1、酵母固态发酵实验方案1、实验目的1.学习酵母固态发酵实验步骤、条件。2.掌握酵母发酵产物的分析方法（气质联用仪的使用） 。3.了解酵母固态发酵的过程以及产物特征。4.学习自主设计实验的方法与步骤。2、实验原理1.酵母与发酵糟醅中微生物区系协同作用，产生复杂的代谢产物。2.利用气质联用仪可对发酵产物进行成分与含量的分析。3、实验材料、仪器与试剂材料：酵母菌、酵母固态发酵酒醅、黄水等；仪器：气质联用仪、灭菌锅、窖粮糟、锥形瓶、烧杯、接种针、接种环、移液枪等；试剂：YPD 培养基、糟醅浸汁液体培养基、蒸馏水等。4、实验步骤（一） 、酵母活化1.1 将保存菌种的 EP 管取出，4冰箱中解冻 2-3h。
2、1.2 用牛皮纸包好 130 个平板（每个包 12 个） 、4 支接种针、130支 10mL 试管，并将 1000mL 蒸馏水（洗脱酵母用，130*5=650mL，实验时制备 1000mL）分装至 4 个 500mL 锥形瓶中，塞好棉花塞后，用牛皮纸包好，121灭菌 20min，灭菌完成后移至超净工作台冷却，备用。1.3 配制 YPD 培养基（130 株菌，共计 130*30mL=3900mL，实验时制备 4000mL 备用）（1）称取 40g 酵母膏, 80g 蛋白胨于 4000ml 水中，加入 80g 琼脂粉于电磁炉专用锅（2 个）中，加热搅拌溶解，用盐酸与氢氧化钠溶液调 pH 为 4.5
3、，分装至 16 个 500mL 锥形瓶中；（2）塞好棉花塞后，用牛皮纸包好，121灭菌 20min；（3）灭菌完成后移至超净工作台冷却至 50-60，制备平板共计 130 个。1.4 接种酵母，培养（1）在超净工作台上，用接种针将 EP 管中的酵母挑取到制备好的平板上划线（每株菌一个平板） ；（2）贴好标签后，移至恒温培养箱中 28培养至形成肉眼可见的单菌落。1.5 制备酵母菌悬液（1）在超净工作台上，向平板中加入 5mL 先前制备好的无菌蒸馏水（条件允许时用酵母生理盐水） ，用接种针挑动，洗脱菌落，得酵母菌悬液；（2）移至 10mL 试管中，塞好棉花塞后，贴好标签，备用。（2） 、实验设备转
4、移（实验室至生产现场）1.准备约 140 个玻璃发酵坛（每株菌一个共 130 个，空白糟醅（未拌酒曲）一个、生产厂方发酵生产糟醅（加无菌水 5%）一个、发酵完成但未蒸馏的糟醅一个、老师实验用 2 个、其它 5 个） ，装箱；2.准备 150 双塑料手套、一张约 10 平方米塑料纸、150 张保鲜膜、10 个 50mL 烧杯（拌黄水与菌种用） 、4 支玻璃棒，2-4 壶开水（在厂方接取）等；3.将上述物品与制备好的酵母菌悬液（试管）一并用车带至生产厂方，备用。（3） 、接种、拌和、封坛1.将 10 平方米的塑料纸铺开，铲取 130*700=91000mL 约130*500=65000g=65kg
5、（实验时可相应增加使用量）的糟醅（未拌酒曲）于塑料纸上；2.分 2-4 组，拌和。每株菌用 35mL 黄水、700mL(500g)糟醅、5mL酵母菌悬液。（1）用开水将烧杯与玻璃棒灭菌，冷却；（2）移取 700mL(500g)糟醅于一张保鲜膜上，将 35mL 黄水与 5mL酵母菌悬液在烧杯中用玻璃棒拌匀后倒在糟醅上，带上手套拌和均匀（每株菌用一双手套、烧杯与玻璃棒拌菌后用开水灭菌，冷却） ；（3）将拌好菌的糟醅移至发酵坛中，压至理想程度后，盖上坛盖，用细沙封口，贴好标签。（4）操作完成后带走垃圾并打扫好卫生。（5）将发酵坛转车运回实验室 30恒温培养 30d（开空调调温） ，定期观察记录。附：1、酵母浸提液制备：从厂方带回 65kg 的糟醅用 1:1 的热水浸泡煮沸 5min，沥取浸提液于塑料桶中（或在厂方将浸提液制备好后带回），冷冻备用2、王老师实验用发酵材料：1.700mL(500g)糟醅（拌曲）+半坛黄水2.700mL(500g)糟醅（拌曲）+整坛黄水3.具体操作参照酵母固态发酵实验方法。
