1、药品生产环境监控体系,全国医药技术市场协会（杭州）,沈菊平 201203,内容,洁净区环境监测 1，洁净区级别标准 2，洁净区的验证和监测 3，洁净区环境监测方案 4，环境监测仪器、设备、培养基 趋势分析和质量回顾 1，警戒限和纠偏限的设定 2，趋势分析 3，质量回顾 口服药品环境监测 环境监测结果超标案例分析 常见问题探讨,2,洁净区环境监测,3,1，洁净级别及标准,新版GMP（2010修订）和 EU -GMP、WHO-GMP 2010建议稿标准一致。,4,5,1，洁净级别及标准,微生物控制动态标准,2，洁净区验证和监测,悬浮粒子的要求：附录1 第九、十条 1、A级区确认时的采样量不少于1m
2、32、洁净区的动态监测 悬浮粒子的动态监测 关键操作的全过程，对A级区进行粒子监测 A级区的监测频率、取样量，及时发现人为干预、偶发事件及任何系统的破坏 B级区：类似于A级区，采样频率、采样量可以调整 C级区：质量风险管理原则确定 D级区：一般不作要求，（法规：必要时） 对于C/D级区的自净时间应达到规定要求,6,2，洁净区验证和监测,取样量和取样点 ISO14644-1 B.4.2 节有明确的采样量的计算公式： 采样量（升）=(20/级别中最大粒子限度）1000，显然对于A 级，采样量为(20/20)1000 = 1 米3从上式中可见，级别要求越低，取样量就越小取样点数由B.1.1公式：取样
3、点数 , A为洁净区面积，例如10米5米的区域，取样点应为8（取整数）取样点均匀分布，位于工作面高度,注意：这里仅指在洁区划分时加以采用,7,取样点的确定-GB,洁净区（室）空气悬浮粒子、浮游菌及沉降菌的最少取样点数,来源： GB/T 16292-16294，2010,8,微生物的要求：附录1 第十一条 监测方法有： 1，空气浮游菌监测 沉降菌法-被动法 定量空气浮游菌采样法-主动法2，环境表面监测 表面取样法（如棉签擦拭法和接触碟法）3，人员监测 表面取样法（接触碟法）,9,2，洁净区的验证和监测,1，空气浮游菌监测 沉降菌法-被动法 沉降碟在空气中的暴露时间4小时 监控整个灌装过程 只能给
4、出定性和半定量的数据 应结合空气浮游菌的数据，对沉降碟的结果进行评价定量空气浮游菌采样法-主动法 撞击式，离心式和膜过滤（明胶）取样仪 应取一定体积的空气（取样体积应有代表性） 仪器应经过校验,10,2，洁净区的验证和监测,2，环境表面监测：表面取样法 应对接触产品表面、设备、地面、墙面等定期监测 接触蝶法：适用于平整表面取样面积25cm2 培养基略有凸起，高于碟子边缘，便于取样 培养基中应含有中和剂/保护剂棉签擦拭法：适用于不规则表面取样面积25cm2 定性或定量表面样应在无菌操作结束时取以最大限度地降低无菌制造过程中关键表面污染的风险,11,2，洁净区的验证和监测,2，洁净区的验证和监测,
5、3，人员监测 表面取样法（接触碟法），取样时间一般为： 工作结束，离开洁净区前取样 处理异常情况后（取样后重新更衣或更换手套） 生产过程中随时监测 特别注意： 不得在刚消毒过后取样,12,2，洁净区验证和监测,每个手套(5只手指),胸口处,衣帽结合处,帽兜额头处,靴子与工作裤接口处,前臂,13,无菌区人员更衣确认和监测,其它事项 每个受训者必须经过3次更衣试验确认合格后才能进入无菌操作区。 资格确认合格的操作员工每年需重复一次更衣试验。 当有已确认合格的人员有违反更衣程序趋向时，须重复l3次更衣试验。 连续3次监测不合格人员，取消相关资质，需重新培训和进行更衣验证。 在连续10次监测中，如有4
6、次不合格的人员，取消相关资质，需重新培训和进行更衣验证。,无菌区人员监测合格标准,14,2，洁净区验证和监测,3，环境监测方案,洁净区应制定系统的环境监测方案，包括动态监测和静态监测。 关键项目：悬浮粒子、浮游菌、沉降菌、表面微生物。 取样计划的影响因素：产品类型、生产过程、设施/工艺设计、生产密度、人为干扰、环境监测历史数据等。 取样点的选择主要取决于洁净室的设计和生产要求。 环境监测计划案例。 环境监测动态标准。,15,环境监测方案,环境监控整体要求,洁 净 区 监 测,年度洁净级别确认,日常环境监测,16,洁净区年度级别确认,测试项目,空气洁净度测试 静压差测试风速或风量测试 换气次数
7、温度 相对湿度 照度 噪声,17,参考：USP341116 从表中可以看出，美国药典中没有明确B级，但有100级、1 万级、10万级甚至更低级别，划分比较灵活，按需要而定。,美国药典微生物监测频率,18,环境监测方案,环境监测案例,19,环境监测案例,20,环境监测案例,21,洁净区监测的位置,取样位置选择时考虑因素： 哪些部位的微生物污染最可能对产品质量造成不良影响？ 在生产过程中，什么地点最容易长菌？ 哪些地方是清洁、消毒或灭菌时最难覆盖/接触或最难奏效的部位？ 什么活动会导致污染的扩散？ 在某一部位的取样操作，足以导致测试数据的差错或污染产品？取样只应在生产结尾换班时进行吗？,22,洁净
8、区监测的位置,应符合“GB16292-2010” “GB16294-2010”的要求 基于风险的设计 监测点设置在潜在风险最大的位置 药品 容器 连接处 人流和物流经过的地方 监测点靠近“工作高度”,23,注：GB1629216294，分别是洁净区悬浮微粒子、浮游菌、沉降菌的监测。,洁净区监测的位置,24,示例,洁净区监测的位置,示例：无菌灌装线 取样点应在产品或组件暴露的区域周围取样，如： 在灌装针头处 将产品装载入冻干腔室处 胶塞供料桶 无菌部件进行连接操作的部位 操作人员频繁活动处（不影响生产过程） 注意：靠近产品，但不接触产品的位置,25,粒子在线监测布置图例,26,1,2,3,传感器
9、低于机器，采样管伸入灌装操作区内,粒子在线监测布置图例,灌装后冻干前监测点位置：药瓶是半封闭状态（敞口）保证灌装后，冻干前的环境区域是受控的。正确的取样点位置：靠近传送带。,27,浮游菌、沉降菌取样点,沉降菌、浮游菌：监控点位置，高度一般为离地80cm左右，或操作台面。浮游菌、沉降菌监控点的设置根据生产工艺及污染风险综合考虑。,28,洁净区表面微生物取样点,C级区取样点：一般为地面、墙面及操作人员十指手套。对C级下的局部A级区取样宜在生产结束后进行，避免造成污染。,地面取样,墙面取样,灌装机（A级）,产品转移（A级）,29,洁净区表面微生物取样点,B级区接触碟取样位置应能及时发现潜在污染风险，
10、在受污染可能性较高的位置布点。,无菌分装设备门,进出B级区门把手,仪器、设备操作键、触摸屏等,传递窗门把手,30,-31-,文件记录中应包括：,监测时间和日期 测试方法的参考依据 测试点的活动情况 设备标识 位置 卫生级别 标有取样点的区域图,取样点 测试结果 评估人员 结果读取日期 警戒/纠偏限度 培养温度和培养时间,文件和记录,31,-32-,文件记录中应包括:,培养基有关信息 污染菌鉴别结果 复核人 数据报告 历史数据回顾 变更控制系统 设备校验日期,各限度的确定原理与具体分析 调查/纠偏措施的文件记录,文件和记录,32,4，环境监测常用仪器/设备/培养基,33,沉降菌/浮游菌 直径：9
11、0mm,浮游菌监测AirIDEAL 3P100升/分,悬浮粒子监测 PMSLasair 28.3升/分,表面微生物监测 直径：55mm,2500 模块化控制器,Modbus TCP/IP,真空泵,Airnet 510,4-20MA信号,HUB,6180XIO 欧陆显示器,工作站,粒子在线监测仪,34,可以增加浮游菌采样,空气悬浮粒子连续监测系统的要求：欧盟GMP附录1、中国GMP（2010）附录1在确认级别时，应使用采样管较短的便携式尘埃粒子计数器，避免5.0m悬浮粒子在远程采样系统的长采样管中沉降 。在单向流系统中，应当采用等动力学取样头。欧盟GMP附录1使用远程采样系统时，必须根据粒子在管
12、路中的损失来考虑管长和管子的弯曲半径PIC/S PI 032-2 - 强调5.0m悬浮粒子在远程采样系统的长采样管中沉降效应,粒子在线监测注意点,35,适用于圆弧表面取样,外盖带锁扣,36,表面带有锁扣，可以避免因取样结束后平皿意外跌落等麻烦,具有一定 的韧性，可以进行适当弯曲，适合不规则表面或圆弧取样,预制培养基,特殊预制平板,使用前,擦拭后,37,预制培养基,无菌擦拭棒,SCD培养基,颈部,保护套,拭子,使用方法：1、拔除下端保护套，取出拭子用 无菌液体润湿 2、擦拭取样表面（一般为25cm2）3、取样结束后将拭子放回保护套4、将擦拭棒颈部掰断，上端SCD 培养基流入保护套中并浸没拭子5、
13、将整个擦拭棒放入培养箱培养,SCD培养基,无菌试验预制培养基一般TGC配制后会有氧化层，中国药典规定在无菌试验前其氧化层高度不得高于培养基高度的1/5，培养结束后其氧化层高度不得高于培养基高度的1/3。 图中TGC培养基瓶中充入保护性气体（抗氧化），有利于试验结果的判断。,38,预制培养基,预制培养平板包装,无菌区使用预制平板：一般采用三层包装形式：,55mm接触平板,90mm预制平板,39,预制平板进入洁净区,预制平板进入无菌区，须避免对监控区域的污染。,去除最外层包装,放入传递窗,40,预制平板脱包装,经传递窗进入洁净区的预制培养平板继续脱去外面两层包装就可以使用。,脱出第二层包装,脱出第
14、三层包装,脱包装后单个平板,41,自制平板传输,包装形式 不锈钢密保容器 外套密封塑料袋传输 消毒脱除外袋 容器消毒后输入,42,预制平板使用示意图,接触碟表面取样示意图：,1，取样点采样,2，取样位置消毒,3，用无尘布清洁,4，标明取样点编号,5，平板入无菌保管袋,6，保管袋密封待培养,43,预制平板使用示意图,浮游菌监测示意图：,使用前喷酒精进行消毒，开启至少5分钟,消毒完成，放入90mm平板,装上无菌采样托盘,设置采样量，启动采样,采样完成取出平板（有明显凹坑）盖上培养皿盖，装入无菌保管袋待培养,未经采样空白平板,44,趋势分析和质量回顾1，警戒限和纠偏限的设定2，趋势分析3，质量回顾,
15、45,1，警戒限和纠偏限的设定,应设定在法定标准值以下。 警戒限根据验证数据根据历史监测数据并进行趋势分析后制定 纠偏限参考GMP和药典等法规要求根据历史监测数据并进行趋势分析后制定,46,警戒限和纠偏限的设定,设定的基准值不只是用来判定合格与否，而是用于过程控制的设定值。若监测结果显示超过基准值，根据各个基准值的定义采取相应的处理措施。关键项目应年度趋势分析，根据趋势分析的结果制定警戒限和纠偏限。GMP 第一百零一条 应当按照操作规程对纯化水、注射用水管道进行清洗消毒，并有相关记录。发现制药用水微生物污染达到警戒限度、纠偏限度时应当按照操作规程处理。,47,48,法定标准,运行设定标准,运行
16、通常值管理,设计目标,警戒限和纠偏限的设定,设定示例,49,设定示例,50,2，趋势分析,GMP要求第二百二十一条 质量控制实验室的文件应当符合第八章的原则，并符合下列要求： （三）宜采用便于趋势分析的方法保存某些数据（如检验数据、环境监测数据、制药用水的微生物监测数据）； ICH-Q10、EU GMP、PIC/S也有类似要求数据处理-趋势分析 确定分析目标 用警戒/纠偏值来确定监测数据 确认现行的警戒/纠偏限度及标准是否恰当 采取的“纠偏措施” 定期报告来更新管理。 年度报告中包括数据的总结和对纠偏限度的回顾,51,3，质量回顾,GMP要求，第十章 第八节产品质量回顾分析第二百六十六条 应当
17、按照操作规程，每年对所有生产的药品按品种进行产品质量回顾分析，以确认工艺稳定可靠，以及原辅料、成品现行质量标准的适用性，及时发现不良趋势，确定产品及工艺改进的方向。应当考虑以往回顾分析的历史数据，还应当对产品质量回顾分析的有效性进行自检。企业至少应当对下列情形进行回顾分析：（十一）相关设备和设施，如空调净化系统、水系统、压缩空气等的确认状态；,52,质量回顾示例,PW 系统电导率、不挥发物、微生物限度WFI 系统pH值、电导率、总有机碳、不挥发物、微生物限度,53,注射用水-微生物注射用水微生物限度的质量标准为10CFU/100ml，日常监控结果均小于5CFU/100ml，低于警戒限，平均值为
18、0.1 CFU/100ml，远低于标准限度，并且趋势较平稳。,纠偏限,警戒限,质量回顾示例,54,注射用水-总有机碳 ， WFI系统年度质量回顾报告WFI总有机碳的质量标准为0.50mg/l，日常监控结果均小于0.20mg/l，在通常值管理范围内，平均值为0.04 mg/l，远低于标准限度，并且趋势平稳。结论：通过对WFI系统的多项质量指标回顾分析，系统运行稳定，设定的管理标准合理。,质量回顾示例,通常值,55,三、针对口服制剂的环境监测,法规要求：第四十八条口服液体和固体制剂、腔道用药（含直肠用药）、表皮外用药品等非无菌制剂生产的暴露工序区域及其直接接触药品的包装材料最终处理的暴露工序区域，
19、应当参照“无菌药品”附录中D级洁净区的要求设置，企业可根据产品的标准和特性对该区域采取适当的微生物监控措施。,56,因此，口服制剂的环境监测项目和标准可以参考无菌药品的D级区,针对口服制剂的环境监测,生产口服制剂，生产车间洁净度为D级，微生物检验室为万级，局部百级。1、2010版GMP要求口服固体制剂洁净级别参照无菌制剂D级，那么沉降菌按照动态检测的沉降时间就得是4个小时；但是在GB/T16294-2010中也明确了静态测试可以30分钟，到底D级区依照哪个为准，因为沉降时间的不同，合格标准也不一样。 2、2010版GMP要求洁净度为A级的浮游菌、尘埃粒子采样量必须1立方米，但是在GB/T162
20、93-2010中明确规定了最小采样量。那么我们公司为D级，采样量是否也是1立方米？3、D级洁净区浮游菌和沉降菌是否也必须是动态测试？ 如果做了浮游菌，沉降菌是否可以不做？4、如果动态测试，在口服固体制剂总混车间，也就是产尘量大的房间，尘埃粒子测试肯定超标，又如何解释GMP条款？ 5、D级洁净区有很多房间，比如总混、干压、制粒、配料、中间品、中间站、洁具清洗间、更衣室、缓冲室、走廊、物料暂存间一二十个房间，是否每次必须都得做沉降菌和浮游菌、尘埃粒子检查，有没有国家硬性的标准？因为如果一个月检查一次，势必会造成很大的工作量，对于医药企业增加了很大成本啊。有的人说检测频率需要验证保证公司环境符合要求
21、可以适当降低频率，在验证之前有没有最低检测频率？主要操作间和走廊、缓冲间等检测频率可以不一样吗？以上检测项目的检测频率在新版GMP是否有一个明确的最低检测频率可供参考？,57,四，环境监测结果超标案例,悬浮粒子在线监测超标分析,58,五、常见问题探讨,1，HVAC系统运行问题 无菌药品，附录1 第三十八条 无菌药品生产的洁净区空气净化系统应当保持连续运行，维持相应的洁净度级别。因故停机再次开启空气净化系统，应当进行必要的测试以确认仍能达到规定的洁净度级别要求。非无菌药品 最好是设置风机调速度装置，保持运行，将D级的换气次数（约15-20）下降到5次/时，以节约能耗； 如果长期停产，关闭HVAC
22、系统，需在正式开始生产前做房间洁净度确认； 如果每天开关是不妥的，需要做很多的确认工作。,59,常见问题探讨,2，洁净区消毒、熏蒸及其周期问题 第四十三条 应当按照操作规程对洁净区进行清洁和消毒。一般情况下，所采用消毒剂的种类应当多于一种。不得用紫外线消毒替代化学消毒。 第四十五条 必要时，可采用熏蒸的方法降低洁净区内卫生死角的微生物污染，应当验证熏蒸剂的残留水平。 消毒、熏蒸周期：如何制定和确认？ 确定环境清洁、消毒/熏蒸方法并经环境监测结果来确认,60,新版GMP认证案例分析,注射剂企业根据新版GMP实施认证： 前二批有15家企业，其中至少有1家问题很大，其检查发现的缺陷有14项，全部是软
23、件方面的缺陷；-典型 现场检查缺陷：4项为主要缺陷、10项为一般缺陷； LVP 的A级悬浮粒子、微生物没有动态监测； 工艺验证没有动态监测数据； 监测点的设置没有位置平面图，缺乏制定依据； 在相关的趋势分析/质量回顾中，没有制定警戒限、行动限； 企业递交整改报告 综合评价： 企业不具备产品趋势分析、质量评价、风险管理的能力； 灭菌偏差没有进行有效处理和评价； 无法评估产品质量风险； 结论： ? ?,61,参考文献,中国GMP（2010版）及其附录 新版GMP无菌药品指南 EU GMP（2008） PDA TR13,62,问题探讨 Q&A联系方式： E-mail: Tel: 0518-86095236,63,64,Thanks!,
