1、1实验六 离体蛙心灌流2005 级生物科学（1）班 赵银锁（40508010）一.实验目的 学习离体蛙心灌流的方法； 观察钠、钾、钙三种离子对心脏活动的影响； 观察肾上腺素、乙酰胆碱等因素对心脏活动的影响。二.动物与器材 蟾蜍 斯氏蛙心套管、套管夹、常用手术器械、任氏液、张力换能器、蛙心夹、0.65%NaCl 溶液、 5%NaCl 溶液、 2%CaCl2 溶液、1%KCl 溶液、1:5000肾上腺素溶液、1:10000 乙酰胆碱溶液、300u/ml 肝素溶液三.方法与步骤1. 离体蛙心的制备：双毁髓左主动脉结扎左右两主动脉下方活结备用剪口，插管（管内盛任氏液与肝素）结扎备用线（套管左右主动脉）
2、剪断动脉结扎并剪断静脉。2. 固定套管并用任氏液换洗血液；进入 RM6240 系统。3. 观察并记录正常心搏曲线；4. 向套管内分别加入以下溶液（0.65%NaCl 溶液 2d 、 5%NaCl 溶液 2d 、1%KCl 溶液 1-2d 、2%CaCl2 溶液 1d 、1:5000 肾上腺素溶液 1-2d 、1:10000 乙酰胆碱溶液 1-2d ） ，并作好加药标记,观察并记录曲线变化,待曲线出现明显变化时立即吸去套管中的灌流液,同时做好冲洗标记,并用新鲜任氏液清洗 23 次,待心搏恢复正常.再加入下一种溶液.五.实验结果(1)结果图：图 2 0.65%NaCl2图 3 5%NaCl图 4
3、1%KCl图 5 2%CaCl3图 6 1:5000 肾上腺素图 7 1:10000 乙酰胆碱（2）取药物作用稳定的一段时间 t，在这段时间测得周期数 n(T)，以及心脏的收缩力幅度表：t n(T) 幅度正常 122s 16 0.05 0.855%NaCl 112s 11 0.150.751%KCl 182s 27 0.45o.752%CaCl2 102s 13 00.461:5000 肾上腺素 92s 10 00.451:10000 乙酰胆碱 102s 10 0.150.6表一说明：（1）加入 5%NaCl 溶液后，收缩幅度大大降低，心率变慢。（2）加入 1%KCl 后，收缩的幅度降低，但心
4、率变慢。（3）加入 2%CaCl2 后，收缩的幅度变大，心率变快，甚至达到强制收缩。（4）加入肾上腺素，根据所得数据，心肌的收缩变大，心率变快。4（5）加入 1:10000 乙酰胆碱，收缩的幅度变小，心率变慢。六.实验分析1.作为蛙心起搏点的静脉窦能按一定节律自动产生兴奋。因此，只要将离体失去神经支配的蛙心保持在适宜的环境中，在一定时间被仍能产生节律性兴奋和收缩。另一方面，心脏正常的节律性活动有赖于内环境理化因素的相对稳定，所以，改变灌流液的成分，则可以引起心脏活动的改变。从蛙心正常心搏曲线可以看出.1. 图二和图三为给蛙心分别灌入 0.65%和 5%NaCl 溶液后蛙心搏曲线.前者同蛙心正常
5、心搏曲线比较时发现其心肌收缩力稍有减弱,而后者与蛙心正常心搏曲线比较发现其心肌收缩力有较强减弱.这是由于心室内的 NaCl 溶液使心肌细胞外液的 Ca 离子浓度下降, ,这导致了心肌细胞浆内的 Ca 离子浓度下降,心肌细胞收缩力也就减弱. NaCl 溶液浓度越大这种收缩力减弱程度也越大。2. 图四为给蛙心灌入 1%KCl 溶液后蛙心搏曲线,与图一比较发现此时心肌细胞收缩力降低.当细胞外液钾离子浓度轻度升高时一方面钾离子抑制钙离子内流使钙离子内流量减少,这样钙离子的兴奋偶联作用减小心肌收缩力降低.另一方面膜内外钙离子浓度梯度减小,使心肌细胞膜静息电位绝对值减小,这样静息电位与阈电位水平的电位差减
6、小,心肌细胞兴奋性升高.当细胞外液钾离子浓度显著升高时膜内外钾离子浓度差减小,使静息电位绝对值减小至-55mV ,这样钠离子通道失活,心肌细胞兴奋性降低,心肌停搏于舒张状态。3. 图五为给蛙心灌入 2%CaCl2 溶液后蛙心搏曲线,与图一比较发现此时心肌细胞收缩力显著增强.并且心率变快.这是因为当细胞外液钙离子浓度显著升高时胞膜内外钙离子浓度梯度增大,一方面慢反应细胞 4 期自动去极速度加快,心肌自律性增强,心率也就增大:另一方面工作细胞动作电位期间钙离子内流量加大导致肌浆钙离子浓度增大甚至持续增大,这样钙离子与肌钙蛋白的结合量增多甚至它们只结合不解离,最后心肌收缩力增强或者心肌持续收缩。4.
7、 图六为给蛙心灌入 1:5000 肾上腺素溶液后蛙心搏曲线,可以看出心肌收缩力显著增强,心率也加快.这是因为肾上腺素主要与心肌的 1 受体结合，产生正性变时、变力和变传导效应.引起强心作用。5. 图七为给蛙心灌入 1:10000 乙酰胆碱溶液后蛙心搏曲线,可以看出此时心肌收缩力显著减弱,心率明显减慢. 这是因为乙酰胆碱与心肌细胞的 M2 受体结合，产生负性变时、变力和变传导效应。它能提高膜对钾离子的通透性,促进钾离子外流,使静息膜电位绝对值增大,心肌兴奋性下降,心率减慢。七实验结论（1）钠离子，钾离子都使心肌收缩力下降，钙离子使心肌收缩力升高；(2)肾上腺素使心肌的收缩增大，Ach 使心肌的收缩力下降。八注意事项1制备蛙心标本时，勿伤及静脉窦。2上述各实验项目，一旦出现作用应立即用新鲜任氏液换洗，以免心肌受损，而且必须待心搏恢复正常后方能进行下一步实验。3蛙心插管内液面应保持恒定，以免影响结果。54滴加药品和换取新鲜任氏液，须及时在记录纸上标记，以便观察分析。5吸新鲜任氏液和吸蛙心插管内溶液的吸管应区分专用，不可混淆使用，以免影响实验结果。6化学药物作用不明显时，可再适量滴加，密切观察药物剂量添加后的实验结果。
