1、2.2 动物细胞工程 2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体问境：能否采用类似“植物体细胞杂交技术”的方法，让不同种动物的体细胞进行杂交呢?1.动物细胞融合1、问：细胞融合概念、结果、过程、意义？2、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理 ，方法也 。3、动物细胞融合常用的诱导因素有 、 、 等。4、细胞融合技术已经成为研究细胞 、细胞 、肿瘤和生物 培育等的重要手段。2.单克隆抗体1、问：人们为了获得抗体，传统方法如何操作？传统方法有什么缺点？2、科学发现，哺乳动物感染 (如病毒、细菌等)后，体内会形成相应的 细胞。B 淋巴细胞能分泌 ，凝聚或杀死这些病原体。3、 （ ）动物体内产生的特异性
2、抗体种类可多达百万种以上，但是每一个 B 淋巴细胞只分泌少数几种特异性抗体。4、问：要想获得大量的单一抗体，你有何思考？5、 （ ）在体外培养条件下，一个 B 淋巴细胞是可以无限增殖的。6、如何克隆单一的 B 淋巴细胞，形成细胞群。？2.1 单克隆抗体的制备1、1975 年，英国科学家米尔斯坦和科勒在前人工作的基础上，继续探索和尝试，并且充分发挥想像力，设计了一个极富创造性的实验方案，你能想象出“这一方案吗”2、如何使小鼠的脾细胞产生“抗羊红细胞的抗体”B 淋巴细胞？3、如何将鼠的骨髓瘤细胞与脾细胞中产生的 B 淋巴细胞融合？融合的目的是什么？4、骨髓瘤细胞与 B 淋巴细胞融合后，你认为有几种
3、细胞？如何得到所要的目的细胞？5、由选择性培养得到的杂交瘤细胞，要成为“获得足够数量的能分泌所需抗体“的细胞，还须对杂交瘤细胞进行什么培养？什么检测？6、经”克隆化培养和抗体检测“的杂交瘤细胞进行怎样的培养，就产生大量的单克隆抗体？7、单克隆抗体制备的过程？8、杂交瘤细胞特点？9、单克隆抗体的优点？2.2 单克隆抗体的应用1、作为诊断试剂 单克隆抗体能准确地识别各种 物质的细微差异，并跟一定抗原发生结合。因此，单克隆抗体在诊断的应用上，具有准确、高效、简易、快速的优点。利用 的单克隆抗体，在特定的组织中成像的技术，可定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病。2、用于治疗疾病和运载药物 经特定抗原注射的小
4、鼠的效应 B 淋巴细胞小鼠的骨髓瘤细胞诱导融合杂交细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞选择克隆检测检测 单克隆抗体体内培养体外培养1、 （ ）单克隆抗体主要用于癌症治疗。2、 （ ）单克隆抗体药物只能单独使用。3、生物导弹是怎么回事？基本记忆1、细胞融合概念：是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。也称细胞杂交。2、细胞融合结果：融合后形成杂交细胞。 （具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞） 。3、细胞融合过程：含不同 DNA 的细胞 灭活的病毒、PEP 杂交细胞4、细胞融合意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能。5、要想获得大量的单一抗体，必须克隆单一的 B 淋巴细胞，形成细胞群。
5、6、将鼠的，骨髓瘤细胞与 B 淋巴细胞融合，形成“既能迅速大量繁殖，又能产生专一的抗体”杂种细胞。用特定的选择性培养基进行筛选培养，可以筛选出杂交瘤细胞。7、面对杂交瘤细胞，需进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选，就可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。8、将杂交瘤细胞在体外条件下做大规模培养，或注射到小鼠腹腔内增殖，这样，从细胞培养液或小鼠腹水中，就可以提取出大量的单克隆抗体了。9、单克隆抗体制备的过程10、杂交瘤细胞特点：既能迅速大量繁殖，又能产生专一的抗体。9、单克隆抗体的优点：特异性强、灵敏度高、产量大。动物细胞融合与植物体细胞杂交的异同比较项目 细胞融合的原理 细胞融合的方法 诱导手
6、段 用途植物体细胞杂交细胞膜的流动性 用纤维素酶、果胶酶去除细胞壁后诱导原生质体融合离心、电刺激、振动、聚乙二醇（PEG）诱导克服远源杂交不亲和，获得杂种植株动物细胞融合细胞膜的流动性 用胰蛋白酶使细胞分散后诱导细胞融合除应用植物细胞杂交手段外，还有用灭活病毒诱导制备单克隆抗体基础试题训练一、选择题1 （ ）单克隆抗体制备过程中使用的骨髓瘤细胞是一种缺陷型细胞，在含有次黄嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶的培养基（HAT）中无法生长；而小鼠脾细胞是正常细胞，在 HAT 培养基上可正常存活。用聚乙二醇诱导细胞融合后，经过数代培养，最终可在 HAT 培养基上存活并能产生单克隆抗体的细胞是 A骨髓瘤细胞之间形
7、成的融合细胞 B脾细胞之间形成的融合细胞C骨髓瘤细胞与脾细胞之间形成的融合细胞 D脾细胞2 （ ）(2006，广雅中学考题 )研究单克隆抗体治疗癌症的思路是A利用单克隆抗体特异性地对抗癌细胞 B以单克隆抗体作抗癌药物杀死癌细胞C抗癌物质在克隆细胞中大量合成 D单克隆抗体携带抗癌药物特异性地与癌细胞结合3 （ ） （2001，天津、山西理综卷）科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是A经过免疫的 B 淋巴细胞 B不经过免疫的 T 淋巴细胞C经过免疫的 T 淋巴细胞 D不经过免疫的 B 淋巴细胞4 （ ） （2004 年，全国）用动物细
8、胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验步骤中错误的是A将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的 B 淋巴细胞B用纤维素酶处理 B 淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞C用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的 B 淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合D筛选杂交资金积累细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体5 （ ）只能使动物细胞融合的常用诱导方法是 APEG B灭活的病毒 C电刺激 D离心6 （ ）单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的 A.B 淋巴细胞 BT 淋巴细胞 C骨髓瘤细胞 D杂交瘤细胞7 （ ）用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞 A
9、.容易产生各种变异 B具有更强的全能性 C.取材十分方便 D分裂增殖的能力强8.（ ）动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是 诱导融合的方法完全相同 所用的技术手段不相同 所采用的原理完全相同 都能形成杂种细胞A. B. C. D.9 （ ）动物细胞融合和植物原生质融合决定于 A.细胞膜的流动性 B细胞膜的选择透过性 C.细胞质的流动性 D细胞质酶的活性10.（ ）从母羊甲的体细胞中取出细胞核，注入到母羊乙去掉核的卵细胞中，融合后的细胞经卵裂形成早期胚胎，再植入到另一只母羊丙的子宫内，出生小羊的大多数性状A.难以预测 B.像甲 C.像乙 D.像丙11.（ ） “生物导弹” 是指 A.单
10、克隆抗体 B.杂交瘤细胞 C.产生特定抗体的 B 淋巴细胞 D. 在单抗上连接抗癌药物12.（ ）动物细胞工程技术的基础是 A.动物细胞融合 B.单克隆抗体 C.胚胎移植 D.动物细胞培养13 （ ）下列哪项属于克隆A将鸡的某个 DNA 片段整合到小鼠的 DNA 分子中 B将抗药菌的某基因引入草履虫的细胞内C将鼠骨髓瘤细胞与经过免疫的脾细胞融合成杂交瘤细胞 D将某肿瘤细胞在体外培养繁殖成一个细胞系14 （ ）单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和 B 淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞。在这种培养基上不能存活增殖的细胞是B 淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞B 淋巴细胞自身融合细胞 小鼠骨髓
11、瘤细胞自身融合细胞 杂交瘤细胞A B C D15 （ ） （2005 年，广东）关于单克隆抗体，下列叙述不正确的是A可以制成诊断盒用于疾病的诊断 B可以与药物结合，用于病变细胞的定向治疗C可以利用基因工程技术生产 D可以在生物体内生产，不能体外生产16.科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是A.经过免疫的 B 淋巴细胞 B.不经过免疫的 T 淋巴细胞 C.经过免疫的 T 淋巴细胞 D.不经过免疫的 B 淋巴细胞17.动物细胞融合的目的中最重要的是A.克服远源杂交不亲和 B.制备单克隆抗体 C.培育新物种 D.生产杂种细胞18.下列
12、有关动物细胞培养的叙述，不正确的是A.用于培养的细胞大都取自胚胎或幼龄动物的器官或组织B.将所取的组织先用胰蛋白酶等进行处理使其分散成单个细胞C.在培养瓶中要定期用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离，制成悬浮液D.动物细胞培养只能传 50 代左右，所培养的细胞就会衰老死亡19.能使动物细胞融合的特有的诱导因子是A.离心 B.灭活的病毒 C.电刺激 D.振动20 （ ） （多选）下列关于单克隆抗体的制备和应用的叙述中，正确的是AB 淋巴细胞与骨髓瘤细胞的融合，一般不需要灭活的仙台病毒或聚乙二醇诱导B融合后形成的杂交瘤细胞既能无限增殖，又能产生单克隆抗体C体外培养时，一个效应 B 淋巴细胞可以产生抗体，但
13、不能无限增殖D单克隆抗体与常规抗体相比，特异性强，灵敏度高，优越性明显21 （ ） （多选）1975 年米尔斯坦和柯勒成功地获得了单克隆抗体。下列细胞中与单克隆抗体的制备有关的是A.效应 B 细胞 BT 淋巴细胞 C.骨髓瘤细胞 D杂交瘤细胞二、非选择题1.下图是单克隆抗体制备过程示意图，据图回答：（1）图中 A 过程是从小鼠的脾脏中取得_细胞，该细胞能够产生_。从小鼠体内提取分离该细胞之前，应给小鼠注射_类物质。（2）B 过程是一个_ 过程，该过程的进行需要灭活的_或_的诱导。（3）单克隆抗体在疾病的诊断、治疗和预防方面，与常规抗体相比，其特点是 。31975 年科学家首次利用 B 淋巴细胞
14、杂交瘤技术制备出单克隆抗体。请观察下图，回答问题：（1）单克隆抗体是指 ，其特点是 。（2）1984 年以来，科学家针对如右图所示的单克隆抗体来自 ，应用于人体，会作为 产生 ，加速排斥反应，以及完整的抗体分子的相对分子质量过大，难以穿透肿瘤组织，达不到有效治疗的浓度等问题，制备出可用于肿瘤治疗的相对分子质量小的单克隆抗体。（3）制备单克隆抗体的 B 淋巴细胞一般从 （器官） 中采集。从下表看，用于筛选杂交瘤细胞的是特定的 培养基。 培养基特殊成分 主要作用次黄嘌呤 骨髓瘤细胞不能利用氨基蝶嘌呤 阻断 DNA 合成胸腺嘧啶核苷 脾细胞用于合成DNA（4）大量制备单克隆抗体的方法主要有两种：体外培养法，可获得 10g/mL 的抗体；动物体内诱生法可获得 520mg/mL 的抗体。你选择的方法及原因是 。
