1、 ICS 备案号：陕西省地方标准DB61DB61/T 植物油中苯并（a）芘的测定 液相色谱-荧光检测法Determination of benzo()pyrene in vegetable oil Liquid chromatography with fluorescence detection（征求意见稿）-发布 -实施陕 西 省 质 量 技 术 监 督 局 发 布DB61/T I前 言本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由陕西出入境检验检疫局提出。本标准起草单位：中华人民共和国陕西出入境检验
2、检疫局。本标准主要起草人：何强，孔祥虹，李建华，。DB61/T 1植物油中苯并（a）芘的测定 液相色谱-荧光检测法1 范围本标准规定了植物油中苯并（a）芘的液相色谱-荧光检测方法。本标准适用于花生油、大豆油、玉米油、葵花籽油、稻米油、胡麻油、调和油、菜籽油、橄榄油、香油中苯并（a）芘的测定。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3 方法提要试样用正己烷溶解后，香油样品经硅胶固相萃取柱串联聚苯乙烯二乙烯基苯共聚物固
3、相萃取柱净化、其他植物油经聚苯乙烯二乙烯基苯共聚物固相萃取柱净化，用液相色谱荧光检测法检测，外标法定量。4 试剂和材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682规定的一级水。4.1 乙腈：色谱纯。4.2 二氯甲烷：色谱纯。4.3 正己烷：色谱纯。4.4 乙腈-水（95 + 5，体积比）：取 950 mL 乙腈和 50 mL 水，混合均匀。4.5 苯并（a）芘标准物质（Benzo(a)pyrene,C 20H12,CAS:50-32-8）：纯度大于等于 99 。4.6 苯并（a）芘标准储备溶液：准确称取适量的苯并（a）芘标准物质，用二氯甲烷配制成 1000 g/mL 的标准储备
4、溶液， 0 4 保存。4.7 苯并（a）芘标准工作溶液：测定时根据需要用乙腈配制成适当浓度的标准工作溶液。4.8 聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物固相萃取柱： Bond Elut ENV 柱 1），500 mg，6 mL 或相当者，使用前依次用 3 mL 二氯甲烷、5 mL 正己烷活化。4.9 硅胶固相萃取柱：500 mg ，6 mL 或相当者，使用前用 5 mL 正己烷活化。4.10 微孔滤膜：0.2 m，有机系。5 仪器和设备5.1 液相色谱仪：配有荧光检测器。5.2 分析天平：感量 0.01 mg、0.01 g。5.3 涡旋混匀器。5.4 固相萃取装置，带真空泵。1） Bond Elut EN
5、V 柱是 Agilent 公司产品的商品名称，给出这一信息只是是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。DB61/T 25.5 具塞离心管或试管：10 15 mL。5.6 减压旋转蒸发器。5.7 浓缩瓶：50 mL。6 试样制备与保存取代表性植物油样品约500 g，混匀，装入洁净的容器内，密闭并标明标记，于4 避光保存。在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。7 测定步骤7.1 提取净化7.1.1 花生油、大豆油、玉米油、葵花籽油、稻米油、胡麻油、调和油、菜籽油、橄榄油称取0.5 g（精确至0.001 g）试
6、样于15 mL离心管中，加入3 mL正己烷，涡旋溶解，取活化好的聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物固相萃取柱（4.8），将样品溶液上样，用2 mL正己烷洗涤样品管，洗涤液也上柱净化，待样品溶液流至近干后，用5 mL正己烷淋洗，5 mL二氯甲烷洗脱，收集二氯甲烷洗脱液，整个固相萃取过程保持流速12 mL/min，于40 旋转蒸发至近干，氮气吹干，用1.00 mL乙腈超声10s溶解定容，过0.2 m有机系微孔滤膜，供液相色谱-荧光检测法检测。如果个别样品出现回收率偏低、色谱基线不稳定的情况，可以采用6.1.2的方法进行样品净化。7.1.2 香油称取0.5 g（精确至0.001 g）试样于15 mL离心管中
7、，加入3 mL正己烷，涡旋溶解，将硅胶固相萃取柱（4.9）串联在聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物固相萃取柱（4.8）上端，取样品溶液上样，再用2 mL正己烷洗涤样品管，洗涤液也上柱净化，待样品溶液流至近干后，用5 mL正己烷淋洗串联固相萃取柱，淋洗完成后去除硅胶固相萃取柱，用5 mL二氯甲烷洗脱聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物固相萃取柱，收集洗脱液，整个固相萃取过程保持流速12 mL/min，于40 旋转蒸发至近干，氮气吹干，用1.00 mL乙腈超声10s溶解定容，过0.2 m有机系微孔滤膜，供液相色谱荧光检测法检测。7.2 测定7.2.1 液相色谱条件a) 色谱柱：多环芳烃分析专用柱，长250 mm，内
8、径4.6 mm，粒径5 m；b) 流动相：乙腈-水（95 + 5，体积比）等度洗脱，使用前过滤并脱气；c) 柱温：35 C；d) 激发波长：384 nm；发射波长： 406 nme) 流速：1.5 mL / min；f) 进样量：20 L。7.2.2 液相色谱测定根据样液中苯并（a）芘含量情况，选定与样液浓度相近的标准工作溶液，标准工作溶液和样液中苯并（a）芘的响应值均应在仪器检测线性范围内，如果样液中苯并（a）芘含量超出检测的线性范围，则稀释后再进样。对标准工作溶液和样液等体积分时段参插进样测定，以保留时间定性，外标法定量，在7.2.1给定的液相色谱荧光检测条件下，苯并（a）芘标准品的液相色
9、谱图参见附录A中图A.1。7.3 空白试验除不加试样外，均按上述检测步骤进行。7.4 结果计算和表述用色谱数据处理机或按式（1）计算试样中苯并（a）芘含量（1）mAVcXsDB61/T 3式中：X 试样中苯并（a）芘的含量，单位为微克每千克（g/kg）；A 样液中苯并（a）芘的色谱峰面积；cs 标准工作液中苯并（a）芘的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；V 样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；As 标准工作液中苯并（a）芘的色谱峰面积；m 最终样液所代表的试样量，单位为克（g）。计算结果应扣除空白值。计算结果不大于10 g/kg时保留一位小数，计算结果大于10 g/kg时保留到最接近的整
10、数。8 测定低限、回收率和精密度8.1 测定低限本方法的测定低限为1.0 g/kg。8.2 回收率和精密度苯并（a）芘的回收率及精密度数据参见附录B中表B.1。DB61/T 4附 录 A（资料性附录）苯并（a）芘标准品液相色谱图图A.1 苯并（a）芘标准品液相色谱图DB61/T 5附 录 B（资料性附录）苯并（a）芘的添加回收率及精密度数据表 B.1 植物油中苯并（a）芘的添加回收率及精密度数据样品名称 加标水平（g / kg） 回收率范围 （%） 平均回收率 （%） 精密度（%）5.0 79.3 103.6 89.6 9.810.0 80.4 99.7 88.9 7.1花生油20.0 81.
11、5 99.0 89.8 6.91.0 78.1 98.6 87.9 7.65.0 80.9 98.4 88.6 7.1大豆油10.0 81.9 101.1 90.1 7.71.0 78.9 97.4 87.9 7.55.0 79.8 98.1 88.8 6.8玉米胚芽油10.0 81.4 100.6 89.2 7.42.0 77.3 102.5 89.8 9.85.0 78.2 99.2 89.1 7.8葵花籽油10.0 79.9 99.7 89.2 7.81.0 79.7 101.2 88.9 8.65.0 80.6 99.7 89.5 7.7稻米油10.0 79.9 100.2 90.1
12、8.35.0 77.8 106.8 89.1 11.810.0 79.7 99.4 89.6 7.5胡麻油20.0 82.8 102.1 89.8 7.72.0 77.9 99.2 88.2 9.15.0 78.1 98.4 88.9 7.4坚果调和油10.0 79.5 101.8 90.0 8.21.0 78.5 99.6 88.4 8.15.0 79.6 97.9 88.9 7.1菜籽油10.0 80.4 99.6 89.4 7.41.0 79.4 100.9 88.8 8.45.0 80.0 101.3 89.9 8.2橄榄油10.0 82.5 102.8 90.8 8.01.0 78.4 100.3 87.2 8.95.0 79.4 99.8 88.5 7.6香油10.0 81.3 101.2 89.7 7.5
