1、国家生化工程技术研究中心（北京）地址：北京市海淀区中关村北二条 1 号中国科学院过程工程研究所西区 电话/传真：010- 82544957 邮编： 100190 网址： 电邮：Protein A 亲和介质（Protein A QZT 4FF）产品说明书1. 产品简介Protein A 能特异性地与抗体的 Fc 区结合，所以 Protein A 亲和介质可用于抗体（单抗和多抗）的分离纯化，经过一步亲和层析，即可从腹水、血清和培养液等样品中得到高纯度的抗体。Protein A QZT 4FF 亲和介质以自制的琼脂糖凝胶为基质，以重组 Protein A 为配基，具有很高的物理化学稳定性，配基不易脱
2、落，寿命长，使用方便，应用广泛。2. 产品特性参数 指标基质 4%交联琼脂糖凝胶配基 r-Protein A形状 球形介质平均粒径 90 m (45-165)配基密度 6mg Protein A/ml wet gel动态载量 45-50mg h-IgG/ml wet gel最高流速（25） 450 cm/h推荐流速 150 cm/h最高耐压 0.3 MPa (3 bar)pH 稳定性 310（长时间） ；211 （短时间） 保存 48 oC（20%乙醇）3. 使用方法Protein A QZT 4FF 广泛用于各种抗体的分离纯化。层析操作通常包括装柱、平衡、进料、淋洗、洗脱、再生等步骤。平衡：
3、用 510CV 的平衡缓冲液（20 mM PB+0.15M NaCl，pH 7.0，添加适当浓度的 NaCl 抑制非特异性吸附）平衡层析柱，至流出液电导和 pH 不变（与平衡液一致） 。进料：样品缓冲液应尽可能与平衡液一致。固体样品可用平衡液溶解配制；低National Engineering Research Center for Biotechnology (Beijing)Add：No.1 Bei er tiao, Zhongguancun, Haidian District, Beijing, China Tel/Fax： 010- 82544957 Post code：100190
4、Web： E-mail：浓度样品溶液可用平衡液透析；高浓度样品溶液可用平衡液稀释。为了避免堵塞层析柱，样品应经离心或微滤（0.45m）处理。进料量根据介质的载量和料液中目标蛋白的含量计算。淋洗：上样完毕后继续用平衡缓冲液淋洗至基线。洗脱：用洗脱缓冲液（20 mM 柠檬酸，pH 3.0-4.0；或 0.1M 甘氨酸，pH 3.0；或 20 mM 乙酸钠，pH 3.0-4.0；具体洗脱条件与抗体的结合强度和稳定性密切相关，效果不好时应进行洗脱缓冲液（种类和 pH 或添加剂）的优化）洗脱，收集流出液。洗脱后，应立刻用碱性缓冲液（如 1M Tris/HCl, pH 9.0）将收集到的抗体溶液中和到抗体
5、稳定的 pH，避免抗体失活，维持抗体的生物活性。再生、原位清洗：介质使用数次（5-10 次，具体次数与原料的种类和来源及实验要求有关）后，需要对介质进行再生、在位清洗。（1）用 0.1M 的乙酸或 0.1M 的乙酸/20%乙醇淋洗柱子 3-5CV，然后用缓冲液洗到中性即可重复使用；（2）也可用 0.05M NaOH+1M NaCl 或 6M 盐酸胍淋洗柱子 3-5CV，并用 310 CV 的纯水冲洗，然后用缓冲液洗到中性即可重复使用。其它注意事项：在装柱、使用和保存柱子的时候，要避免柱子流干，气泡进入。4. 具体应用 1 载量分析：利用人免疫球蛋白（血浆来源，纯度 95%，3mg/ml）进行载
6、量分析（柱体积 2ml；Buffer A：20 mM PB+0.15M NaCl，pH 7.0，Buffer B：0.1M 甘氨酸，pH 3.0；流速： 0.5ml/min；上样量：40ml），层析谱图如图 1（A：进口介质；B：本中心介质）所示，结果表明两种介质的层析谱图（穿透行为、洗脱峰）基本一致，无明显差异。洗脱峰的蛋白浓度分析结果表明，二者的载量相似，均在 40-45mg h-IgG/ml 介质之间。2 纯化效果分析：利用小鼠腹水（Buffer A 稀释 4 倍）上样进行亲和层析，考察介质的分离纯化效果（柱体积 2ml；Buffer A ：20 mM PB+0.15M NaCl，pH
7、7.0，Buffer B ：20mM 柠檬酸，pH 3.0；流速：0.5ml/min；上样量：4ml） ，层析谱图如图 2 所示，纯度分析结果表明，经过一步国家生化工程技术研究中心（北京）地址：北京市海淀区中关村北二条 1 号中国科学院过程工程研究所西区 电话/传真：010- 82544957 邮编： 100190 网址： 电邮：亲和层析，即可得到纯度 95%以上的 IgG。图 1 h-IgG 在 Protein A 介质上的动态穿透曲线（ A：对照介质；B：本中心介质）图 2 Protein A 亲和层析谱图（小鼠腹水）5 特色服务（1）提供介质筛选及工艺开发的咨询。（2）接受客户委托开发各种分离介质和分离工艺。（3）按客户要求提供各种介质及相应规格的预装柱。（4）为客户提供专业的售前和售后服务。0306090120102030 Volume (l)UV280 (mAU) 0306090120102030 Volume (l)UV280 (mAU) 01530455010150 Volume (l)UV280 (mAU)
