1、常见荧光素： （1）异硫氰酸荧光素 (fluorescein isothiocyanate, FITC) ：FITC 纯品为黄色或橙黄色结晶粉末，易溶于水和酒精溶剂。有两种异构体，其中异构体型在效率、稳定性与蛋白质结合力等方面都更优良。FITC 分子量为 389.4，最大吸收光波长为 490495nm，最大发射光波长为 520530nm，呈现明亮的黄绿色荧光。FITC 在冷暗干燥处可保存多年，是目前应用最广泛的荧光素。其主要优点是人眼对黄绿色较为敏感，通常切片标本中的绿色荧光少于红色。（2）四乙基罗丹明 (rhodamine, RB200) ：RB200 为橘红色粉末，不溶于水，易溶于酒精和丙
2、酮，性质稳定，可长期保存。最大吸收光波长为 570nm，最大发射光波长为 595600nm，呈现橘红色荧光。（3）四甲基异硫氰酸罗丹明 (tetramethyl rhodamine isothiocynate, TRITC)：TRITC为罗丹明的衍生物，呈紫红色粉末，较稳定。最大吸收光波长为 550nm，最大发射光波长为 620nm，呈现橙红色荧光，与 FITC的翠绿色荧光对比鲜明，可配合用于双重标记或对比染色。因其荧光淬灭慢，也可用于单独标记染色。（4）镧系：镧系螯合物某些 3价稀土镧系元素如铕（Eu3）、铽（Tb3）、铈（Ce3）等的螯合物经激发后也可发射特征性的荧光，其中以 Eu3 应用
3、最广。Eu3螯合物的激发光波长范围宽，发射光波长范围窄，荧光衰变时间长，最适合用于分辨荧光免疫测定。（5）藻红蛋白（P-phycoerythrin，PE）：PE 是在红藻中所发现的一种可进行光合作用的自然荧光色素，分子量为 240kD的蛋白，最大吸收峰为 564 nm，当使用 488 nm激光激发时其发射荧光峰值约为 576 nm，对于单激光器的流式细胞仪来说，推荐使用 58521nm的带通滤光片，双激光器的流式细胞仪推荐使用 57513nm的带通滤光片。FL2 探测器检测 PE。（6）多甲藻叶绿素蛋白 （peridinin chlorophyll protein，PerCP）：PerCP是在
4、甲藻和薄甲藻的光学合成器中发现的，是一种蛋白复合物，分子量约为35kD，最大激发波长的峰值在 490nm附近，当被 488nm氩离子激光激发后，发射光的峰值约为 677nm。FL3 探测器检测 PerCP。（7）碘化丙啶（ propidium iodide，PI）：可选择性地嵌入核酸（DNA、RNA）的双螺旋碱基对中。在对 DNA染色时，需用 RNase对细胞进行处理，以排除 RNA对 DNA荧光定量精度的影响。在 488nm波长激发下，PI 的发射光谱为 610-620nm。 FL2 探测器检测 PI。常见荧光素的特性：（1）FITC：黄色结晶粉末，吸收光：490495nm，发射光：5205
5、30nm，明亮的黄绿色荧光。（2）RB200：橘红色粉末, 吸收光 570nm，发射光 595600nm，橘红色荧光。（3）TRITC：紫红色粉末，吸收 550nm，发射光 620nm，橙红色荧光。（4）镧系：Eu、Tb（5）PE：吸收光 490560nm，发射光 595nm，红色荧光。（6）其它：酶作用后产生荧光物质。酶作用后产生荧光物质：酶 底物 产物 激发光 发射光B-G MUG MU 360 450AP MUP MU 360 450HRP HPA 二聚体 317 414酶作用后产生荧光的物质某些化合物本身无荧光效应，一旦经酶作用便形成具有强荧光的物质。例如，4-甲基伞酮-D 半乳糖苷受 -半乳糖苷酶的作用分解成 4-甲基伞酮，后者可发出荧光，激发光波长为 360nm，发射光波长为450nm。其他如碱性磷酸酶的底物 4-甲基伞酮磷酸盐和辣根过氧化物酶的底物对羟基苯乙酸等。镧系螯合物 某些 3价稀土镧系元素如铕 (Eu3+)、铽 (Tb3+) 等的螯合物可发射特征性的荧光，而且激发光波长范围宽、发射光波长范围窄、荧光衰变时间长，最适合于时间分辨荧光免疫测定。
