1、水杨酸法测定黄酮对羟自由基清除能力的实验一、实验原理利用 Fenton 反应产生羟自由基：H2O2+Fe2+ =OH+H2O+Fe3+在反应体系中加入水杨酸，Fenton 反应生成的羟自由基与水杨酸反应，生成于 510 nm 处有特殊吸收的 2,3- 二羟基苯甲酸，反应式如下：如果向反应体系中加入具有清除羟自由基功能的被测物，就会减少生成的羟自由基，从而使有色化合物的生成量相应减少。采用固定反应时间法，在 510 nm 处测量含被测物反应液的吸光度，并与空白液比较，以测定被测物对羟自由基的清除作用。其清除率计算公式为：羟自由基清除率(%)=A0(AxAx0) /A0100其中 A0 为空白对照
2、的吸光值， Ax 为加样品的吸光值， Ax0 为不加显色剂 H2O2二、实验步骤各溶液的加入量按照表 1 所示，在比色管中依次先加入 9 mmol / L FeSO4， 9 mmol / L 乙醇 - 水杨酸，接着加入适量去离子水，最后加入 8.8 mmol / LH2O2 后摇匀，37水浴加热 15 min 后取出，测其吸光度 A0。A0 测定时，参比溶液为不加双氧水的体系。按上述方法，加入表 1 所示的各溶液，来测定吸光度 Ax、Ax0。Ax 和 Ax0 测定时，参比溶液为去离子水。三、试剂配制9 mmol / L 乙醇 - 水杨酸配法：称 1.243 g 水杨酸，乙醇溶解，定容至 100
3、 mL，然后稀释 10 倍；9 mmol / L 硫酸亚铁配法：称 2.502gFeSO47H2O，去离子水溶解，定容至 100 mL，然后稀释 10 倍。8.8 mmol/L H2O2 配法：称 9.926 g 30 % H2O2，去离子水定容至 100 mL，然后稀释 100 倍。4、实验结果样品体积/ml Ao Ax Axo 清除率（）1 0.876 0.846 0.096 14.382 0.900 0.765 0.154 32.113 0.903 0.718 0.241 47.185 0.885 0.683 0.326 59.667 0.846 0.661 0.507 81.809 0
4、.870 0.433 0.341 89.42510 0.800 0.481 0.400 89.50羟自由基清除率（水杨酸法）公式为：清除率 I=（Ao+Axo-Ax）/Ao x100样品（干花豆）为 0.1313g/60ml 水Vc 体积/ml Ao Ax Aox 清除率%1 0.877 0.784 0.024 13.342 0.897 0.781 0.022 15.303 0.897 0.747 0.020 18.905 0.899 0.672 0.018 27.337 0.900 0.547 0.016 41.009 0.887 0.489 0.014 46.4511 0.887 0.371 0.016 60.0013 0.900 0.331 0.014 64.26样品：0.0250gVC 加 500ml 娃哈哈纯净水。
