1、酶的特性一、目的加深对酶的性质的认识。二、内容本实验由温度对酶活力的影响;pH 对酶活力的影响;酶的激活剂及抑制剂;酶的专一性 4组实验组成。(一)温度对酶活力的影响1原理酶的催化作用受温度的影响。在最适温度下,酶的反应速度最高。大多数动物酶的最适温度为 3740,植物酶的最适温度为 5060。酶对温度的稳定性与其存在形式有关。有些酶的干燥制剂,虽加热到 100,其活性并无明显改变,但在 100的溶液中却很快地完全失去活性。低温能降低或抑制酶的活性,但不能使酶失活。2器材(1)试管及试管架(2)恒温水浴(3)冰浴(4)沸水浴3试剂和材料(1)0.2淀粉的 0.3氯化钠溶液 150 mL 需新鲜
2、配制(2)稀释 200倍的唾液 50 mL 用蒸馏水漱口,以清除食物残渣,再含一口蒸馏水,半分钟后使其流入量筒并稀释 200倍(稀释倍数可根据各人唾液淀粉酶活性调整),混匀备用。(3)碘化钾-碘溶液 50 mL将碘化钾 20g及碘 10g溶于 100 mL水中。使用前稀释 10倍。4操作淀粉和可溶性淀粉遇碘呈蓝色。糊精按其分子的大小,遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色或红色。最简单的糊精遇碘不呈颜色,麦芽糖遇碘也不呈色。在不同温度下,淀粉被唾液淀粉酶水解的程度可由水解混合物遇碘呈现的颜色来判断。取 3支试管,编号后按下表加入试剂:管号 1 2 3淀粉溶液(ml) 1.5 1.5 1.5稀释唾液(ml)
3、 1 1 -煮沸过的稀释唾液(ml) - - 1摇匀后,将 1、3 号两试管放入 37恒温水浴中,2 号试管放入冰水中。10 分钟后取出(将 2号管内液体分为两半),用碘化钾-碘溶液来检验 1、2、3 号管内淀粉被唾液淀粉酶水解的程度。记录并解释结果,将 2号管剩下的一半溶液放入37水浴中继续保温 10分钟后,再用碘液实验,结果如何?(二)pH 对酶活性的影响1原理酶的活力受环境 pH的影响极为显著。不同酶的最适 pH值不同。本实验观察 pH对唾液淀粉酶活性的影响,唾液淀粉酶的最适 pH约为 6.8。2器材(1)试管及试管架(2)吸管(3)滴管(4)50 mL 锥形瓶(5)恒温水浴3试剂和材料
4、4操作取 4个标有号码的 50 mL锥形瓶。用吸管按下表添加 0.2 molL 磷酸氢二钠溶液和 0.1molL 柠檬酸溶液以制备 pH5.08.0 的 4种缓冲液。管号 0.2mol/L磷酸氢二钠(ml) 0.1mol/L柠檬酸(ml) PH1 5.15 4.85 5.02 6.05 3.95 5.83 7.72 2.28 6.84 9.72 0.28 8.0从 4个锥形瓶中各取缓冲液 3 mL,分别注入 4支带有号码的试管中,随后于每个试管中添加 0.5淀粉溶液 2mL和稀释 200倍的唾液 2mL。向各试管中加入稀释唾液的时间间隔各为 1分钟。将各试管中物质混匀,并依次置于 37恒温水浴
5、中保温。待向第 4管加入唾液 2分钟后,每隔 1分钟由第 3管取出一滴混合液,置于白瓷板上,加 1小滴碘化钾-碘溶液,检 验淀粉的水解程度。待混合液变为棕黄色时,向所有试管依次添加 12 滴碘化钾-碘溶液。添加碘化钾-碘溶液的时间间隔,从第 1管起,亦均为 1分钟。观察各试管中物质呈现的颜色,分析 pH对唾液淀粉酶活性的影响。 (三)唾液淀粉酶的活化和抑制1原理酶的活性受活化剂或抑制剂的影响。氯离子为唾液淀粉 酶的活化剂,铜离子为其抑制剂。2器材(1)恒温水浴(2)试管及试管架 3试剂和材料4操作管号 1 2 3 40.1%淀粉溶液(ml) 1.5 1.5 1.5 1.5稀释唾液(ml) 0.
6、5 0.5 0.5 0.51%硫酸铜溶液(ml) 0.51%氯化钠溶液(ml) 0.51%硫酸钠溶液(ml) 0.5蒸馏水(ml) 0.537恒温水浴,保温 10min*碘化钾-碘液(滴) 2-3 2-3 2-3 2-3现象*保温时间可根据各人唾液淀粉酶活力调整。解释结果,说明本实验第 3管的意义。(四)酶的专一性1原理酶具有高度的专一性。本实验以唾液淀粉酶和蔗糖酶对淀粉和蔗糖的作用为例,来说明酶的专一性。淀粉和 蔗糖无还原性。唾液淀粉酶水解淀粉生成有还原性的麦芽糖,但不能催化蔗糖的水解。蔗糖酶能催化蔗糖水解产生还原性葡萄糖和果糖,但不能催化淀粉的水解。用 Benedict试剂检查糖的还原性。2器材(1)恒温水浴(2)沸水浴(3)试管及试管架3试剂和材料4操作(1)淀粉酶的专一性解释实验结果(提示:唾液除含淀粉酶外还含有少量麦芽糖酶)。(2)蔗糖酶的专一性解释实验结果。思考题1什么是酶的最适温度及其应用意义?2什么是酶反应的最适 pH?对酶活性有什么影响?3什么是酶的活化剂? 4什么是酶的抑制剂?与变性剂有何区别?本实验结果如何证明酶的专一性?