1、 毕 业 设 计（论 文）设计(论文) 题目： 一例猪瘟与高致病性蓝耳病混合感染的诊治 学生姓名： 高修歌 指导教师： 张淼 二级学院：动物科学与技术学院 专 业： 动物医学 班 级： 09 级（2）班 学 号： 0910101099 提交日期： 年 月 日 答辩日期： 年 月 日 金陵科技学院学士学位论文 目录目 录摘要IIAbstractIII前言1一、 材料与方法21.1 材料21.1.1 主要试剂21.1.2 主要仪器21.2 发病情况 21.3 病理剖检31.4 细菌学检测31.5 血清学检测31.5.1 猪瘟抗体 ELISA 检测方法31.5.2 猪蓝耳病抗体及猪伪狂犬病抗体 EL
2、ISA 检测方法41.6 病原检测51.6.1DNA 提取 51.6.2RNA 提取 51.6.3 反转录 51.6.4PCR 检测6二、结果与分析72.1 病理变化72.2 细菌学检测结果72.3 血清学检测结果82.4 病原学检测结果92.5 治疗措施及转归情况 10三、讨论与分析10参考文献13致谢15金陵科技学院学士学位论文 摘要一例猪瘟与高致病性蓝耳病混合感染的诊治摘 要本文详细报告了一起猪瘟与高致病性蓝耳病混合感染的诊治情况。江苏某规模化养猪场发生了一起以仔猪和保育猪呼吸困难，腹部和末端发红，精神沉郁，少食或不食，腹泻，呕吐及妊娠母猪流产和木乃伊胎显著增加为临床症状，绝大多数发病猪
3、从发病到死亡不超过 5 天。死前出现划水样神经症状，呼吸急促，消瘦，高热稽留为特征的疾病，经流行病学调查、临床观察、病理剖检与实验室检测，诊断为猪瘟与猪高致病性蓝耳病混合感染，通过综合性治疗与预防措施取得了良好的效果，为目前规模化猪场猪瘟与猪高致病性蓝耳病混合感染的诊断与治疗提供了可行性建议。关键词：高致病性蓝耳病；猪瘟；混合感染；诊治；仔猪金陵科技学院学士学位论文 AbstractA case of classical swine fever and the highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome dis
4、ease diagnosis and treatment of mixed infection AbstractIn this paper, a detailed report of the classical swine fever with mixed infection with the highly pathogenic Porcine reproductive and respiratory syndrome disease diagnosis and treatment. A large-scale pig farms in Jiangsu occurred in piglets
5、and conservation of pigs, difficulty breathing, abdominal and redness at the end, spirit is depressed, eat less or dont eat, diarrhea, vomiting and reproductive failure in female pigs and mummy foetus pregnancy are associated with a significantly increased as the clinical symptoms, the vast majority
6、 of pig disease from onset to death for no more than 5 days. Died zoned water neural symptoms, shortness of breath, angular, of diseases characterized by high fever continued, the epidemiological investigation, clinical observation, pathological autopsy and laboratory tests, a diagnosis of swine fev
7、er and mixed infection of highly pathogenic Porcine reproductive and respiratory syndrome disease, through comprehensive treatment and prevention measures have achieved good effect, for the large-scale pig farms swine fever and mixed infection of highly pathogenic Porcine reproductive and respirator
8、y syndrome disease diagnosis and therapy provides a feasible Suggestions.Key words: highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome disease; classical swine fever; mixed infection; diagnosis and treatment; piglet金陵科技学院学士学位论文 前言0前言近年来，随着我国养猪业的高速发展，加之畜禽商品贸易流通频繁，猪病的种类越来越多，疾病也越来越复杂，防控难度不
9、断加大 1,2。对全国养猪业的健康生产造成了巨大威胁，尤其是散养户，中小型规模化养猪场，受猪病影响生产经济效益损失惨重，大型规模化猪场也同样受到疾病困扰，生猪养殖压力巨大 3。而猪场发病又多以混合感染，继发感染为主，单一发病很少，据张荣连 4可知猪场 80%以上发病都以两种或多种病原的混合感染或继发感染形式出现。在众多的混合感染中，既有病毒混合感染、细菌混合感染，还有病毒细菌与寄生虫的混合感染 6。而病毒病的混合感染居多且危害严重，临床上以蓝耳病毒与猪瘟病毒、蓝耳病毒与圆环病毒、猪瘟病毒与伪狂犬病毒、蓝耳病毒与伪狂犬病毒混合感染常见 1,2,3,4,5。这几种病毒病均为免疫抑制性疾病，感染后导
10、致猪只抵抗力下降，处于亚健康状态，使多种病毒、细菌、寄生虫等病原体趁虚而入，导致疾病症状复杂，疫苗免疫失败或药物治疗不佳 4，并出以下综合征：猪呼吸道疾病综合征（PRDC ） 、猪断奶后多系统衰竭综合征（PMWS） 、猪皮炎肾病综合征（PDNS ） 1,2,3及 06 年夏季出现在我国的“高热病” 6，导致猪群发病率和死亡率明显升高 1，故猪病的防控形势依然严峻。猪瘟(Classical Swine Fever，CSF）是我国乃至全球养猪业最重要的传染病之一 7，早期叫做猪霍乱、烂肠瘟，在欧洲称它为“古典猪瘟”以与非洲猪瘟相区分。它是由猪瘟病毒（CSFV）引起的猪的一种急性、热性、高度接触性传
11、染病 8，严重影响我国及世界各国养猪业的发展，造成巨大的经济损失。为此，国际兽医局（OIE ）将此病列为A类法定传染病之一，也是我国法定的一类动物传染病 8。近年来我国出现了温和型猪瘟、非典型猪瘟、隐性猪瘟及免疫后发病的情况，临床症状与病理变化均不明显，持续感染及先天免疫耐受现象频发，免疫失败现象增加，与其他疾病的混合感染现象普遍 9。这些新的现象出现，意味着猪瘟的防控愈加发杂，要想全面消灭控制该病尚需广大兽医工作者不懈努力。蓝耳病（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome，PRRS）是猪繁殖与呼吸综合症的俗称，而高致病性蓝耳病（HP-PRRS
12、）是由猪繁殖与呼吸综合症病毒（PRRSV ）变异株引起的一种急性高致死性传染病 8。据杨晓花 10等报道，仔猪发病率可达100%、死亡率可达50%以上，母猪流产率可达30%以上，育肥猪也能发病死亡,因此对养猪业健康生产构成严重威胁。加上PRRSV的感染金陵科技学院 讨论与分析1可导致猪只的免疫抑制，使其免疫系统功能下降，在一些诱发因子的刺激下易引起继发感染金陵科技学院学士学位论文 材料与方法2和混合感染，致使猪病临床症状更加复杂，诊断难度增加，防治效果较差 11。据田克恭 12报道我国目前绝大部分猪场均为蓝耳病阳性猪场，对我国养猪业造成的经济损失巨大，因此蓝耳病的防控依然是近期我国猪病防控的热
13、点，可见在生产中预防蓝耳病的发生和传播意义重大。猪瘟与高致病蓝耳病的混合感染是临床上常见的一种现象，目前，我国很多猪场都存在这两种病原体混合感染的情况，已有几十篇关于此病的报道。据王隆柏 13 等在2011年对102个规模化猪场猪瘟、猪蓝耳病、猪伪狂犬病原的检测结果可知，猪瘟与蓝耳病的混合感染猪场有31个，占猪场总数的30.4%；马慧玲 14等在2012年对126个猪场发病情况调查分析，猪瘟与蓝耳病的混合感染占到15.44%，曲建议 15的研究表明，在我国猪瘟与蓝耳病混合感染还呈上升趋势，给养猪业蒙上一层阴影。面对如此严峻的形势，对于猪瘟与蓝耳病混合感染的快速诊断与确切治疗就显得意义重大，是我
14、们广大兽医工作者应该认真研究的课题方向。本文详细报道了江苏省某规模化养猪场发生的一起猪瘟与高致病性蓝耳病混合感染的诊治过程，通过综合性的治疗和防控措施取得了良好的效果，为目前规模化猪场猪瘟与高致病性蓝耳病等混合感染病例的诊断与治疗提供了一定参考。1、材料与方法1.1 材料1.1.1 主要试剂猪蓝耳病抗体 ELISA 检测试剂盒，猪伪狂犬抗体 ELISA 检测试剂盒，猪瘟抗体 ELISA 检测试剂盒购自 IDEXX 公司。Trizol Reagent 、反转录酶和 Taq酶分别购自 Invitrogen、Promega 和 TaKaRa 公司。1.1.2 主要仪器3K15 高速冷冻离心机（德国
15、Sigma 公司） ；7500 实时荧光定量 PCR 仪（ABI 公司） ；JS2380A 自动凝胶图像分析仪（上海培清科技公司） ；LDZM 型立式智能压力蒸汽灭菌器（上海申安医疗器械厂） ；JA2003 型电子天平（上海良平仪器仪表有限公司） ；HG101-1 型电热鼓风干燥箱（南京电器三厂） ；DK-8D 型电热恒温水槽（上海一恒科技有限公司） ；JN303-4 型电热恒温培养箱（南京市江宁电器仪器厂） ；QB296 型梯度 PCR 仪（英国 Quanta Biotech 公司） ；HYQ-2121A 型涡旋混匀器（苏州捷美电子有限公司） ；紫外分光光度计（Eppendorf 公司） 。
16、1.2 发病情况金陵科技学院学士学位论文 材料与方法3该发病猪场位于江苏南通，发病期间基础母猪450头，主要是断奶前后（21日龄断奶）后哺乳仔猪和保育猪呼吸困难，腹部和末端发红，精神沉郁，少食或不食，腹泻，呕吐，绝大多数发病猪从发病到死亡不超过5天。死前出现划水样神经症状，呼吸急促，消瘦，高热稽留。发病率30%，死亡率接近55%。妊娠母猪流产和木乃伊胎显著增加。母猪猪蓝耳病疫苗，猪瘟疫苗和猪伪狂犬疫苗分别于产前60天，产前30天和产前20天免疫。1.3 病理剖检选择 3 头典型症状的仔猪进行病理剖检，并记录结果。1.4 细菌学检测采集心包积液、肺和腹股沟淋巴结,按实验室常规方法进行涂片,采用革
17、兰氏染色的方法，按兽医微生物实验指导所述步骤进行染色，并用普通光学显微镜在400倍放大倍数下镜检。具体操作步骤如下：（1）涂片：取一洁净载玻片，在载玻片上滴一小滴水，用无菌镊无菌操作挑取少许病变组织于水滴中，轻轻涂抹在载玻片上，室温自然干燥，火焰固定。（2）初染：草酸铵结晶紫染色液，1-2分钟左右.水洗：倾去染液，用自来水的细水流由载玻片上端流下无色为止。（3）煤染：革兰氏典液染色1-3分钟，水洗。（4）脱水：酒精脱水30秒-1分钟，水洗。（5）复染：石碳酸复红染10-20秒，水洗。（6）镜检：待标本片完全干燥后，先用低倍镜和高倍镜观察，再用油镜观察。革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。1
18、.5 血清学检测对采集的 22 份血清样本，采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测猪瘟（CSF ） 、猪蓝耳病 (PRRS)、猪伪狂犬病（PR）血清抗体。猪瘟抗体检测方法按照美国 IDEXX 公司试剂盒说明书严格操作，猪蓝耳病抗体与猪伪狂犬病抗体检测方法按照武汉科前动物生物制品有限责任公司的试剂盒严格操作。具体方法如下：1.5.1 猪瘟抗体 ELISA 检测方法（1）洗涤液配制: 去离子水将浓缩洗涤液按1：10稀释，即为工作洗涤液。各试剂盒中的试剂均单独稀释并作好标记，用于对应的试剂和盒上，不混用。（2）样本稀释: 用样本稀释液将待检血清样本按1：40稀释，混匀。（3）加样反应：取猪瘟及口蹄疫抗体检测试剂盒里的预包被板，每块板子设置
