1、 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准GB 5009.140xxxx2010-发布 1.1.1.1 2010-06-01 实施中 华 人 民 共 和 国 卫 生 部 发 布xxxx-xx-xx 发布 xxxx-xx-xx 实施食品安全国家标准食品中乙酰磺胺酸钾的测定（征求意见稿）GB 5009.140201x0前 言本标准代替 GB/T 5009.140-2003饮料中乙酰磺胺酸钾的测定 。本标准与 GB/T 5009.140-2003 相比，主要变化如下： 标准名称修改为“食品安全国家标准 食品中乙酰磺胺酸钾的测定” ；修改并完善了样品前处理方法；扩大了方法的适用范围；增加了方法的检出
2、限和定量限；删除了糖精钠测定的相关内容。GB 5009.140201x1食品安全国家标准食品中乙酰磺胺酸钾的测定1 范围本标准规定了饮料、果冻、胶基糖果、白酒、风味发酵乳、乳基甜品罐头、冷冻饮品、糖果、调味品、酱油和餐桌调味料等食品中乙酰磺胺酸钾的测定方法。本标准适用于饮料、果冻、胶基糖果、白酒、风味发酵乳、乳基甜品罐头、冷冻饮品、糖果、调味品、酱油和餐桌调味料等食品中乙酰磺胺酸钾的测定。2 原理根据乙酰磺胺酸钾易溶于水的特点，试样经适当前处理，用水定容后经微孔滤膜过滤后，高效液相色谱分离，紫外检测器或二极管阵列检测器检测，根据保留时间定性，外标法定量。3 试剂和材料除非另有说明，本方法所用试
3、剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的实验室一级水。3.1 试剂3.1.1 甲醇（CH 4O）：色谱纯。3.1.2 乙腈（C 2H3N）：色谱纯。3.1.3 亚铁氰化钾（K 4Fe(CN)63H2O）。3.1.4 乙酸锌（Zn(C 2H3O2)22H2O）。3.1.5 盐酸（HCl）。3.1.6 氢氧化钠（NaOH）。3.1.7 硫酸（H 2SO4）。3.1.8 硫酸铵（(NH 4)2SO4）：优级纯。3.1.9 冰乙酸（C 2H4O2）。3.2 试剂配制3.2.1 亚铁氰化钾溶液（92 g/L）：称取亚铁氰化钾 106 g，加水溶解至 1000 mL。3.2.2 乙酸锌溶液（183
4、g/L）：称取乙酸锌 219 g，量取冰乙酸 32 mL，加水溶解至 1000 mL。3.2.3 盐酸溶液（0.25 mol/L）：量取盐酸 22.5 mL，溶于 1000 mL 水中。3.2.4 氢氧化钠溶液（2.5 mol/L）：称取氢氧化钠 100 g，加水溶解至 1000 mL。3.2.5 硫酸溶液（10 %）：量取硫酸 10 mL，缓慢加至 90 mL 水中，混匀。3.2.6 硫酸铵溶液（0.02 mol/L）：称取硫酸铵 2.64 g，溶解于 1000 mL 水中，用硫酸溶液调节溶液的 pH 值至 3.500.05。3.2.7 甲醇-乙腈-硫酸铵溶液（5+10+85）：将甲醇、乙腈
5、和硫酸铵溶液（0.02 mol/L）按 5+10+85 的体积比混合均匀。3.3 标准品乙酰磺胺酸钾标准品（C 4H4KNO4S，CAS 号 55589-62-3）： 纯度99%。3.4 标准溶液配制GB 5009.140201x23.4.1 乙酰磺胺酸钾标准储备液（1000 mg/L）：准确称取 0.1 g（精确至 0.0001 g）乙酰磺胺酸钾标准品于 100 mL 容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，混匀。置于 0 4 保存，有效期为 2 个月。3.4.2 标准中间液（100 mg/L）：吸取乙酰磺胺酸钾标准储备液 10 mL 于 100 mL 容量瓶中，用水稀释并定容至刻度，混匀。置于 0
6、 4 保存，有效期为 2 个月。3.4.3 标准工作液（1.00 mg/L）：吸取乙酰磺胺酸钾标准中间液 1 mL 于 100 mL 容量瓶中，用水稀释并定容至刻度，混匀。置于 0 4 保存，有效期为 2 个月。3.4.4 标准系列工作液： 分别吸取 乙酰磺胺酸钾标准工作液（1.00mg/L）2 mL、乙酰磺胺酸钾标准中间液（100 mg/L）0.1 mL、0.5 mL 、1 mL 、2.5 mL、5 mL 和 10 mL 于 10 mL 容量瓶中，用水稀释并定容，配制成乙酰磺胺酸钾浓度分别为 0.2 mg/L、1.0 mg/L、5.0 mg/L 、10 mg/L、25 mg/L、50 mg/
7、L和 100 mg/L 的标准系列工作液，临用时配制。3.5 材料3.5.1 中性氧化铝：粒径 0.075 mm0.125mm 之间。3.5.2 氧化铝层析柱：在 10 mL 注射器筒内下铺一层脱脂棉，装填中性氧化铝至 5 mL 刻度线。3.5.3 水相微孔滤膜：0.45 m。注：氧化铝层析柱可采用商品化的中性氧化铝固相萃取柱（10 mL，500mg）代替。4 仪器和设备4.1 高效液相色谱仪：具紫外检测器或二极管阵列检测器。4.2 电子天平：感量分别为 0.1 mg 和 1 mg。4.3 离心机：转速 10000 r/min。4.4 食物粉碎机。4.5 涡旋振荡器。4.6 恒温水浴锅。4.7
8、 超声波发生器：700W。4.8 pH 计。4.9 标准筛：筛孔尺寸为 1.40 mm。5 分析步骤5.1 试样制备 5.1.1 糖果、调味品、胶基糖果、餐桌调味料、熟制坚果与籽类 糖果、调味品和熟制坚果与籽类等磨碎，颗粒度不大于 0.425 mm；胶基糖果用刀切碎后过标准筛；试样处理后储于洁净的塑料瓶中，并标明标记，于室温下或按样品标示的保存条件下保存备用。5.1.2 果冻、冷冻饮品、八宝粥罐头果冻、冷冻饮品等用食物粉碎机制成匀浆，储于洁净的塑料瓶中，并标明标记，于-16 -18 保存备用。5.1.3 饮料、白酒、风味发酵乳、乳基甜品罐头、酱油GB 5009.140201x3按样品保存条件保
9、存备用，使用前摇匀。含气试样使用前将带有包装的试样于 50 水浴微温除气。5.2 试样提取5.2.1 饮料5.2.1.1 碳酸饮料称取约 10 g（精确至 1 mg）试样于 50 mL 离心管中，将试样加至中性氧化铝层析柱中，用 50 mL容量瓶收集流出液，待液体流至接近柱表面时，用 5 mL 甲醇-乙腈-硫酸铵溶液（5+10+85）分两次洗涤离心管，将洗涤液加至层析柱中，收集流出液，继续用甲醇-乙腈- 硫酸铵溶液（5+10+85 ）洗脱，收集洗脱液至 50 mL 刻度，混匀后经 0.45 m 的水相微孔滤膜过滤，滤液作为试样溶液，待进行液相色谱测定。5.2.1.2 不含蛋白质的饮料5.2.1
10、.2.1 澄清的饮料试样：称取 5 g10 g（精确至 1 mg）试样于 50 mL 离心管中，按 5.2.1.1 操作。5.2.1.2.2 浑浊饮料试样：称取 5 g10 g（精确至 1 mg）试样于 50 mL 离心管中，于 10000 r/min 离心 5 min 后，取上清液加至中性氧化铝层析柱中，沉淀用 5 mL 水涡旋 1 min，10000 r/min 离心 5 min后，取上清液加至中性氧化铝层析柱中，按 5.2.1.1 操作。5.2.1.2.3 固体饮料试样：称取 5 g10 g（精确至 1 mg）试样，用水溶解，定容至 50 mL，准确移取冲调后的饮料 10 mL 加至中性
11、氧化铝层析柱中，按 5.2.1.1 操作。5.2.1.3 含蛋白质的饮料称取 5 g（精确至 1 mg）试样于 50 mL 离心管，加水至 18 mL，加亚铁氰化钾溶液（92 g/L）1 mL，涡旋混匀 0.5 min，再加入乙酸锌溶液（183 g/L） 1 mL，涡旋混匀 0.5 min，5000 r/min 离心 5 min 后，上清液转移至 50 mL 容量瓶，沉淀加入 10 mL 水涡旋 1 min 后，于 5000 r/min 离心 5 min，上清液转移至同一容量瓶中，将沉淀洗涤三次，合并上清液，用水定容至刻度，混匀，经 0.45 m 的水相微孔滤膜过滤，滤液作为试样溶液，待进行液
12、相色谱测定。5.2.2 果冻称取 2.5 g（精确至 1 mg）试样于 50 mL 离心管，加入盐酸溶液（0.25 mol/L）20 mL，涡旋 2 min后 10000 r/min 离心 5 min，上清液转移至 100 mL 烧杯中，沉淀用 20 mL 盐酸溶液涡旋 2 min 后10000 r/min 离心 5 min，合并两次上清液，用氢氧化钠溶液（2.5 mol/L） 调节 pH 值至中性，移入 50 mL 容量瓶中，用水定容至刻度，混匀，经 0.45 m 的水相微孔滤膜过滤，滤液作为试样溶液，待进行液相色谱测定。5.2.3 胶基糖果称取 3 g（精确至 1 mg）试样于 100 m
13、L 烧杯中，加水 50 mL 加热至微沸后，边加热边用玻璃棒搅拌 5 min，冷却后将上清液移入 200 mL 容量瓶中，重复提取三次，合并提取液，用水定容至刻度，混匀，经 0.45 m 的水相微孔滤膜过滤，滤液作为试样溶液，待进行液相色谱测定。5.2.4 白酒称取 10 g（精确至 1 mg）试样于 50 mL 离心管中，于沸水浴上蒸干，加入 15 mL 水，超声 5 min，溶液转移至 50 mL 容量瓶中，分别用 15mL 水再重复提取两次，合并提取液，用水定容至刻度，经 0.45 m 的微孔滤膜过滤，滤液作为试样溶液，待进行液相色谱测定。5.2.5 风味发酵乳、乳基甜品罐头、冷冻饮品、
14、糖果、调味品和酱油同5.2.1.3。GB 5009.140201x45.2.6 餐桌甜味料同 5.2.1.2 中的固体饮料的操作。5.2.6 熟制坚果与籽类、八宝粥罐头称取 5 g（精确至 1 mg）试样于 50 mL 离心管中，加入 50 mL 水，超声 30min，于 5000 r/min 离心 5 min，上清液转移至 100 mL 容量瓶，沉淀加入 15 mL 水，涡旋 1 min，超声 10min，于 5000 r/min离心 5 min，上清液转移至同一容量瓶中，将沉淀超声离心三次，合并上清液，用水定容至刻度，混匀，经 0.45 m 的水相微孔滤膜过滤，滤液作为试样溶液，待进行液相
15、色谱测定。5.3 测定 5.3.1 液相色谱参考条件5.3.1.1 色谱柱： C18 柱（柱长 250 mm、内径 4.6 mm、粒径 5 m），或性能相当的色谱柱。5.3.1.2 流动相：A 相为甲醇， B 相为乙腈，C 相为硫酸铵溶液（0.02 mol/L）。梯度洗脱，梯度洗脱程序见表 1。表 1 流动相梯度洗脱程序时间（ min）A 相（%）B 相（%）C 相（%）0 5 10 856 5 10 8510 15 15 7021 15 15 7025 5 10 8530 5 10 855.3.1.3 流速：1.0 mL/min。5.3.1.4 柱温：35 。5.3.1.5 检测波长：227
16、 nm。5.3.1.6 进样量：10 L 。5.3.2 标准曲线的制作将 10 L 标准系列工作液按浓度由低到高依次注入高效液相色谱仪中，测定相应的峰面积，以标准工作液的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。标准溶液的液相色谱图参见附录 A图 A.1。5.3.3 试样溶液的测定将 10 L 试样溶液注入高效液相色谱仪中，以保留时间定性，测得峰面积，根据标准曲线得到试样溶液中乙酰磺胺酸钾的浓度。6 分析结果的表述试样中乙酰磺胺酸钾的含量按式（1）计算： VX =m （1）式中：X试样中乙酰磺胺酸钾的含量，单位为克每千克（ g/kg）；GB 5009.140201x5试样溶液中乙酰磺胺酸钾
17、的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；V试样提取液的定容体积，单位为升（L）；m试样的取样量，单位为克（ g）。计算结果保留三位有效数字。7 重复性在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10%。8 其他本标准方法测定食品中乙酰磺胺酸钾的检出限和定量限见表 2。表 2 食品中乙酰磺胺酸钾的检出限和定量食品种类 检出限（mg/kg ）定量限（mg/kg ）饮料（除固体饮料和含乳饮料）0.33 1固体饮料 3.3 10含乳饮料 0.67 2胶基糖果 4.5 13果冻 1.3 4白酒 0.16 0.5GB 5009.140201x6附录 A乙酰磺胺酸钾标准溶液的液相色谱图乙酰磺胺酸钾标准溶液的液相色谱图见 A.1。图 A.1 乙酰磺胺酸钾标准溶液（10 mg/L ）的液相色谱图
