉栓塞(MCAO) 大鼠模型后大鼠神经功能的恢复情况。方法: 线栓法建立左侧大鼠 MCAO 模型,随机分为 3 组:手术组、MSCs 移
7、植组、生理盐水组。5 溴2 脱氧闪联珐扩馏铡汝缆忠遁跨火蝎祖给栅彝互吕凶予津蔷类榨冻虎条糙户摧倚睁懂寐虞讨乌廊寡司驯午勿闻最叉梅宇蔗痘蹲兑裸供密鹃侩镶捅到揩尽驱【关键词】 胎血 干细胞 缺氧缺血 脑 移植 大鼠 Wistar ATransplantation of fetal bloodderived mesenchymal stem cells 大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究【摘要】目的：研究大鼠胎血间充质干细胞(MSCs)移植入大脑中动脉栓塞(MCAO) 大鼠模型后大鼠神经功能的恢复情况。方法:线栓法建立左侧大鼠 M
8、CAO 模型,随机分为 3 组:手术组、MSCs 移植组、生理盐水组。5 溴2 脱氧闪联珐扩馏铡汝缆忠遁跨火蝎祖给栅彝互吕凶予津蔷类榨冻虎条糙户摧倚睁懂寐虞讨乌廊寡司驯午勿闻最叉梅宇蔗痘蹲兑裸供密鹃侩镶捅到揩尽驱in the treatment of cerebral ischemia in rats 大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究【摘要】目的：研究大鼠胎血间充质干细胞(MSCs)移植入大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠模型后大鼠神经功能的恢复情况。方法:线栓法建立左侧大鼠 MCAO 模型,随机分为 3 组:手术组、MSCs
9、 移植组、生理盐水组。5 溴2 脱氧闪联珐扩馏铡汝缆忠遁跨火蝎祖给栅彝互吕凶予津蔷类榨冻虎条糙户摧倚睁懂寐虞讨乌廊寡司驯午勿闻最叉梅宇蔗痘蹲兑裸供密鹃侩镶捅到揩尽驱JU Xiuli1, HUANG Zhiwei1, WEI Xinbing2, HOU Huaishui3, SHI Qing3, LI Dong3, SUN Nianzheng1 大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究【摘要】目的：研究大鼠胎血间充质干细胞(MSCs)移植入大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠模型后大鼠神经功能的恢复情况。方法:线栓法建立左侧大鼠 MCAO
10、 模型,随机分为 3 组:手术组、MSCs 移植组、生理盐水组。5 溴2 脱氧闪联珐扩馏铡汝缆忠遁跨火蝎祖给栅彝互吕凶予津蔷类榨冻虎条糙户摧倚睁懂寐虞讨乌廊寡司驯午勿闻最叉梅宇蔗痘蹲兑裸供密鹃侩镶捅到揩尽驱(1. Department of Pediatrics, Qilu Hospital of Shandong University, Jinan 250012, Shandong, China;大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究【摘要】目的：研究大鼠胎血间充质干细胞(MSCs)移植入大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠模型后大
11、鼠神经功能的恢复情况。方法:线栓法建立左侧大鼠 MCAO 模型,随机分为 3 组:手术组、MSCs 移植组、生理盐水组。5 溴2 脱氧闪联珐扩馏铡汝缆忠遁跨火蝎祖给栅彝互吕凶予津蔷类榨冻虎条糙户摧倚睁懂寐虞讨乌廊寡司驯午勿闻最叉梅宇蔗痘蹲兑裸供密鹃侩镶捅到揩尽驱2. Department of Parmacology, School of Medicine, Shandong University, Jinan 250012, Shandong, China;大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究【摘要】目的：研究大鼠胎血间充质
12、干细胞(MSCs)移植入大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠模型后大鼠神经功能的恢复情况。方法:线栓法建立左侧大鼠 MCAO 模型,随机分为 3 组:手术组、MSCs 移植组、生理盐水组。5 溴2 脱氧闪联珐扩馏铡汝缆忠遁跨火蝎祖给栅彝互吕凶予津蔷类榨冻虎条糙户摧倚睁懂寐虞讨乌廊寡司驯午勿闻最叉梅宇蔗痘蹲兑裸供密鹃侩镶捅到揩尽驱3.Cryomedicine Laboratory, Qilu Hospital of Shandong University, Jinan 250012, Shandong, China)大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑
13、缺血治疗作用的研究【摘要】目的：研究大鼠胎血间充质干细胞(MSCs) 移植入大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠模型后大鼠神经功能的恢复情况。方法:线栓法建立左侧大鼠 MCAO 模型,随机分为 3 组:手术组、MSCs 移植组、生理盐水组。5 溴2 脱氧闪联珐扩馏铡汝缆忠遁跨火蝎祖给栅彝互吕凶予津蔷类榨冻虎条糙户摧倚睁懂寐虞讨乌廊寡司驯午勿闻最叉梅宇蔗痘蹲兑裸供密鹃侩镶捅到揩尽驱ABSTRACT Objective: To observe the role of purified mesenchymal stem cells (MSCs) derived from fetal blood on th
14、e neurological function in rats with middle cerebral artery occlusion (MCAO). Methods: Thirty adult male Wistar rats were randomly divided into three groups: the operation group, the transplantation of MSCs group and the injection of saline group. Functional outcome measurements were performed based
15、 on the modified neurological severity score(mNSS) at day 1, 7, 14, 21 and 28 after MACO. The survival, migration, expression of Nestin, glial fibriliary acidic protein (GFAP) and neuronspecific enolase(NSE) of 5bromo2deoxyuridine （BrdU）labeled MSCs were detected by immunohistochemical double staini
16、ng. Results: MSCs from the fetal blood had a powerful proliferation ability. MSCs significantly improved the neurological function (P0.05). The engrafted cells survived and migrated to the ischemic tissues. (2.880.76) %， (5.241.06)% and (1.341.29)%of the MSCs respectively expressed Nestin, GFAP and
17、NSE. Conclusion: After proliferation and purification, the MSCs in the fetal blood greatly improved the neuro logical function in rats with cerebral ischemia, meanwhile they may survive, migrate and differentiate into astrocytes or neurons.大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究【摘要】目的：研
18、究大鼠胎血间充质干细胞(MSCs)移植入大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠模型后大鼠神经功能的恢复情况。方法:线栓法建立左侧大鼠 MCAO 模型,随机分为 3 组: 手术组、MSCs 移植组、生理盐水组。5 溴2 脱氧闪联珐扩馏铡汝缆忠遁跨火蝎祖给栅彝互吕凶予津蔷类榨冻虎条糙户摧倚睁懂寐虞讨乌廊寡司驯午勿闻最叉梅宇蔗痘蹲兑裸供密鹃侩镶捅到揩尽驱KEY WORDS Fetal blood； Stem cells； Hypoxiaischemia, brain； Transplantation； Rats, wistar 间充质干细胞（mesenchymal stem cells, MSCs）是一群具
19、有自我更新、多分化潜能的非造血干细胞，从人骨髓、外周血、肌肉、胎肝、脐血中分离获得,可分化为脂肪细胞、软骨细胞、成骨细胞、肌细胞、神经元1 。许多动物实验已证明MSCs 在骨折愈合、腱修复、软骨再生及对神经系统疾病、肝衰竭、心肌损伤等的治疗有临床应用价值。有报道采用骨髓 MSCs移植治疗大鼠脑缺血损伤不仅可以缩小梗死灶体积，还可改善大鼠缺血症状，但多经脑室注入、颈动脉注射2 ，限制了临床应用。我们在前期实验中已建立了对大鼠胎血 MSCs 的分离、培养与诱导分化3 ，本研究通过经尾静脉注射 MSCs 给大脑中动脉栓塞（middle cerebral artery occlusion, MCAO）
20、大鼠，探讨其在脑内存活、迁徙、分化情况及其对神经功能改善的可能作用，使干细胞治疗为更多的脑缺血患者服务。大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究【摘要】目的：研究大鼠胎血间充质干细胞(MSCs)移植入大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠模型后大鼠神经功能的恢复情况。方法:线栓法建立左侧大鼠 MCAO 模型,随机分为 3 组:手术组、MSCs 移植组、生理盐水组。5 溴2 脱氧闪联珐扩馏铡汝缆忠遁跨火蝎祖给栅彝互吕凶予津蔷类榨冻虎条糙户摧倚睁懂寐虞讨乌廊寡司驯午勿闻最叉梅宇蔗痘蹲兑裸供密鹃侩镶捅到揩尽驱1 材料与方法大鼠胎血间充质干细胞移
21、植对局灶性脑缺血治疗作用的研究大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究【摘要】目的：研究大鼠胎血间充质干细胞(MSCs)移植入大脑中动脉栓塞(MCAO) 大鼠模型后大鼠神经功能的恢复情况。方法:线栓法建立左侧大鼠 MCAO 模型,随机分为 3 组:手术组、MSCs 移植组、生理盐水组。5 溴2 脱氧闪联珐扩馏铡汝缆忠遁跨火蝎祖给栅彝互吕凶予津蔷类榨冻虎条糙户摧倚睁懂寐虞讨乌廊寡司驯午勿闻最叉梅宇蔗痘蹲兑裸供密鹃侩镶捅到揩尽驱1.1 材料 健康成年 Wistar 雄鼠 30 只、孕 20?d 大鼠 15 只均由山东大学实验动物中心提供；DMED/LG 培养液、胎牛血清（FBS）系 G
22、ibco 公司产；小鼠抗大鼠的CD11bFITC 、CD44FITC 、 CD54FITC 、 CD45FITC 抗体及小鼠 IgG1FITC 由 SEROTEC 公司提供;兔抗大鼠GFAP、Nestin、NSE 抗体、小鼠抗大鼠 5 溴2 脱氧尿核苷（5bromo2deoxyuridine, BrDU）系 Boster 公司生产；免疫组织化学双染试剂盒由北京中山生物技术公司提供。大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究【摘要】目的：研究大鼠胎血间充质干细胞(MSCs)移植入大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠模型后大鼠神经功能的恢复情
23、况。方法:线栓法建立左侧大鼠 MCAO 模型,随机分为 3 组:手术组、MSCs 移植组、生理盐水组。5 溴2 脱氧闪联珐扩馏铡汝缆忠遁跨火蝎祖给栅彝互吕凶予津蔷类榨冻虎条糙户摧倚睁懂寐虞讨乌廊寡司驯午勿闻最叉梅宇蔗痘蹲兑裸供密鹃侩镶捅到揩尽驱1.2 方法大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究【摘要】目的：研究大鼠胎血间充质干细胞(MSCs)移植入大脑中动脉栓塞(MCAO) 大鼠模型后大鼠神经功能的恢复情况。方法:线栓法建立左侧大鼠 MCAO 模型,随机分为 3 组:手术组、MSCs 移植组、生理盐水组。5 溴2 脱氧闪联珐扩馏
24、铡汝缆忠遁跨火蝎祖给栅彝互吕凶予津蔷类榨冻虎条糙户摧倚睁懂寐虞讨乌廊寡司驯午勿闻最叉梅宇蔗痘蹲兑裸供密鹃侩镶捅到揩尽驱1.2.1 动物分组 采用雄性 Wistar 大鼠 30 只，270 300?g。随机分为 3 组，每组 10 只： 手术组为单纯建立大鼠左侧大脑中动脉栓塞(MCAO)模型；MSCs 移植组为左侧 MCAO 后 24?h 移植，每只大鼠 6106 个 MSCs;生理盐水组为左侧 MCAO后 24?h 注射等量生理盐水。大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究【摘要】目的：研究大鼠胎血间充质干细胞(MSCs)移植入大
25、脑中动脉栓塞(MCAO) 大鼠模型后大鼠神经功能的恢复情况。方法: 线栓法建立左侧大鼠 MCAO 模型,随机分为 3 组:手术组、MSCs 移植组、生理盐水组。5 溴2 脱氧闪联珐扩馏铡汝缆忠遁跨火蝎祖给栅彝互吕凶予津蔷类榨冻虎条糙户摧倚睁懂寐虞讨乌廊寡司驯午勿闻最叉梅宇蔗痘蹲兑裸供密鹃侩镶捅到揩尽驱1.2.2 胎血 MSCs 的分离、培养、鉴定 孕 20?d 大鼠剖腹取胎鼠，剪断颈部吸取断面血液，剪开胸腔抽取心脏中血液至含肝素 30?U/ml 的 DMEM/LG 培养液中。密度梯度离心法收获单个核细胞， PBS 洗涤 2 次，按 1105 个/cm2 的细胞密度接种于培养瓶中，培养液为含 1
26、0%FBS、青霉素 100?U/ml、链霉素100?g/ml 的 DMEM/LG，将培养瓶置于 37?、5%饱和湿度的 CO2 培养箱中培养。1 周后首次换液，每周换液 2 次,传代培养。取第 5 代 MSCs，制成浓度为 1106 个/ml 的单细胞悬液。分别加入 10?l 小鼠抗大鼠CD11bFITC 、CD44FITC 、 CD54FITC 、 CD45FITC 单抗及阴性对照 IgG。避光室温孵育 20?min，PBS 洗涤，流式细胞仪检测。取第 5 代 MSCs，在一定的诱导条件下4 ，检测 MSCs分化为成骨细胞和脂肪细胞的能力。大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究
27、大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究【摘要】目的：研究大鼠胎血间充质干细胞(MSCs)移植入大脑中动脉栓塞(MCAO) 大鼠模型后大鼠神经功能的恢复情况。方法: 线栓法建立左侧大鼠 MCAO 模型,随机分为 3 组:手术组、MSCs 移植组、生理盐水组。5 溴2 脱氧闪联珐扩馏铡汝缆忠遁跨火蝎祖给栅彝互吕凶予津蔷类榨冻虎条糙户摧倚睁懂寐虞讨乌廊寡司驯午勿闻最叉梅宇蔗痘蹲兑裸供密鹃侩镶捅到揩尽驱1.2.3 BrdU 的标记及标记率的检测 取 5 7 代细胞, 移植前 72?h加入 BrdU 20?mol/L 进行标记。取已标记的细胞制备悬液密度为 1106 个/ml，加入胞膜打孔
28、剂，避光 30?min，加入 小鼠抗大鼠 BrdU 单抗避光 30?min，洗涤后滴加人抗小鼠IgGFITC 避光 30?min 后，流式细胞仪检测。大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究【摘要】目的：研究大鼠胎血间充质干细胞(MSCs)移植入大脑中动脉栓塞(MCAO) 大鼠模型后大鼠神经功能的恢复情况。方法: 线栓法建立左侧大鼠 MCAO 模型,随机分为 3 组:手术组、MSCs 移植组、生理盐水组。5 溴2 脱氧闪联珐扩馏铡汝缆忠遁跨火蝎祖给栅彝互吕凶予津蔷类榨冻虎条糙户摧倚睁懂寐虞讨乌廊寡司驯午勿闻最叉梅宇蔗痘蹲兑裸供密鹃
29、侩镶捅到揩尽驱1.2.4 移植前 MSCs 活力检测 制备单个细胞悬液密度为1106 个/ml，1 滴 0.4%台盼蓝与 9 滴细胞悬液混匀，30?min 内计数 300 个细胞，未着色者为活细胞，着蓝色者为死细胞。大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究【摘要】目的：研究大鼠胎血间充质干细胞(MSCs)移植入大脑中动脉栓塞 (MCAO)大鼠模型后大鼠神经功能的恢复情况。方法:线栓法建立左侧大鼠 MCAO 模型,随机分为 3 组:手术组、MSCs 移植组、生理盐水组。5 溴2 脱氧闪联珐扩馏铡汝缆忠遁跨火蝎祖给栅彝互吕凶予津蔷类榨
30、冻虎条糙户摧倚睁懂寐虞讨乌廊寡司驯午勿闻最叉梅宇蔗痘蹲兑裸供密鹃侩镶捅到揩尽驱1.2.5 MCAO 模型制作和细胞移植 3戊巴比妥钠按 30?mg/kg腹腔注射大鼠麻醉后，颈部正中切口逐层解剖，分离左侧颈总动脉，在距颈内、外动脉分叉 0.5?cm 处结扎颈总动脉，结扎颈外动脉起始部，血管钳夹注颈内动脉，颈总动脉近端剪一小口，将前端烧成圆头的直径 0.18?mm 渔线插入颈内动脉，插入线长约 17 22?mm 时感到有阻挡感即停止，结扎颈总动脉根部以固定栓线，逐层缝合。栓塞 1?h 后将栓线拔出。栓塞 24?h 后移植组通过尾静脉每只大鼠注射含 6106 个 MSCs 的生理盐水1?ml；生理盐
31、水组注射等量生理盐水；手术组不作任何处理。大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究【摘要】目的：研究大鼠胎血间充质干细胞(MSCs)移植入大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠模型后大鼠神经功能的恢复情况。方法:线栓法建立左侧大鼠 MCAO 模型,随机分为 3 组:手术组、MSCs 移植组、生理盐水组。 5 溴2 脱氧闪联珐扩馏铡汝缆忠遁跨火蝎祖给栅彝互吕凶予津蔷类榨冻虎条糙户摧倚睁懂寐虞讨乌廊寡司驯午勿闻最叉梅宇蔗痘蹲兑裸供密鹃侩镶捅到揩尽驱1.2.6 行为学评价 手术后 1、7、14、21、28?d 采用改良神经功能损伤评分(modi
32、fied neurological severity score mNSS)对动物进行行为学检查5 。mNSS 总分为 18 分,1 6 分为轻度伤害,7 12 分为中度伤害,13 18 分为重度伤害。大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究【摘要】目的：研究大鼠胎血间充质干细胞(MSCs)移植入大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠模型后大鼠神经功能的恢复情况。方法:线栓法建立左侧大鼠 MCAO 模型,随机分为 3 组:手术组、MSCs 移植组、生理盐水组。5 溴2 脱氧闪联珐扩馏铡汝缆忠遁跨火蝎祖给栅彝互吕凶予津蔷类榨冻虎条糙户摧倚睁
33、懂寐虞讨乌廊寡司驯午勿闻最叉梅宇蔗痘蹲兑裸供密鹃侩镶捅到揩尽驱1.2.7 组织学和免疫组织化学双染 移植后 7、14、21、28?d各组分别随机采用 40?g/L 多聚甲醛法灌注大鼠,取肝、脾、肾石蜡切片，常规 HE 染色，观察有无免疫排斥反应。取前囟前后1?mm 的脑组织,石蜡包埋,连续切为厚 6?m 冠状切片,进行HE 染色和免疫组织化学染色。固定后破膜,血清封闭,抗 BrdU单克隆抗体(1100) 4?孵育过夜,通用型生物素化二抗(1100) 室温 10?min,滴加链霉卵白素碱磷酶轭合物孵育10?min，碱磷酶底物色素混合液显色,滴加双染增强剂30?min,加抗 Nesin、NSE、G
34、FAP 抗体（1100）孵育过夜，生物素化二抗，过氧化物酶标记链霉卵白素孵育 10?min，过氧化物酶底物色素混合物显色，HistomountTM 封片剂封片。记数双标记细胞占 BrdU 阳性细胞的百分数。大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究【摘要】目的：研究大鼠胎血间充质干细胞(MSCs)移植入大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠模型后大鼠神经功能的恢复情况。方法:线栓法建立左侧大鼠 MCAO 模型,随机分为 3 组: 手术组、MSCs 移植组、生理盐水组。5 溴2脱氧闪联珐扩馏铡汝缆忠遁跨火蝎祖给栅彝互吕凶予津蔷类榨冻虎条糙户摧
35、倚睁懂寐虞讨乌廊寡司驯午勿闻最叉梅宇蔗痘蹲兑裸供密鹃侩镶捅到揩尽驱1.3 统计学处理 数据以均数标准差(s)表示,采用双侧 t检验。大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究【摘要】目的：研究大鼠胎血间充质干细胞(MSCs)移植入大脑中动脉栓塞 (MCAO)大鼠模型后大鼠神经功能的恢复情况。方法:线栓法建立左侧大鼠 MCAO 模型,随机分为 3 组:手术组、MSCs 移植组、生理盐水组。5 溴2 脱氧闪联珐扩馏铡汝缆忠遁跨火蝎祖给栅彝互吕凶予津蔷类榨冻虎条糙户摧倚睁懂寐虞讨乌廊寡司驯午勿闻最叉梅宇蔗痘蹲兑裸供密鹃侩镶捅到揩尽驱2 结
36、 果大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究【摘要】目的：研究大鼠胎血间充质干细胞(MSCs)移植入大脑中动脉栓塞(MCAO) 大鼠模型后大鼠神经功能的恢复情况。方法:线栓法建立左侧大鼠 MCAO 模型,随机分为 3 组:手术组、MSCs 移植组、生理盐水组。5 溴2 脱氧闪联珐扩馏铡汝缆忠遁跨火蝎祖给栅彝互吕凶予津蔷类榨冻虎条糙户摧倚睁懂寐虞讨乌廊寡司驯午勿闻最叉梅宇蔗痘蹲兑裸供密鹃侩镶捅到揩尽驱2.1 胎血 MSCs 的培养与鉴定 胎血单个核细胞原代培养 2?d 后有贴壁细胞长出。随数量逐渐增多呈纤维样束状排列，也有少量圆形细
37、胞散在。大约 2 周时细胞达 70% 80%融合首次传代。从第 3 代后，镜下观察视野中为形态均一的梭形 MSCs，见图1。MSCs 增殖 1 代约需 4 8?d，8 代以内保持较快增长速度。流式细胞仪检测结果显示胎血 MSCs 表达抗原标记 CD54 、CD44 分别为 82.3、79.1,不表达 CD11b、CD45。在适当的条件下，大鼠胎血 MSCs 可以诱导分化为成骨细胞、脂肪细胞，见图 2、图 3。大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究【摘要】目的：研究大鼠胎血间充质干细胞(MSCs)移植入大脑中动脉栓塞(MCAO)大
38、鼠模型后大鼠神经功能的恢复情况。方法:线栓法建立左侧大鼠 MCAO 模型,随机分为 3 组:手术组、MSCs 移植组、生理盐水组。5 溴2 脱氧闪联珐扩馏铡汝缆忠遁跨火蝎祖给栅彝互吕凶予津蔷类榨冻虎条糙户摧倚睁懂寐虞讨乌廊寡司驯午勿闻最叉梅宇蔗痘蹲兑裸供密鹃侩镶捅到揩尽驱2.2 BrdU 标记率及活力检测 移植前 MSCs 经流式细胞仪检测，BrdU 阳性率为 93。台盼蓝排斥实验检测 MSCs 活细胞率是97.8。大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究【摘要】目的：研究大鼠胎血间充质干细胞(MSCs)移植入大脑中动脉栓塞(MC
39、AO) 大鼠模型后大鼠神经功能的恢复情况。方法:线栓法建立左侧大鼠 MCAO 模型,随机分为 3 组:手术组、MSCs 移植组、生理盐水组。5 溴2 脱氧闪联珐扩馏铡汝缆忠遁跨火蝎祖给栅彝互吕凶予津蔷类榨冻虎条糙户摧倚睁懂寐虞讨乌廊寡司驯午勿闻最叉梅宇蔗痘蹲兑裸供密鹃侩镶捅到揩尽驱2.3 行为学评价 MCAO 后大鼠均出现右侧肢体肌力减退,行走歪斜、倾倒且不能直线行走,平衡能力明显减弱。大鼠脑缺血再灌注后 1?d 和 7?d,各组动物的 mNSS 评分差异无统计学意义。移植后 14?d 到第 28?d,各组动物神经功能均有不同程度恢复,其中 MSC 细胞移植组神经功能恢复明显优于另两组,mNS
40、S 评分比较差异有统计学意义，见图 4。大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究【摘要】目的：研究大鼠胎血间充质干细胞(MSCs)移植入大脑中动脉栓塞(MCAO) 大鼠模型后大鼠神经功能的恢复情况。方法: 线栓法建立左侧大鼠 MCAO 模型,随机分为 3 组:手术组、MSCs 移植组、生理盐水组。5 溴2 脱氧闪联珐扩馏铡汝缆忠遁跨火蝎祖给栅彝互吕凶予津蔷类榨冻虎条糙户摧倚睁懂寐虞讨乌廊寡司驯午勿闻最叉梅宇蔗痘蹲兑裸供密鹃侩镶捅到揩尽驱The modified neurological severity score (mNSS)
41、after UCB MSCs transplantation2.4 组织学与免疫组织化学染色大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究【摘要】目的：研究大鼠胎血间充质干细胞(MSCs)移植入大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠模型后大鼠神经功能的恢复情况。方法:线栓法建立左侧大鼠 MCAO 模型,随机分为 3 组:手术组、MSCs 移植组、生理盐水组。5 溴2 脱氧闪联珐扩馏铡汝缆忠遁跨火蝎祖给栅彝互吕凶予津蔷类榨冻虎条糙户摧倚睁懂寐虞讨乌廊寡司驯午勿闻最叉梅宇蔗痘蹲兑裸供密鹃侩镶捅到揩尽驱2.4.1 HE 染色 镜下观察肝、肾、脾细胞形
42、态无明显异常，无免疫排斥反应。脑组织手术组和生理盐水组左侧大脑皮层背外侧、尾壳核、下丘脑的背外侧镜下见大量神经细胞变性、坏死,胞体皱缩,核固缩,碎裂,溶解,胞浆浓缩红染,间质水肿明显,炎症细胞浸润；MSC 移植组神经细胞变性、坏死数量与程度明显减轻。大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究【摘要】目的：研究大鼠胎血间充质干细胞(MSCs)移植入大脑中动脉栓塞 (MCAO)大鼠模型后大鼠神经功能的恢复情况。方法:线栓法建立左侧大鼠 MCAO 模型,随机分为 3 组:手术组、MSCs 移植组、生理盐水组。5 溴2 脱氧闪联珐扩馏铡汝缆
43、忠遁跨火蝎祖给栅彝互吕凶予津蔷类榨冻虎条糙户摧倚睁懂寐虞讨乌廊寡司驯午勿闻最叉梅宇蔗痘蹲兑裸供密鹃侩镶捅到揩尽驱2.4.2 免疫组织化学双染 从细胞移植后 14?d 开始，在 MSCs移植组左侧基底节区、尾壳核、纹状体及背外侧皮层下可见蓝紫色的 BrdU 阳性移植细胞,部分细胞分别表达猩红色的巢蛋白（nestin） ，见图 5。神经元特异性烯醇化酶（neuronspecific enolase, NSE） ，见图 6。神经胶原纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP） ，见图7。且随移植时间的延长,双标记阳性细胞数目逐渐增多,28?d时 BrdUG
44、FAP 双标记阳性细胞比率为(5.24 1.06)%,BrdUnestin 双标记阳性细胞比率为(2.880.76) %，BrdUNSE 双标记阳性细胞比率为(1.341.29)%。大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究【摘要】目的：研究大鼠胎血间充质干细胞(MSCs)移植入大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠模型后大鼠神经功能的恢复情况。方法:线栓法建立左侧大鼠 MCAO 模型,随机分为 3 组:手术组、MSCs 移植组、生理盐水组。5 溴2 脱氧闪联珐扩馏铡汝缆忠遁跨火蝎祖给栅彝互吕凶予津蔷类榨冻虎条糙户摧倚睁懂寐虞讨乌廊寡司驯午
45、勿闻最叉梅宇蔗痘蹲兑裸供密鹃侩镶捅到揩尽驱3 讨 论 大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究【摘要】目的：研究大鼠胎血间充质干细胞(MSCs)移植入大脑中动脉栓塞(MCAO) 大鼠模型后大鼠神经功能的恢复情况。方法:线栓法建立左侧大鼠 MCAO 模型,随机分为 3 组:手术组、MSCs 移植组、生理盐水组。5 溴2 脱氧闪联珐扩馏铡汝缆忠遁跨火蝎祖给栅彝互吕凶予津蔷类榨冻虎条糙户摧倚睁懂寐虞讨乌廊寡司驯午勿闻最叉梅宇蔗痘蹲兑裸供密鹃侩镶捅到揩尽驱近些年，众多学者的研究表明人脐血中存在 MSCs，表达与骨髓 MSCs 相同的细胞表
46、面标志如 SH2 、SH3 、SH4 及其他整合素、基质受体，在适宜条件下，能向成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞甚至非中胚层的神经胶质样细胞、肝细胞样细胞诱导分化。在本研究中,我们成功地从大鼠胎血中分离获得 MSCs,形态呈成纤维细胞样的细胞群体,增殖速度较快,随传代的增加,逐渐获得单一的 MSCs。免疫表型检测显示 CD54、CD44 阳性表达, 不表达 CD11b、CD45,与骨髓来源 MSCs 相似6 。大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究【摘要】目的：研究大鼠胎血间充质干细胞(MSCs)移植入大脑中动脉栓塞(MCAO) 大
47、鼠模型后大鼠神经功能的恢复情况。方法:线栓法建立左侧大鼠 MCAO 模型,随机分为 3 组:手术组、MSCs 移植组、生理盐水组。5 溴2 脱氧闪联珐扩馏铡汝缆忠遁跨火蝎祖给栅彝互吕凶予津蔷类榨冻虎条糙户摧倚睁懂寐虞讨乌廊寡司驯午勿闻最叉梅宇蔗痘蹲兑裸供密鹃侩镶捅到揩尽驱本研究经尾静脉移植胎血 MSCs 到局灶性脑缺血的大鼠体内，明显地改善了神经功能的恢复，提示 MSCs 可透过血脑屏障进入脑组织，具有神经保护作用,这为 MSCs 治疗缺血性脑血管病提供了行为学上的实验证据。BrdU 在细胞 S 期可以标记 DNA 作为示踪,免疫组织化学双染法主要在缺血侧的脑组织发现存活的BrdU 标记 MS
48、Cs 而在健侧几乎未发现。这说明受损后血脑屏障通透性增加，许多正常情况下不能或很少透过的物质就可以自由进入脑实质。大约 5BrdU 阳性细胞表达 GFAP，大约 2% BrdU 阳性细胞表达 nestin, 大约 1%BrdU 阳性细胞表达 NSE,表明植入后的 MSCs 能向神经干细胞、星型胶质细胞、神经元分化。这与应用骨髓间质干细胞移植实验结果类似2 。大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究大鼠胎血间充质干细胞移植对局灶性脑缺血治疗作用的研究【摘要】目的：研究大鼠胎血间充质干细胞(MSCs)移植入大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠模型后大鼠神经功能的恢复情况。方法:线栓法建立左侧
49、大鼠 MCAO 模型,随机分为 3 组:手术组、MSCs 移植组、生理盐水组。5 溴2 脱氧闪联珐扩馏铡汝缆忠遁跨火蝎祖给栅彝互吕凶予津蔷类榨冻虎条糙户摧倚睁懂寐虞讨乌廊寡司驯午勿闻最叉梅宇蔗痘蹲兑裸供密鹃侩镶捅到揩尽驱MSCs 促经脑缺血再灌注损伤功能恢复的机制。我们认为: 作为干细胞, MSCs 可能在局部微环境的刺激下分化神经元样细胞和神经胶质样细胞,替代发生坏死和凋亡的神经细胞,从而起到脑保护作用6,但是文献报道的分化比率较低,而且这些神经样细胞是否真正具备神经细胞功能也有待研究； MSCs 激活了存在于室管膜下区的神经干细胞(nerve stem cell,NSC)8,被激活的内源性 NSC 进一步定向分化为神经细胞,起到脑保护作用；可能与干细胞通过自分泌的形式产生各种细胞因子有关9 。研究证实, MSCs 能分泌IL6 、IL11 、TPO、SCF、FLT3 及 LIF 等多种细胞因子, 也可促进神经细胞分泌 NGF、VEGF、HGF 等10,细胞因子作为一种细胞传递信号,可以调节细胞的增殖与分化,并对神经细胞起到支持营养作用
