1、花中皇后月季又称“月月红”，自然花期5至11月,课题2 月季的花药培养,兴义八中 陈玉娇,植物的花药培养在育种上有什么意义？,缩短了育种周期，得到的都是纯种。为新品种的培育开辟了新途径。,药隔,花药,花粉囊,囊壁,花粉粒,2、花药的结构,小孢子四分体,单核,双核,被子植物花粉发育过程,小孢子母细胞花粉母细胞,小孢子,减数分裂,有丝分裂,花粉管细胞核,生殖细胞核,有分丝裂,2精子,1个,营养细胞,生殖细胞,4个,4个,4个,4个,4个,8个,（小孢子四分体时期,单核居中期,单核靠边期,花粉粒双核期）,被子植物花粉的发育过程,4个,4个,4个,产生花粉的两种途径,单倍体植株,注：花药离体培养得到的
2、植株不一定是单倍体。,不选择单核期之前花药原因：花药质地幼嫩，容易破碎； 不选择单核期之后花药原因：花瓣开始松动，给材料消毒带来困难困难； 挑选单核期花药方法：应当选择完全未开放的花蕾，菌少，易消毒。,（三）影响花药培养的因素,1、材料的选择：,2、培养基的组成：,3、其他因素：,激素种类和浓度配比,从花期看：从花粉看：从花蕾看：,月季的初花期,单核期,完全未开放的,花瓣松动后，微生物就可能侵入到花药，给材料的消毒带来困难。,为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？,（四）实验操作材料选取,2、通过镜检来确定是否处于适宜的发育期。方法1：醋酸洋红法(将染色体染成红色)方法2：焙花青-铬矾法(花粉
3、细胞核染成蓝黑色)。,花药（载玻片上）1%的醋酸洋红1滴用镊柄将花药捣碎，盖上盖玻片镜检（花粉粒的细胞核被染成红色）,花药（在卡诺氏固定液中处理20min）取出，置于载玻片上焙花青铬矾溶液染色盖上盖玻片镜检（花粉粒的细胞核被染成蓝黑色）,1、从花期看：月季的初花期从花粉看：单核期从花蕾看：完全未开放的,（二）材料的消毒,5、无菌水冲洗35次,1、花蕾用体积分数为70%的酒精浸泡30秒,2、无菌水清洗,3、无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分,4、放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中24分钟 （质量分数为1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液）,（三）接种和培养,1 灭菌后花蕾，要在 下除去萼片和花瓣，并立
4、即将花药接种到培养基上。,3 通常每瓶接种花药 ，温度控制在 左右， 。幼小植株形成后才 。,2 在剥离花药时，要尽量 （否则接种后，容易从受伤部位产生二倍体的愈伤组织），同时还要彻底 ，因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。,4 进一步鉴定和筛选：常常会出现染色体倍性的变化,无菌条件,不损伤花药,去除花丝,7-10个,25,不需要光照,需要光照,主要原因是花粉管核和生殖核融合造成的,四、 结果分析与评价,1、选材是否恰当,选材是否成功是花药培养成功的关键。应学会通过显微镜观察处于适宜发育期的花粉。,2、无菌技术是否过关,如果出现了污染现象，说明某些操作步骤，如培养基灭菌、花蕾消毒
5、或接种等有问题。,3、接种是否成功,如果接种的花药长出愈伤组织或释放出胚状体，花药培养的第一步就成功了。要适时转换培养基，以便愈伤组织或胚状体进一步分化成再生植株。,植物组织培养技术与花药培养技术的比较,下图是月季花药离体培养产生花粉植株的两 种途径，请据图回答有关问题：,课堂练习:,(1)选用的材料合适与否是成功诱导出花粉植株的重要因素，一般来说选用 期的花粉可提高成功率。选择花粉时，一般要通过 来确定花粉是否处于合适的发育期，这时需要对花粉的细胞核进行染色，常用的染色剂是 。 (2)上图中花药经脱分化产生胚状体还是愈伤组织主要取决于培养基中 。 (3)胚状体与愈伤组织在结构上的主要区别在于
6、愈伤组织的细胞排列疏松无规则，是一种高度 的薄壁细胞，胚状体与 发育形成的胚有类似的结构，即具有胚芽、胚轴和胚根。 (4)无菌技术也是成功诱导出花粉植株的重要因素，请说明下列各项需要消毒，还需要灭菌。培养基，培养皿，接种环，花蕾，实验操作者的双手，三角锥形瓶。 (填编号)需要灭菌， (填编号)需要消毒。,单核,镜检,醋酸洋红,激素的种类及其浓度配比,液泡化,受精卵,下列有关花药离体培养，说法错误的是,A. 对材料的选择最常用的方法是焙花青-铬矾法，这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色 B. 亲本植株的生长条件、材料的低温预处理、接种密度都对实验有影响 C. 接种花药后一段时间内不需要光照，但幼小植株形成后需要光照 D. 若接种的花药长出愈伤组织或胚状体后，要适时转换培养基，以便进一步分化成再生植株,A,
