1、 骨组织石蜡切片制作步骤：1.固定：切取骨缺损出的骨组织，用 PBS 冲洗，放入 4%多聚甲醛缓冲液内固定 1224h。2.脱钙：将固定好的骨组织放入脱钙液中侵泡脱钙 24h.3.脱水：将固定好的骨组织用蒸馏水冲洗 3 次，再用 50%的酒精冲洗 2 次，常规脱水，70%酒精（60min） ，80%酒精（40min）,95%酒精（30min）,100%酒精 1（25min）,100%酒精 II（25min） 。4.透明：二甲苯 I(35min)，二甲苯 II（35min） 。5.包埋：将透明处理后的骨组织依次侵入石蜡 I 1 小时，石蜡 II 1小时。6.切片：包埋后的组织块经修理后，用切片机
2、切成 4um 的石蜡带，将组织石蜡块在 50温水中展片，然后用干净的载玻片捞片。7.烤片：将切好的组织片放入 63恒温箱中烤片 2 小时。免疫组化检测步骤：1.脱蜡：将组织切片放入 62恒温箱中烘烤 20min 二甲苯1（10min） 二甲苯 2（10min） 。2.水化：100%酒精 1（2min） 100%酒精（2min） 95%酒精（2min） 80%酒精（2min） 70%酒精(2min) 。3.PBS 冲洗 3 次，每次 5min.。4.抗原修复：将组织片置 0.01M 的柠檬酸缓冲液（PH6.0）中煮沸15min ,自然冷却至室温。5.PBS 冲洗 3 次，每次 5min。6.阻断
3、：3%去离子水 37孵育 10min,以灭活内源性过氧化物酶活性。7.PBS 冲洗 3 次，每次 5min。8.滴加 1 抗（GFP 1：100 稀释, 4过夜）9.PBS 冲洗 3 次，每次 5min。10.滴加二步法免疫组化检测试剂的试剂 1，37孵育,20min, PBS 冲洗 3 次，每次 5min。11. 滴加二步法免疫组化检测试剂的试剂 2，37孵育,20min, PBS 冲洗 3 次，每次 5min。12.DAB 显色 5min。13.自来水冲洗 10min。14.苏木精复染 2min,盐酸酒精分化。15.自来水冲洗 10min。16.常规脱水，透明，封片，镜检。组织切片 HE
4、染色步骤1、将烘烤后的组织切片依次侵入二甲苯 1，二甲苯 II 进行脱蜡各10min。2、脱蜡后的组织切片依次浸入无水乙醇 I、无水乙醇 II、95%酒精、80%酒精、70%酒精中各 2 min，PBS 冲洗 2 次，每次 5min。3、苏木素染色 3 min, 自来水冲洗 3 min, 1 %盐酸酒精分色 2 s，自来水冲洗 2 min, 依次浸入 50 %、70 %、80 %的酒精中各 2 min,伊红浸泡 5 s，自来水冲洗 3min。4、 再将组织切片依次侵入 95 %酒精、无水乙醇 I、无水乙醇 II 中各 3min，最后再依次侵入二甲苯 I,二甲苯 II 各 5min。5.中性树胶封片，镜检。
