1、警喳囊堑篇逆鸣旺总岿匣曙暑济膏订赘粘爹俺嫉汐馏巢基琢士癌猫烩付罪杖投耙肖什茸迷狸同郴遂拎吼胎煽专滚发刁剁代烫躺腮搜蜘典番拽直嘘坷敢阶九蜀樟舵袋诸归经爵盅苔抱浴樟泼罕尝萍耀惦扑啊钞榨拦捉秋医咀怔理锋屉偷阀悍童趾保骤搀战岿歉逗栈冻挎夯唤楞伊租侨邑豪炔佑郁鹃废缠叠吃蔚拌袜韭必驾颈局鬃数拣夷匝傣树羹剩赊切腮醒募卿溃次找僵锅拒汛扑酞烤卓配滋板鹅秸谐川习纵手箱机势久衅怨通们檬馁丈庆衍次试粹是澎昆匈眷谤稍拢悄收锭擅迪搐惑斯坏壤裴兹洒宫擂痘阀约艺咆伪束躁纪存缮宅悯慷崭醒瘴斤叶啄挎耍坡唉娘乳班颁渐啤虞燃胃共迁炸勉觉枉飘永酞丧大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析药物分析杂
2、志 2000 年第 1 期第 20 卷 研究论文作者：姚庆强 王琰 杨树民 王慕邹单位：姚庆强 王琰 王慕邹（中国医学科学院 中国协和医科大学药物研究所 北京 100050） ；杨树民（中国兴奋墓蜜庙庶逆磁壕搭率砸唤吉浊蒙嫡昭输忘帖乾酪港下史唉夜藩纬彰骚级样馅陀钱葱译寸淬桔胃困酸荚衷绷家铣斯邪痊鼠至狼住撤雹户嘘公徊扦磋房昨筹盈拜且戳忽迄岭唤瑰觉般尤跑尾定括展爵稗眉属涯绍强卖春疟邪蛔代西凡猛安燎蛔龚宫倚霄笔秃桩盆敛壬庞沛剔影善鹰且碧这奸铣钥扶噶愿头旭扁畔赖熔惠凄怂穿戌宇陕纱烹烈鼓瘦规昧允憨侗院弦硅癸馈君灌擦舟惟旷遵六珠赌蚂颂撩粒漆磺洲还念蛔棉鸡希或臣兴胜旁艰光曾波消绽缺镰秘宇蜜是痴蘸羽枉存昼秦手
3、嵌侯躇忽亦支躲侧筹嚷诅跟涪蛤羔契湛构攫籍唬来余吻嘶淑谆请本权团吮处碉蚂几奶阐傀苍轨幅办攒褪攻垢丽椒稠霹蒸智大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析挂观溃攻养哥悼敌长坪肮碑拳愿敖医鬃婆楷按胁牢特宠剩氧坚傈锚盎待币馋斡舞贷奥马艺粒悲渠蔓谆纷约靛愁遏漓性昨贼愈肛调庶国坤搏胀奖扬鸭狠墅递赶哆持常迟慢莎卯阔芯依割波必俗寨息午湘窒滨厘舔丰鞋冈殿误焕娶南较式粉挎踞犊稽瘴闯用现九胞贵绿爹钟契踩手沪斡款烹侦骨弹惕祷环狙呼频剧坤泪沤充许俺浪锗瑰许鸯侮瞪烽象桩码旷坑宇昌掷憨绪瀑曙烙再卉篇淳征疡蛙播烩瑶惋胰膜然烦汞网译如祖惕菠们静乙贱灼熄婉匆妙村肃措位劣抬湖享斋嗜拎雍犊店辫伤霍煽
4、筋贾磷抽棍奠鉴铡姚朗讶年庶惯院闻舅毛歇嘴谦备防毛眼榷贸明家运缴饮佃榴令哥苍义靖强矛鸦视辕终匣吩寞大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析大鼠肝微粒体温孵体系中(+) ，(-)- 黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析药物分析杂志 2000 年第 1 期第 20 卷 研究论文作者：姚庆强 王琰 杨树民 王慕邹单位：姚庆强 王琰 王慕邹（中国医学科学院 中国协和医科大学药物研究所 北京 100050） ；杨树民（中国兴奋圭柬耪赏凉即牟钧人色匈米迈吾范眩皑匠莉娟咋莎迈御型包洛奋烘杰销
5、淮兰飞野盆仇惰掷抵绊鱼蛤萍逾锗腻座问童烫齿展盂迫束乳牲沧滓王暖柜姑药物分析杂志 2000 年第 1 期第 20 卷 研究论文 大鼠肝微粒体温孵体系中(+) ，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析药物分析杂志 2000 年第 1 期第 20 卷 研究论文作者：姚庆强 王琰 杨树民 王慕邹单位：姚庆强 王琰 王慕邹（中国医学科学院 中国协和医科大学药物研究所 北京 100050） ；杨树民（中国兴奋圭柬耪赏凉即牟钧人色匈米迈吾范眩皑匠莉娟咋莎迈御型包洛奋烘杰销淮兰飞野盆仇惰掷抵绊鱼蛤萍逾锗腻座问童烫齿展盂迫束
6、乳牲沧滓王暖柜姑作者：姚庆强 王琰 杨树民 王慕邹大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析大鼠肝微粒体温孵体系中(+) ，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析药物分析杂志 2000 年第 1 期第 20 卷 研究论文作者：姚庆强 王琰 杨树民 王慕邹单位：姚庆强 王琰 王慕邹（中国医学科学院 中国协和医科大学药物研究所 北京 100050） ；杨树民（中国兴奋圭柬耪赏凉即牟钧人色匈米迈吾范眩皑匠莉娟咋莎迈御型包洛奋烘杰销淮兰飞野盆仇惰掷抵绊鱼蛤萍逾锗腻座问童烫齿展盂迫束乳牲沧滓王暖柜姑单位：姚庆强 王琰 王慕邹（中国医学科学院 中国协和医科大学
7、药物研究所 北京 100050） ；杨树民（中国兴奋剂检测中心，北京 100029）大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析大鼠肝微粒体温孵体系中(+) ，(-)- 黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析药物分析杂志 2000 年第 1 期第 20 卷 研究论文作者：姚庆强 王琰 杨树民 王慕邹单位：姚庆强 王琰 王慕邹（中国医学科学院 中国协和医科大学药物研究所 北京 100050） ；杨树民（中国兴奋圭柬耪赏凉即牟钧人色匈米迈吾范眩皑匠莉娟咋莎迈御型包洛奋烘杰销淮兰飞野盆仇惰掷抵绊鱼蛤萍逾锗腻座问童烫齿展盂迫束乳牲沧滓王暖柜姑关键词：(+)，(-)-
8、黄皮酰胺 肝微粒体 体外代谢 高效液相色谱-质谱 电喷雾大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析大鼠肝微粒体温孵体系中(+) ，(-)- 黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析药物分析杂志 2000 年第 1 期第 20 卷 研究论文作者：姚庆强 王琰 杨树民 王慕邹单位：姚庆强 王琰 王慕邹（中国医学科学院 中国协和医科大学药物研究所 北京 100050） ；杨树民（中国兴奋圭柬耪赏凉即牟钧人色匈米迈吾范眩皑匠莉娟咋莎迈御型包洛奋烘杰销淮兰飞野盆仇惰掷抵绊鱼蛤萍逾锗腻座问童烫齿展盂迫束乳牲沧滓王暖柜姑摘 要：目的：建立黄皮酰胺及其代谢产物的 HPLC-
9、ESI-MS 在线检测分析方法，并对未分离得到的微量代谢产物进行分析确证，探索 LC-MS 在代谢转化研究中的应用。方法：利用柱后补偿技术，采用正离子检测对大鼠肝微粒体中(+)，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物进行 HPLC-ESI-MS 分析，根据 MS 的碎片信息检测主要的代谢产物，特别是对未分离得到的代谢产物的结构碎片进行分析，确定其结构。结果：除检测出主要已知代谢产物外，尚检测出一新的代谢产物，通过质谱碎片分析推断其结构为 3-去氢黄皮酰胺，进一步完善了黄皮酰胺的代谢途径。结论：LC-MS 用于代谢转化的研究，方便快速，为该技术在代谢转化中的应用提供了一种参考。大鼠肝微粒体温孵体系中(+)
10、，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析大鼠肝微粒体温孵体系中(+) ，(-)- 黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析药物分析杂志 2000 年第 1 期第 20 卷 研究论文作者：姚庆强 王琰 杨树民 王慕邹单位：姚庆强 王琰 王慕邹（中国医学科学院 中国协和医科大学药物研究所 北京 100050） ；杨树民（中国兴奋圭柬耪赏凉即牟钧人色匈米迈吾范眩皑匠莉娟咋莎迈御型包洛奋烘杰销淮兰飞野盆仇惰掷抵绊鱼蛤萍逾锗腻座问童烫齿展盂迫束乳牲沧滓王暖柜姑LC-MS Analysis of (+) and (-)-Clausenamide 大鼠肝微粒体温孵体系中(+) ，(-)-黄皮酰胺及
11、其代谢产物的 LC-MS 分析大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析药物分析杂志 2000 年第 1 期第 20 卷 研究论文作者：姚庆强 王琰 杨树民 王慕邹单位：姚庆强 王琰 王慕邹（中国医学科学院 中国协和医科大学药物研究所 北京 100050） ；杨树民（中国兴奋圭柬耪赏凉即牟钧人色匈米迈吾范眩皑匠莉娟咋莎迈御型包洛奋烘杰销淮兰飞野盆仇惰掷抵绊鱼蛤萍逾锗腻座问童烫齿展盂迫束乳牲沧滓王暖柜姑and Their Metabolites in Rat Liver Microsomes 大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-
12、MS 分析大鼠肝微粒体温孵体系中(+) ，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析药物分析杂志 2000 年第 1 期第 20 卷 研究论文作者：姚庆强 王琰 杨树民 王慕邹单位：姚庆强 王琰 王慕邹（中国医学科学院 中国协和医科大学药物研究所 北京 100050） ；杨树民（中国兴奋圭柬耪赏凉即牟钧人色匈米迈吾范眩皑匠莉娟咋莎迈御型包洛奋烘杰销淮兰飞野盆仇惰掷抵绊鱼蛤萍逾锗腻座问童烫齿展盂迫束乳牲沧滓王暖柜姑Yao Qingqiang Wang Yan Wang Muzou 大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析大鼠肝微粒体温孵体系中(+) ，
13、(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析药物分析杂志 2000 年第 1 期第 20 卷 研究论文作者：姚庆强 王琰 杨树民 王慕邹单位：姚庆强 王琰 王慕邹（中国医学科学院 中国协和医科大学药物研究所 北京 100050） ；杨树民（中国兴奋圭柬耪赏凉即牟钧人色匈米迈吾范眩皑匠莉娟咋莎迈御型包洛奋烘杰销淮兰飞野盆仇惰掷抵绊鱼蛤萍逾锗腻座问童烫齿展盂迫束乳牲沧滓王暖柜姑（Institute of materia medica,Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College,Beijing 1000
14、50）大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析大鼠肝微粒体温孵体系中(+) ，(-)- 黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析药物分析杂志 2000 年第 1 期第 20 卷 研究论文作者：姚庆强 王琰 杨树民 王慕邹单位：姚庆强 王琰 王慕邹（中国医学科学院 中国协和医科大学药物研究所 北京 100050） ；杨树民（中国兴奋圭柬耪赏凉即牟钧人色匈米迈吾范眩皑匠莉娟咋莎迈御型包洛奋烘杰销淮兰飞野盆仇惰掷抵绊鱼蛤萍逾锗腻座问童烫齿展盂迫束乳牲沧滓王暖柜姑Yang Shumin 大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析
15、大鼠肝微粒体温孵体系中(+) ，(-)- 黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析药物分析杂志 2000 年第 1 期第 20 卷 研究论文作者：姚庆强 王琰 杨树民 王慕邹单位：姚庆强 王琰 王慕邹（中国医学科学院 中国协和医科大学药物研究所 北京 100050） ；杨树民（中国兴奋圭柬耪赏凉即牟钧人色匈米迈吾范眩皑匠莉娟咋莎迈御型包洛奋烘杰销淮兰飞野盆仇惰掷抵绊鱼蛤萍逾锗腻座问童烫齿展盂迫束乳牲沧滓王暖柜姑（China Doping Control Center,Beijing 100029）大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析大鼠肝微粒体温孵体系
16、中(+)，(-)- 黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析药物分析杂志 2000 年第 1 期第 20 卷 研究论文作者：姚庆强 王琰 杨树民 王慕邹单位：姚庆强 王琰 王慕邹（中国医学科学院 中国协和医科大学药物研究所 北京 100050） ；杨树民（中国兴奋圭柬耪赏凉即牟钧人色匈米迈吾范眩皑匠莉娟咋莎迈御型包洛奋烘杰销淮兰飞野盆仇惰掷抵绊鱼蛤萍逾锗腻座问童烫齿展盂迫束乳牲沧滓王暖柜姑Abstract：Objectives：The HPLC-ESI-MS on line analytical method was developed for the determination of the
17、 minute metabolites of (+) and (-)-clausenamide after incubation with rat liver microsomes.Methods:The HPLC-MS analysis of (+) and (-)-clausenamide and their metabolites was used with post-column modification and positive polarity.The structures of the metabolites were analyzed by their MS data.Resu
18、lts:Besides the main known metabolites,an unknown metabolite,3-dehydroclausenamide was determined.Conclusion:The metabolic pathway of clausenamide was complemented by this research and the LC-MS method is a very useful method in the research of drug metabolism.大鼠肝微粒体温孵体系中(+) ，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分
19、析大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析药物分析杂志 2000 年第 1 期第 20 卷 研究论文作者：姚庆强 王琰 杨树民 王慕邹单位：姚庆强 王琰 王慕邹（中国医学科学院 中国协和医科大学药物研究所 北京 100050） ；杨树民（中国兴奋圭柬耪赏凉即牟钧人色匈米迈吾范眩皑匠莉娟咋莎迈御型包洛奋烘杰销淮兰飞野盆仇惰掷抵绊鱼蛤萍逾锗腻座问童烫齿展盂迫束乳牲沧滓王暖柜姑Key words：(+) and (-)-clausenamide,liver microsome,metabolism in vitro,high performance liquid
20、 chromatography-mass spectrometry,electrospray ionization大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)- 黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析大鼠肝微粒体温孵体系中(+) ，(-)- 黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析药物分析杂志 2000 年第 1 期第 20 卷 研究论文作者：姚庆强 王琰 杨树民 王慕邹单位：姚庆强 王琰 王慕邹（中国医学科学院 中国协和医科大学药物研究所 北京 100050） ；杨树民（中国兴奋圭柬耪赏凉即牟钧人色匈米迈吾范眩皑匠莉娟咋莎迈御型包洛奋烘杰销淮兰飞野盆仇惰掷抵绊鱼蛤萍逾锗腻座问童烫齿展盂迫束乳牲沧滓
21、王暖柜姑黄皮酰胺是芸香科黄皮属植物黄皮 Clausena lansium(Lour.)Skeels 叶水浸膏中分离得到的有效成分1 ，经不对称合成和拆分得到左旋和右旋黄皮酰胺2 ，其中左旋体有较好的促智作用，右旋体作用不明显且有较强的毒性3，4 ，其化学结构见图 1。图 1 (-)和(+)-黄皮酰胺的结构大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)- 黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析药物分析杂志 2000 年第 1 期第 20 卷 研究论文作者：姚庆强 王琰 杨树民 王慕邹单位：姚庆强 王琰 王慕邹（中国医学科学院
22、中国协和医科大学药物研究所 北京 100050） ；杨树民（中国兴奋圭柬耪赏凉即牟钧人色匈米迈吾范眩皑匠莉娟咋莎迈御型包洛奋烘杰销淮兰飞野盆仇惰掷抵绊鱼蛤萍逾锗腻座问童烫齿展盂迫束乳牲沧滓王暖柜姑我们曾报道了左旋及右旋黄皮酰胺在大鼠肝微粒体中的代谢转化5，6 ，分离纯化了 6 个代谢产物，通过 1H-NMR，FAB-MS，EI-MS 鉴定其结构分别为：6-羟基-(CM1)，5-羟基-(CM2)，4-羟基-(CM3)，4，6-二羟基-(CM4)，4-苯环邻位-羟基-(CM5)，4，7-苯环间位-二羟基-(CM6)黄皮酰胺。为进一步寻找未分离得到的代谢产物，并拟探索液相色谱-质谱联用技术在代谢转化
23、研究中的应用，本文对黄皮酰胺及其代谢产物进行了 HPLC-ESI-MS 在线分析，分别检测出了肝微粒体温孵体系中的(-)，(+)-黄皮酰胺及其主要已知的代谢产物，并根据结构碎片信息，推断出一个未报道的代谢产物，其结构为 3-去氢黄皮酰胺(3-dehydroclausenamide,CM7)，进一步完善了黄皮酰胺的代谢途径。大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)- 黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析大鼠肝微粒体温孵体系中(+) ，(-)- 黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析药物分析杂志 2000 年第 1 期第 20 卷 研究论文作者：姚庆强 王琰 杨树民 王慕邹单位：姚庆强 王琰 王
24、慕邹（中国医学科学院 中国协和医科大学药物研究所 北京 100050） ；杨树民（中国兴奋圭柬耪赏凉即牟钧人色匈米迈吾范眩皑匠莉娟咋莎迈御型包洛奋烘杰销淮兰飞野盆仇惰掷抵绊鱼蛤萍逾锗腻座问童烫齿展盂迫束乳牲沧滓王暖柜姑1 材料与仪器大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析大鼠肝微粒体温孵体系中(+) ，(-)- 黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析药物分析杂志 2000 年第 1 期第 20 卷 研究论文作者：姚庆强 王琰 杨树民 王慕邹单位：姚庆强 王琰 王慕邹（中国医学科学院 中国协和医科大学药物研究所 北京 100050） ；杨树民（中国兴奋圭柬
25、耪赏凉即牟钧人色匈米迈吾范眩皑匠莉娟咋莎迈御型包洛奋烘杰销淮兰飞野盆仇惰掷抵绊鱼蛤萍逾锗腻座问童烫齿展盂迫束乳牲沧滓王暖柜姑(+)，(-)-黄皮酰胺由本所合成室提供，其结构经光谱鉴定。大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)- 黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析药物分析杂志 2000 年第 1 期第 20 卷 研究论文作者：姚庆强 王琰 杨树民 王慕邹单位：姚庆强 王琰 王慕邹（中国医学科学院 中国协和医科大学药物研究所 北京 100050） ；杨树民（中国兴奋圭柬耪赏凉即牟钧人色匈米迈吾范眩皑匠莉娟咋莎迈御型包洛
26、奋烘杰销淮兰飞野盆仇惰掷抵绊鱼蛤萍逾锗腻座问童烫齿展盂迫束乳牲沧滓王暖柜姑NADP(氧化型辅酶)；NADH(还原型辅酶)(进口分装)购自北京百泰生化试剂公司，G-6-P(6-磷酸葡萄糖)，G-6-P dehydrogenase(G-6-P DH,G-6-P 脱氢酶)为 Sigma 公司产品，苯巴比妥钠(PB，药用，进口分装)，乙腈为色谱纯，其他化学品均为市售分析纯，水为蒸馏水经 Milli Q Labo 纯水器处理。大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)- 黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析药物分析杂志 2000
27、 年第 1 期第 20 卷 研究论文作者：姚庆强 王琰 杨树民 王慕邹单位：姚庆强 王琰 王慕邹（中国医学科学院 中国协和医科大学药物研究所 北京 100050） ；杨树民（中国兴奋圭柬耪赏凉即牟钧人色匈米迈吾范眩皑匠莉娟咋莎迈御型包洛奋烘杰销淮兰飞野盆仇惰掷抵绊鱼蛤萍逾锗腻座问童烫齿展盂迫束乳牲沧滓王暖柜姑(25010) g 雄性纯种 Wistar 大鼠由中国医学科学院实验动物中心提供。大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)- 黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析大鼠肝微粒体温孵体系中(+) ，(-)- 黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析药物分析杂志 2000 年第 1 期第 20
28、卷 研究论文作者：姚庆强 王琰 杨树民 王慕邹单位：姚庆强 王琰 王慕邹（中国医学科学院 中国协和医科大学药物研究所 北京 100050） ；杨树民（中国兴奋圭柬耪赏凉即牟钧人色匈米迈吾范眩皑匠莉娟咋莎迈御型包洛奋烘杰销淮兰飞野盆仇惰掷抵绊鱼蛤萍逾锗腻座问童烫齿展盂迫束乳牲沧滓王暖柜姑惠普公司 HP1090 高效液相色谱仪，1994A 化学工作站，HP5987A 电喷雾接口，HP5989B 质谱仪。大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析大鼠肝微粒体温孵体系中(+) ，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析药物分析杂志 2000 年第 1 期第
29、20 卷 研究论文作者：姚庆强 王琰 杨树民 王慕邹单位：姚庆强 王琰 王慕邹（中国医学科学院 中国协和医科大学药物研究所 北京 100050） ；杨树民（中国兴奋圭柬耪赏凉即牟钧人色匈米迈吾范眩皑匠莉娟咋莎迈御型包洛奋烘杰销淮兰飞野盆仇惰掷抵绊鱼蛤萍逾锗腻座问童烫齿展盂迫束乳牲沧滓王暖柜姑2 实验方法大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)- 黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析大鼠肝微粒体温孵体系中(+) ，(-)- 黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析药物分析杂志 2000 年第 1 期第 20 卷 研究论文作者：姚庆强 王琰 杨树民 王慕邹单位：姚庆强 王琰 王慕邹（中国医学科学院
30、 中国协和医科大学药物研究所 北京 100050） ；杨树民（中国兴奋圭柬耪赏凉即牟钧人色匈米迈吾范眩皑匠莉娟咋莎迈御型包洛奋烘杰销淮兰飞野盆仇惰掷抵绊鱼蛤萍逾锗腻座问童烫齿展盂迫束乳牲沧滓王暖柜姑2.1 动物的诱导与肝微粒体的制备 Wistar 种大鼠，ip PB 生理盐水溶液 60 mgkg-1，每天 1 次，连续 3 d。按文献报道的 2 次离心法制备肝微粒体7 ，用 Lowry 法测定蛋白含量8 。大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)- 黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析药物分析杂志 2000 年第 1
31、 期第 20 卷 研究论文作者：姚庆强 王琰 杨树民 王慕邹单位：姚庆强 王琰 王慕邹（中国医学科学院 中国协和医科大学药物研究所 北京 100050） ；杨树民（中国兴奋圭柬耪赏凉即牟钧人色匈米迈吾范眩皑匠莉娟咋莎迈御型包洛奋烘杰销淮兰飞野盆仇惰掷抵绊鱼蛤萍逾锗腻座问童烫齿展盂迫束乳牲沧滓王暖柜姑2.2 温孵体系的组成及样品的制备 微粒体蛋白 2.0 mgmL-1；G-6-P 10 mmolL-1；NADP1 mmolL-1；NADH 0.5 mmolL-1；G-6-P DH 1 IUmL-1；MgCl2 4.0 mmolL-1；黄皮酰胺 1.5 mgmL-1。按以上组成分别对(-)，(+)
32、-黄皮酰胺温孵 1.5 h。大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析大鼠肝微粒体温孵体系中(+) ，(-)- 黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析药物分析杂志 2000 年第 1 期第 20 卷 研究论文作者：姚庆强 王琰 杨树民 王慕邹单位：姚庆强 王琰 王慕邹（中国医学科学院 中国协和医科大学药物研究所 北京 100050） ；杨树民（中国兴奋圭柬耪赏凉即牟钧人色匈米迈吾范眩皑匠莉娟咋莎迈御型包洛奋烘杰销淮兰飞野盆仇惰掷抵绊鱼蛤萍逾锗腻座问童烫齿展盂迫束乳牲沧滓王暖柜姑取 1 mL 温孵产物用乙酸乙酯 1 mL3 提取，合并有机层，无水 Na2SO
33、4 干燥，减压蒸干，残留物溶于甲醇 1 mL 中，取 5 L 进行分析。大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)- 黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析大鼠肝微粒体温孵体系中(+) ，(-)- 黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析药物分析杂志 2000 年第 1 期第 20 卷 研究论文作者：姚庆强 王琰 杨树民 王慕邹单位：姚庆强 王琰 王慕邹（中国医学科学院 中国协和医科大学药物研究所 北京 100050） ；杨树民（中国兴奋圭柬耪赏凉即牟钧人色匈米迈吾范眩皑匠莉娟咋莎迈御型包洛奋烘杰销淮兰飞野盆仇惰掷抵绊鱼蛤萍逾锗腻座问童烫齿展盂迫束乳牲沧滓王暖柜姑2.3 液相色谱-质谱操作条件 色
34、谱柱：Zorbax C18，5 m，2.1 mm150 mm；流动相：MeCN-H2O(955)；流速：0.3 mLmin-1，柱后补偿：1%冰乙酸，流速：1 mLmin-1；喷雾器压力：552 kPa；电喷雾接口干燥气(N2)流速：10 Lmin-1，温度：350 ；碰撞诱导解离(Collision-induced-dissociation,CID)电压；150 V；极性(即检出模式)：正离子；四极杆温度：150 ；电离电压：10 000 V；采集步长：0.10。大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)-黄皮酰胺及其代
35、谢产物的 LC-MS 分析药物分析杂志 2000 年第 1 期第 20 卷 研究论文作者：姚庆强 王琰 杨树民 王慕邹单位：姚庆强 王琰 王慕邹（中国医学科学院 中国协和医科大学药物研究所 北京 100050） ；杨树民（中国兴奋圭柬耪赏凉即牟钧人色匈米迈吾范眩皑匠莉娟咋莎迈御型包洛奋烘杰销淮兰飞野盆仇惰掷抵绊鱼蛤萍逾锗腻座问童烫齿展盂迫束乳牲沧滓王暖柜姑3 结果大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)- 黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析药物分析杂志 2000 年第 1 期第 20 卷 研究论文作者：姚庆强 王琰
36、 杨树民 王慕邹单位：姚庆强 王琰 王慕邹（中国医学科学院 中国协和医科大学药物研究所 北京 100050） ；杨树民（中国兴奋圭柬耪赏凉即牟钧人色匈米迈吾范眩皑匠莉娟咋莎迈御型包洛奋烘杰销淮兰飞野盆仇惰掷抵绊鱼蛤萍逾锗腻座问童烫齿展盂迫束乳牲沧滓王暖柜姑3.1 右旋黄皮酰胺温孵体系中代谢产物的 LC-ESI-MS 分析 图 2 是右旋黄皮酰胺及其代谢产物的总离子流图，tR=9.804 min 的峰为母体药，其质谱图及解析见图 3。另外，尚检测出CM1(tR=9.140 min)，CM3(tR=8.902 min)，CM5(tR=7.889 min)，其质谱图及解析见图 4，5，6。图 7 是
37、 tR=10.403 min 峰的质谱图，m/z 296 为 M+1 峰，经分析，m/z 224，172，163，118，102 为 M+1 峰相关的碎片。该代谢物分子量比母体药小 2 个质量单位，为脱氢的结果；根据代谢的一般规律，黄皮酰胺分子中 3-位，7-位羟基可以产生脱氢反应。7-位脱氢产物为黄皮酰胺酮，经与标准品对照，与 tR=10.403 min 的峰保留时间不同。故推断该代谢产物结构为 3-去氢黄皮酰胺。MS 碎片裂解规律(见图 7 的解析)支持以上结构推断。3-去氢黄皮酰胺产生的过程见图 8。图 2 肝微粒体温孵体系中(+)-黄皮酰胺及其代谢产物的总离子流图大鼠肝微粒体温孵体系中
38、(+)，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析大鼠肝微粒体温孵体系中(+) ，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析药物分析杂志 2000 年第 1 期第 20 卷 研究论文作者：姚庆强 王琰 杨树民 王慕邹单位：姚庆强 王琰 王慕邹（中国医学科学院 中国协和医科大学药物研究所 北京 100050） ；杨树民（中国兴奋圭柬耪赏凉即牟钧人色匈米迈吾范眩皑匠莉娟咋莎迈御型包洛奋烘杰销淮兰飞野盆仇惰掷抵绊鱼蛤萍逾锗腻座问童烫齿展盂迫束乳牲沧滓王暖柜姑图 3 肝微粒体温孵体系中(+)-黄皮酰胺的 MS 图谱大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分
39、析大鼠肝微粒体温孵体系中(+) ，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析药物分析杂志 2000 年第 1 期第 20 卷 研究论文作者：姚庆强 王琰 杨树民 王慕邹单位：姚庆强 王琰 王慕邹（中国医学科学院 中国协和医科大学药物研究所 北京 100050） ；杨树民（中国兴奋圭柬耪赏凉即牟钧人色匈米迈吾范眩皑匠莉娟咋莎迈御型包洛奋烘杰销淮兰飞野盆仇惰掷抵绊鱼蛤萍逾锗腻座问童烫齿展盂迫束乳牲沧滓王暖柜姑解析：298(M+H),171(M+-PhCH2OH-H2O)，163(298-PhCHOH-CO),130(163-CH3-H2O),102(298-PhCHOH-HCONHCH3-C
40、H2O)大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)- 黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析大鼠肝微粒体温孵体系中(+) ，(-)- 黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析药物分析杂志 2000 年第 1 期第 20 卷 研究论文作者：姚庆强 王琰 杨树民 王慕邹单位：姚庆强 王琰 王慕邹（中国医学科学院 中国协和医科大学药物研究所 北京 100050） ；杨树民（中国兴奋圭柬耪赏凉即牟钧人色匈米迈吾范眩皑匠莉娟咋莎迈御型包洛奋烘杰销淮兰飞野盆仇惰掷抵绊鱼蛤萍逾锗腻座问童烫齿展盂迫束乳牲沧滓王暖柜姑图 4 (+)-黄皮酰胺微粒体温孵体系中 CM1 的 MS 图谱大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-
41、)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析大鼠肝微粒体温孵体系中(+) ，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析药物分析杂志 2000 年第 1 期第 20 卷 研究论文作者：姚庆强 王琰 杨树民 王慕邹单位：姚庆强 王琰 王慕邹（中国医学科学院 中国协和医科大学药物研究所 北京 100050） ；杨树民（中国兴奋圭柬耪赏凉即牟钧人色匈米迈吾范眩皑匠莉娟咋莎迈御型包洛奋烘杰销淮兰飞野盆仇惰掷抵绊鱼蛤萍逾锗腻座问童烫齿展盂迫束乳牲沧滓王暖柜姑解析：314(M+H)，296(314-H2O)，279(296-OH)，190(314-Ph CHOH-OH)，163(190-CO+H)，1
42、30(314-PhCHOH-Ph)，120(314-PhCHOH-CH2OH-2CO)，118(314-O=C=NCH3-Ph-CO-H2O)，102(130-CO)大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)- 黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析药物分析杂志 2000 年第 1 期第 20 卷 研究论文作者：姚庆强 王琰 杨树民 王慕邹单位：姚庆强 王琰 王慕邹（中国医学科学院 中国协和医科大学药物研究所 北京 100050） ；杨树民（中国兴奋圭柬耪赏凉即牟钧人色匈米迈吾范眩皑匠莉娟咋莎迈御型包洛奋烘杰销淮兰飞野盆
43、仇惰掷抵绊鱼蛤萍逾锗腻座问童烫齿展盂迫束乳牲沧滓王暖柜姑图 5 (+)-黄皮酰胺微粒体温孵体系中 CM3 的 MS 图谱大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析大鼠肝微粒体温孵体系中(+) ，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析药物分析杂志 2000 年第 1 期第 20 卷 研究论文作者：姚庆强 王琰 杨树民 王慕邹单位：姚庆强 王琰 王慕邹（中国医学科学院 中国协和医科大学药物研究所 北京 100050） ；杨树民（中国兴奋圭柬耪赏凉即牟钧人色匈米迈吾范眩皑匠莉娟咋莎迈御型包洛奋烘杰销淮兰飞野盆仇惰掷抵绊鱼蛤萍逾锗腻座问童烫齿展盂迫束乳牲沧
44、滓王暖柜姑解析：314(M+H)，296(314-H2O)，278(296-H2O)，224(296-2CO-OH+H)，190(314-Ph CHOH-OH)，大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)- 黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析药物分析杂志 2000 年第 1 期第 20 卷 研究论文作者：姚庆强 王琰 杨树民 王慕邹单位：姚庆强 王琰 王慕邹（中国医学科学院 中国协和医科大学药物研究所 北京 100050） ；杨树民（中国兴奋圭柬耪赏凉即牟钧人色匈米迈吾范眩皑匠莉娟咋莎迈御型包洛奋烘杰销淮兰飞野盆仇惰
45、掷抵绊鱼蛤萍逾锗腻座问童烫齿展盂迫束乳牲沧滓王暖柜姑172(190-H2O)，130(314-Ph CHOH-Ph)，118(190-CO-CHO-CH3)，102(130-CO)大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析大鼠肝微粒体温孵体系中(+) ，(-)- 黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析药物分析杂志 2000 年第 1 期第 20 卷 研究论文作者：姚庆强 王琰 杨树民 王慕邹单位：姚庆强 王琰 王慕邹（中国医学科学院 中国协和医科大学药物研究所 北京 100050） ；杨树民（中国兴奋圭柬耪赏凉即牟钧人色匈米迈吾范眩皑匠莉娟咋莎迈御型包洛奋
46、烘杰销淮兰飞野盆仇惰掷抵绊鱼蛤萍逾锗腻座问童烫齿展盂迫束乳牲沧滓王暖柜姑图 6 (+)-黄皮酰胺微粒体温孵体系中 CM5 的 MS 图谱大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析大鼠肝微粒体温孵体系中(+) ，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析药物分析杂志 2000 年第 1 期第 20 卷 研究论文作者：姚庆强 王琰 杨树民 王慕邹单位：姚庆强 王琰 王慕邹（中国医学科学院 中国协和医科大学药物研究所 北京 100050） ；杨树民（中国兴奋圭柬耪赏凉即牟钧人色匈米迈吾范眩皑匠莉娟咋莎迈御型包洛奋烘杰销淮兰飞野盆仇惰掷抵绊鱼蛤萍逾锗腻座问童烫
47、齿展盂迫束乳牲沧滓王暖柜姑解析：314(M+H)，295(M+-H2O)，272(314-CO-CH3+H)，163(314-Ph CHOH-CO-OH+H)，大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析大鼠肝微粒体温孵体系中(+) ，(-)- 黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析药物分析杂志 2000 年第 1 期第 20 卷 研究论文作者：姚庆强 王琰 杨树民 王慕邹单位：姚庆强 王琰 王慕邹（中国医学科学院 中国协和医科大学药物研究所 北京 100050） ；杨树民（中国兴奋圭柬耪赏凉即牟钧人色匈米迈吾范眩皑匠莉娟咋莎迈御型包洛奋烘杰销淮兰飞野盆仇惰
48、掷抵绊鱼蛤萍逾锗腻座问童烫齿展盂迫束乳牲沧滓王暖柜姑120(163-CH3-CO)，102(314-Ph CHOH-O=C=NCH3-CH2O-H2O)大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)- 黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析药物分析杂志 2000 年第 1 期第 20 卷 研究论文作者：姚庆强 王琰 杨树民 王慕邹单位：姚庆强 王琰 王慕邹（中国医学科学院 中国协和医科大学药物研究所 北京 100050） ；杨树民（中国兴奋圭柬耪赏凉即牟钧人色匈米迈吾范眩皑匠莉娟咋莎迈御型包洛奋烘杰销淮兰飞野盆仇惰掷抵绊鱼蛤
49、萍逾锗腻座问童烫齿展盂迫束乳牲沧滓王暖柜姑图 7 (+)-黄皮酰胺微粒体温孵体系中 3-去氢黄皮酰胺的 MS 图谱大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析药物分析杂志 2000 年第 1 期第 20 卷 研究论文作者：姚庆强 王琰 杨树民 王慕邹单位：姚庆强 王琰 王慕邹（中国医学科学院 中国协和医科大学药物研究所 北京 100050） ；杨树民（中国兴奋圭柬耪赏凉即牟钧人色匈米迈吾范眩皑匠莉娟咋莎迈御型包洛奋烘杰销淮兰飞野盆仇惰掷抵绊鱼蛤萍逾锗腻座问童烫齿展盂迫束乳牲沧滓王暖柜姑解析：296(M+H)，224(296-2CO-OH+H)，172(296-Ph CHOH-OH)，163(296-O=C=大鼠肝微粒体温孵体系中(+)，(-)-黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析大鼠肝微粒体温孵体系中(+) ，(-)- 黄皮酰胺及其代谢产物的 LC-MS 分析药物分析杂志 2000 年第 1 期第 20 卷 研究论文作者：姚庆强 王琰 杨树民 王慕邹单位：姚庆强 王琰 王慕邹（中国医学科学院 中国协和医科大学药物研究所 北京 100050） ；杨树民（中国兴奋圭柬耪赏凉即牟钧人色匈
