1、单细胞测序技术,王董 2015/10/8,自然-方法（Nature Methods）杂志在每年年底都会对过去一年中推动生物学发展的技术方法做出回顾与总结，由此评选出当年最受瞩目、影响力最大的技术，2013年，单细胞测序技术（single-cell sequencing）荣膺该杂志年度技术称号。,什么是单细胞测序,单细胞测序技术是能够在单个细胞的水平上， 对基因组进行高通量测序分析的一项新技术。,单细胞测序的重要性,高通量测序需要从大量细胞中获取足够的 DNA 样品，因此测序结果是这些细胞“整体” 的一个表征。 与传统高通量测序相比，单细胞测序不仅能够分析相同表型细胞的遗传信息异质性（heter
2、ogeneity）， 还能获取难以培养微生物的遗传信息，具有广阔的应用前景。,高通量测序,高通量测序技术（High-throughput sequencing）又称“下一代”测序技术（“Next-generation“ sequencing technology），以能一次并行对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定和一般读长较短等为标志。,单细胞测序的流程,单细胞分离 细胞溶解与基因组 DNA 获取 全基因组扩增测序与数据分析,单细胞的分离,连续稀释法、 显微操作法、 激光捕获显微切割术 、 拉曼镊子技术、 荧光激活细胞分选术和微流控技术等,激光捕获显微切割术 在不破坏组织结构，保存要捕获的细胞和其周围组织形态完整的前提下，直接从冰冻或石蜡包埋组织切片中获取目标细胞 ，通常用于从组织中精确地分离一个单一的细胞。,细胞溶解与基因组 DNA 获取,物理法：超声、 冷冻、 研磨、 剪切、 高压和热破坏法)化学法：SDS、 TritonX-100 和极端 pH 酶降解法：蛋白酶 K 和溶菌酶,全基因组扩增,单个细胞中的总 DNA 一般仅有数匹克，无法满足现在测序技术对样品量的需求，因此需要全基因组扩增（whole genome amplification）,多位点置换扩增( MDA) 是目前最常用的全基因组扩增方法,
