1、阿司匹林对血小板聚集和血栓的影响,验证阿司匹林抗血小板的聚集及抗血栓作用,熟悉血栓的形成因素,实验目的,血栓形成可导致急性心肌梗死、中风、肺栓塞等心、脑、肺循环疾病，是外科手术中常见的并发症，也是介入性血管形成术后再闭塞的重要因素,血小板活化在心脑血管疾病发病中占有重要地位, 抗血小板聚集药已作为常规治疗用于心脑血管疾病,研究背景,在正常的循环血液中, 血小板处于静息状态,而在某些生理或病理状态下, 血小板可以被激活。血小板激活是指血小板在刺激物(诱导剂) 作用下发生的各种改变, 如变形、粘附和聚集等, 其中血小板的活化聚集是血小板的重要改变形式。,TXA2,腺苷酸环化酶,cAMP,促进血小板
2、聚集,花生四烯酸,环氧化酶,PGG2,PGH2,PGF2,PGE2,还原酶,异构酶,前列环素合成酶,PGI2,血栓烷合成酶,阿司匹林,腺苷酸环化酶,cAMP,抑制血小板聚集,(-),(-),在活体的心脏和血管内，血液发生凝固或血液中某些有形成分凝集形成固体质块的过程，称为血栓形成，当心血管内皮细胞损伤后，内皮下胶原组织暴露，在炎症细胞产生的趋化、粘附及细胞因子作用下，血小板粘附在破裂处，粘附后血小板活化，释放血栓素A2（TXA2）、二磷酸腺苷（ADP）、凝血酶等，使血小板板聚集，并和凝血终产物纤维蛋白交联，最终导致血栓形成。在血栓形成过程中血小板起关键作用，TXA2是活化血小板的重要因素，通过
3、环氧化酶（COX）抑制剂匹林减少TXA2的合成，发挥抗血小板作用，从而发挥其抗血栓作用。,实验原理,36只健康家兔1.52.5Kg，雌雄不拘。,实验动物,主要试剂、药品和仪器,仪器： 哺乳类动物手术器械一套，兔固定台，动脉插管，细丝线，婴儿称，注射器（5ml,10ml各4支），离心管，离心机，兔灌胃器，722分光光度计。试剂和药品： 阿司匹林结晶（临用前以50mmolL NaCO溶解后再用0.1molL HCl 调节 pH 7.0），花生四烯酸(arachidonie acid，AA)，25%乌拉坦溶液，10mg/L肝素，生理盐水,实验方法与步骤,1：Asp对血栓形成的影响：家兔12只，禁食1
4、2小时，随机分成对照、Asp二组，每组6只。Asp以300mg/kg每隔30分钟连续灌胃给药3次，对照组用生理盐水等体积灌胃。第3次灌胃半小时后以 AA 75 mg/kg静脉注射，立即观察家兔的呼吸，活动状态并记录15分钟内家兔死亡数。,2：Asp对AA 激活的血小板聚集的影响： （1）健康家兔24只, 随机分成4组, 每组6只。A 组:生理盐水作为空白对照组; B-D组:10、50和300mg/kgASP组。 （2）给药前于颈总动脉取血1ml/1次, 然后按上述分组分别沿兔耳缘静脉给药后, 分别于30、60、120 和180 min取血。各时间点所取血液用3.5mg/mL肝素抗凝(血与抗凝剂
5、的体积比为9: 1),收集于塑料离心管中, 以900rmin离心9min, 取上层液即为富血小板血浆(PRP),剩余血液继以25000rmin离心10 min取上层液得贫血小板血浆(PPP)。,（3）比色：用722型分光光度计560mm波长比色，用PPP 300L 调零, 于比色管中加入PRP 300L,加入诱导剂:AA终浓度0.35 mmol/L，并记录300s内的最大吸光度值。,实验结果,阿司匹林抗血栓作用,阿司匹林对血小板聚集的影响,1、Asp对血栓形成的影响：对照组的家兔死亡率要明显高于Asp组。 2：Asp对AA 激活的血小板聚集的影响：对照组AA 激活的血小板聚集明显高于Asp组，且不同浓度的Asp均可抑制这种聚集作用。,预期结果,Thank You!,
