1、1,荧光法测定维生素B2片剂中核黄素含量,一、实验目的：,1学习和掌握荧光光度分析方法,2了解荧光分光光度计的结构及使用方法,二、实验原理：,维生素B2结构式,维生素B2，又叫核黄素， 橘黄色,无臭的针状晶体,易溶于水而不溶于 乙醚等有机溶剂,在中性或酸性溶液中稳定,光照易分解，对热稳定,2,维生素B2水溶液在430-440nm蓝光或紫外光照射下会发生绿色荧光，荧光峰在535nm,在pH=6-7溶液 中荧光强度最大，在pH=11的碱溶液中荧光消失， 所以可以用荧光光谱法测定维生素2的含量,三、实验用品：1仪器：荧光分光光度计，移液管，容量瓶，棕色试剂瓶，比色管，烧杯，离心机，离心管2药品：核黄
2、素（生化试剂），冰醋酸（AR）,盐酸（AR）氢氧化钠，市售维生素B2片剂,四、实验步骤：,1、试剂溶液的配制,1）5醋酸溶液:,取5份冰醋酸与95份体积蒸馏水混合,2）10.0mgL-1VB2标准溶液：,准确称取10.0mgVB2,于少量的5%HAc中溶解,转移 至1L容量瓶中用5%HAc稀释至刻度,置阴凉处保存,3）待测液：,准确称取市售VB2一片,于50mL烧杯中,加入约12mL 5%HAc溶液，用玻璃棒捣碎药片,水浴加热至透明,冷却，转移并加入5%HAc溶液定容至100 mL,过滤,清液备用,2、激发光和荧光波长的选择,准确取10.0mgL-1VB2标准溶液5.0 mL于50mL容量瓶中定容,(2) 转移部分溶液至石英比色皿中,(3) 将荧光分光光度计的荧光波长暂定在525 nm处,在200500 nm波长范围内对激发波长进行扫描,约在265、372、442nm有三个峰,(4) 然后将激发波长设定在442nm处,在400700nm波长范围内对荧光波长扫描,约在525nm处荧光强度最大,从激发和发射光谱上确定最佳的激发和发射波长,3、标准曲线的制作及样品的测定,1）用标准系列溶液的荧光强度绘制标准工作曲线,2）根据待测液的荧光强度，从标准工作曲线上求得其浓度,4、结果的计算：,
