1、常用培养基配方目 录：01 糖发酵管02 ONPG 培养基03 西蒙氏柠檬酸盐培养基04 缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR 和 VP 试验用)05 克氏柠檬酸盐培养基06 丙二酸钠培养基07 葡葡糖铵培养基08 Hugh-Leifson 培养基(O/F 试验用)09 马尿酸钠培养基10 营养明胶11 苯丙氨酸培养基12 氨基酸脱羧酶试验培养基13 蛋白胨水(靛基质试验用)14 硫酸亚铁琼脂(硫化氢试验用)15 尿素琼脂16 氰化钾(KCN)培养基17 氧化酶试验18 硝酸盐培养基19 细胞色素氧化酶试验20 过氧化氢酶试验21 过氧化物酶试验22 磷酸盐缓冲液23 明胶磷酸盐缓冲液24 乳酸-苯酚溶液
2、25 肉浸液肉汤26 肉浸液琼脂27 牛肉(或牛心) 消化汤28 血消化汤29 豆粉琼脂30 血琼脂31 营养琼脂32 营养肉汤33 乳糖胆盐发酵管34 乳糖发酵管35 EC 肉汤36 缓冲蛋白胨水(BP)37 氯化镁孔雀绿增菌液(MM) 38 四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB) 39 四硫磺酸钠煌绿增菌液(换用方法 ) 40 亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)41 GN 增菌液42 肠道菌增菌肉汤43 亚硫酸铋琼脂(BS)44 DHL 琼脂45 HE 琼脂46 SS 琼脂47 WS 琼脂48 麦康凯琼脂49 伊红美蓝琼脂(EMB) 50 三糖铁琼脂(TSI) 51 三糖铁琼脂(换用方法) 52 克氏双
3、糖铁琼脂(KI) 53 克氏双糖铁琼脂(换用方法) 54 葡萄糖半固体发酵管55 5%乳糖发酵管56 CAYE 培养基57 Honda 氏产毒肉汤58 Elek 氏培养基(毒素测定用)59 氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培养基60 胰蛋白胨水61 Rustigian 氏尿素培养液62 氯化钠结晶紫增菌液63 氯化钠蔗糖琼脂64 嗜盐菌选择性琼脂65 3.5%氯化钠三糖铁琼脂66 氯化钠血琼脂67 3.5%氯化钠生化试验培养基68 改良磷酸盐缓冲液(小肠结肠炎耶尔森氏菌专用 ) 69 CIN-1 培养基70 嗜盐性试验培养基 01 糖发酵管成分:牛肉膏 5g蛋白胨 10g氯化钠 3g磷酸氢二钠(Na2H
4、PO412H2O) 2g0.2%滇麝香草酚蓝溶液 12mL蒸馏水 1000mLpH7.4制法:1 葡萄糖发酵管按上述成分配好后,按 0.5%加入葡萄糖,分装于有一个倒置小管的小试管内,121高压灭菌 15min.2 其他各种糖发酵管可按上述成分配好后,分装每瓶 100mL,121高压灭菌 15min.另将各种糖类分别配好 10%溶液,同时高压灭菌.将 5mL 糖溶液加入于 100mL 培养基内,以无菌操作分装小试管 . 注:蔗糖不纯,加热后会自行水解者,应采用过滤法除菌.试验方法:从琼脂斜面上挑取小量培养物接种,于 361培养,一般观察 23d.迟缓反应需观察 1430d.02 ONPG 培养
5、基成分:邻硝基酚 -D-半乳糖昔(ONPG) 60mg(O-Nitrophenyl-D-galactopyranoside)0.01mol/L 磷酸钠缓冲液(pH7.5) 10mL1%蛋白胨水(PH7.5) 30mL制法:将 ONPG 溶于缓冲液内,加入蛋白胨水,以过滤法除菌,分装于 10mm75mm 试管,每管 0.5mL,用橡皮塞塞紧.试验方法:自琼脂斜面上挑取培养物 1 满环接种,于 361培养 13h 和 24h 观察结果.如果 -半乳糖苷酶产生,则于 13h 变黄色,如无此酶则 24h 不变色.03 西蒙氏柠檬酸盐培养基成分:氯化钠 5g 硫酸镁(MgSO47H2O) 0.2g磷酸二
6、氢铵 1g磷酸氢二钾 1g柠檬酸钠 5g琼脂 20g蒸馏水 1000mL0.2%溴麝香草酚蓝溶液 40mLpH6.8制法:先将盐类溶解于水内,校正 pH,再加琼脂,加热溶化.然后加入指示剂,混合均匀后分装试管,121高压灭菌 15min.放成斜面.试验方法:挑取少量琼脂培养物接种,于 361培养 4d,每天观察结果.阳性者斜面上有菌落生长,培养基从绿色转为蓝色. 04 缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR 和 VP 试验用)成分:磷酸氢二钾 5g多胨 7g葡萄糖 5g蒸馏水 1000mLpH7.0制法:溶化后校正 pH,分装试管,每管 1mL,121高压灭菌 15min.甲基红(MR)试验:自琼脂斜面挑取
7、少量培养物接种本培养基中,于 361培养 25d,哈夫尼亚菌则应在 2225培养.滴加甲基红试剂一滴,立即观察结果.鲜红色为阳性,黄色为阴性.甲基红试剂配法:10mg 甲基红溶于 30mL95%乙醇中 ,然后加入 20mL 蒸馏水.V-P 试验:用琼脂培养物接种本培养基中,于 361培养 24d.哈夫尼亚菌则应在 2225培养.加入 6%-萘酚-乙醇溶液 0.5mL 和 40%氢氧化钾溶液 0.2mL,充分振摇试管,观察结果.阳性反应立刻或于数分钟内出现红色,如为阴性,应放在 361下培养 4h 再进行观察.05 克氏柠檬酸盐培养基成分:柠檬酸钠 3g葡萄糖 0.2g酵母浸膏 0.5g单盐酸半
8、胱氨酸 0.1g磷酸二氢钾 1g氯化钠 5g0.2%酚红溶液 6mL琼脂 15g蒸馏水 1000mL制法:加热溶解,分装试管,121高压灭菌 15min.放成斜面.试验方法:用琼脂培养物接种整个斜面,在 361培养 7d,每天观察结果.阳性者培养基变为红色.06 丙二酸钠培养基成分:酵母浸膏 1g硫酸铵 2g磷酸氢二钾 0.6g磷酸二氢钾 0.4g氯化钠 2g丙二酸钠 3g0.2%溴麝香草酚蓝溶液 12mL蒸馏水 1000mLpH6.8制法:先将酵母浸膏和盐类溶解于水,校正 pH 后再加入指示剂,分装试管,121高压灭菌 15min. 试验方法:用新鲜的琼脂培养物接种,于 361培养 48h,
9、观察结果.阳性者由绿色变为蓝色.07 葡葡糖铵培养基成分:氯化钠 5g硫酸镁(MgSO47H2O) 0.2g磷酸二氢铵 1g磷酸氢二钾 1g葡萄糖 2g琼脂 20g蒸馏水 1000mL0.2%溴麝香草酚蓝溶液 40mLpH6.8制法:先将盐类和糖溶解于水内,校正 pH,再加琼脂,加热溶化,然后加入指示剂,混合均匀后分装试管,121高压灭菌 15min,放成斜面.试验方法:用接种针轻轻触及培养物的表面,在盐水管内做成极稀的悬液,肉眼观察不见混浊,以每一接种环内含菌数在 20100 之间为宜.将接种环灭菌后挑取菌液接种,同时再以同法接种普通斜面一支作为对照.于 361培养 24h.阳性者葡萄糖铵斜
10、面上有正常大小的菌落生长;阴性者不生长,但在对照培养基上生长良好.如在葡萄糖铵斜面生长极微小的菌落可视为阴性结果.注:容器使用前应用清洁液浸泡.再用清水,蒸馏水冲洗干净,并用新棉花做成棉塞,干热灭菌后使用.如果操作时不注意,有杂质污染时,易造成假阳性的结果.08 Hugh-Leifson 培养基(O/F 试验用)成分:蛋白胨 2g氯化钠 5g磷酸氢二钾 0.3g琼脂 4g葡萄糖 10g0.2%溴麝香草酚蓝溶液 12mL蒸馏水 1000mLpH7.2制法:将蛋白胨和盐类加水溶解后,校正 pH 至 7.2.加入葡萄糖,琼脂煮沸,溶化琼脂,然后加入指示剂.混匀后,分装试管,121高压灭菌 15min
11、,直立凝固备用.试验方法:从斜面上挑取小量培养物作穿刺接种,同时接种两支培养基,其中一支于接种后滴加溶化的 1%琼脂液于表面,高度约 1cm,于 361 培养.09 马尿酸钠培养基成分:马尿酸钠 1g肉浸液 100mL制法:将马尿酸钠溶解于肉浸液内,分装于小试管内,并于管壁画一横线.以标志管内液面高度,高压灭菌 12120min.试剂:三氯化铁(FeCl36H2O)12g,溶于 2%盐酸溶液 100mL 中即成.试验方法:用纯培养物接种,于 42培养 48h,观察培养液是否到达试管壁上记号处,如不足时,用蒸馏水补足至原量.经离心沉淀,吸取上清液 0.8mL,加入三氯化铁试剂 0.2mL,立即混
12、合均匀,经 1015min,观察结果.结果:出现恒久之沉淀物为阳性.10 营养明胶成分:蛋白胨 5g牛肉膏 3g明胶 120g蒸馏水 1000mLpH6.87.0制法:加热溶解,校正至 pH7.47.6,分装小管,121高压灭菌 10min,取出后迅速冷却,使其凝固.复查最终 pH应为 6.87.0.试验方法:用琼脂培养物穿刺接种,放在 2225培养,每天观察结果,记录液化时间.或放在 36 士 1培养,每天取出,放冰箱内 30min 后再观察结果. 11 苯丙氨酸培养基成分:酵母浸膏 3gDI-苯丙氨酸(或 L-苯丙氨酸 1g) 2g磷酸氢二钠 1g氯化钠 5g琼脂 12g蒸馏水 1000m
13、L制法:加热溶解后分装试管,121高压灭菌 15min,使成斜面.试验方法:自琼脂斜面上挑取大量培养物,移种于苯丙氨酸琼脂,在 361培养 4h 或 1824h.滴加 10%三氯化铁溶液 23 滴,自斜面培养物上流下,苯丙氨酸脱氨酶阳性者呈深绿色.12 氨基酸脱羧酶试验培养基成分:蛋白胨 5g酵母浸膏 3g葡萄糖 1g蒸馏水 1000mL1.6%滇甲酚紫- 乙醇溶液 1mLL-氨基酸或 DL-氨基酸 0.5 或 1g/100mLpH6.8制法:除氨基酸以外的成分加热溶解后,分装每瓶 100mL,分别加入各种氨基酸:赖氨酸,精氨酸和鸟氨酸.L- 氨基酸按 0.5%加入,DL-氨基酸按 1%加入.
14、再行校正 pH 至 6.8.对照培养基不加氨基酸.分装于灭菌的小试管内,每管 0.5mL,上面滴加一层液体石蜡,115高压灭菌 10min.试验方法:从琼脂斜面上挑取培养物接种,于 361培养 1824h,观察结果.氨基酸脱羧酶阳性者由于产碱,培养基应呈紫色.阴性者无碱性产物,但因葡萄糖产酸而使培养基变为黄色.对照管应为黄色. 13 蛋白胨水(靛基质试验用)成分:蛋白胨(或胰蛋白胨) 20g氯化钠 5g蒸馏水 1000mLpH7.4制法:按上述成分配制,分装小试管,121高压灭菌 15min.靛基质试剂柯凡克试剂:将 5g 对二甲氨基苯甲醛溶解于 75mL 戊醇中.然后缓慢加入浓盐酸 25mL
15、.欧-波试剂:将 1g 对二甲氨基苯甲醛溶解于 95mL95%乙醇内.然后缓慢加入浓盐酸 20mL.试验方法:挑取小量培养物接种,在 361培养 12d,必要时可培养 45d.加入柯凡克试剂约 0.5mL,轻摇试管,阳性者于试剂层呈深红色;或加入欧-波试剂约 0.5mL,沿管壁流下,覆盖于培养液表面,阳性者于液面接触处呈玫瑰红色.注:蛋白胨中应含有丰富的色氨酸.每批蛋白胨买来后,应先用已知菌种鉴定后方可使用. 14 硫酸亚铁琼脂(硫化氢试验用)成分:牛肉膏 3g酵母浸膏 3g蛋白胨 10g硫酸亚铁 0.2g硫代硫酸钠 0.3g氯化钠 5g琼脂 12g蒸馏水 1000mLpH7.4制法:加热溶解
16、,校正 pH,分装试管,115高压灭菌 15min,取出直立候其凝固.试验方法:挑取琼脂培养物,沿管壁穿刺,于 361培养 12d,观察结果.产硫化氢者使培养基变为黑色.注:肠杆菌科细菌测定硫化氢的产生,应采用三糖铁琼脂或本培养基. 15 尿素琼脂成分:蛋白胨 1g氯化钠 5g葡萄糖 1g磷酸二氢钾 2g0.4%酚红溶液 3mL琼脂 20g蒸馏水 1000mL20%尿素溶液 100mLpH7.20.1制法:将除尿素和琼脂以外的成分配好,并校正 pH,加入琼脂,加热溶化并分装烧瓶.121高压灭菌 15min.冷至 5055,加入经除菌过滤的尿素溶液.尿素的最终浓度为 2%,最终 pH 应为 7.
17、20.1.分装于灭菌试管内,放成斜面备用.试验方法:挑取琼脂培养物接种,在 361培养 24h,观察结果.尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色.16 氰化钾(KCN)培养基成分:蛋白胨 10g氯化钠 5g磷酸二氢钾 0.225g磷酸氢二钠 5.64g蒸馏水 1000mL0.5%氰化钾溶液 20mLpH7.6制法:将除氰化钾以外的成分配好后分装烧瓶,121高压灭菌 15min.放在冰箱内使其充分冷却.每 100mL 培养基加入 0.5%氰化钾溶液 2.0mL(最后浓度为 1:10000),分装于 12mm100mm 灭菌试管,每管约 4mL,立刻用灭菌橡皮塞塞紧,放在 4冰箱内,至少可保存两个
18、月.同时,将不加氰化钾的培养基作为对照培养基,分装试管备用.17 氧化酶试验试剂:1%盐酸二甲基对苯二胺溶液:少量新鲜配制 ,干冰箱内避光保存.1%-萘酚-乙醇溶液.试验方法:取白色洁净滤纸沾取菌落.加盐酸二甲基对苯二胺溶液一滴,阳性者呈现粉红色,并逐渐加深;再加 -萘酚溶液一滴,阳性者于半分钟内呈现鲜蓝色 .阴性于两分钟内不变色.以毛细吸管吸取试剂,直接滴加于菌落上,其显色反应与以上相同.18 硝酸盐培养基成分:硝酸钾 0.2g蛋白 5g蒸馏水 1000mLpH7.4制法:溶解,校正 pH,分装试管,每管约 5mL,121高压灭菌 15min.硝酸盐还原试剂:甲液:将对氨基苯磺酸 0.8g
19、溶解于 2.5mol/L 乙酸溶液 100mL 中.乙液:将甲萘胺 0.5g 溶解于 2.5mol/L 乙酸溶液 100mL 中.试验方法:接种后在 361培养 14d,加入甲液和乙液各一滴,观察结果.硝酸盐还原为亚硝酸盐时于立刻或数分钟内显红色. 注:本试验阴性的原因有三:细菌不能还原硝酸盐;亚硝酸盐继续分解,生成氨和氮;培养基不适于细菌的生长.如欲检查培养基中硝酸盐是否未被分解,可再加入锌粉少许,可使硝酸盐还原为亚硝酸盐而呈现红色.19 细胞色素氧化酶试验试剂:1%盐酸二甲基对苯二胺溶液.1%-萘酚-乙醇溶液.试验方法:取 37(或低于 37)培养 20h 的斜面培养物一支,将两种试剂各
20、23 滴,从斜面上端滴下,并将斜面略加倾斜,使试剂混合液流经斜面上的培养物.如系平板培养物,则可用试剂混合液滴在菌落上.结果:于 2min 内呈现蓝色者为阳性.阳性培养物大多数于半分钟内出现强阳性反应,2min 以后出现微弱或可疑反应均作为阴性结果.20 过氧化氢酶试验试剂:3%过氧化氢溶液:临用时配制.试验方法:挑取固体培养基上菌落一接种环,置于洁净试管内,滴加 3%过氧化氢溶液 2mL,观察结果.结果:于半分钟内发生气泡者为阳性,不发生气泡者为阴性.21 过氧化物酶试验试剂:2%儿茶酚溶液.3%过氧化氢溶液.试验方法:挑取固体培养基上菌落一接种环,置于洁净试管内,滴加 2%儿茶酚溶液 1m
21、L 及 3%过氧化氢溶液 1mL.静置于室温(20) 中 3060min,观察结果.结果:阳性反应,细菌变为黑褐色;阴性反应,细菌不变色.注:过氧化物酶的作用可受氰化钾的抑制.22 磷酸盐缓冲液储存液磷酸二氢钾 34g1mol/L 氢氧化钠溶液 175mL蒸馏水 825mLpH7.2 制法:先将磷酸盐溶解于 500mL 蒸馏水中,用 1mol/L 氢氧化钠溶液校正 pH 后,再用蒸馏水稀释至 1000mL.稀释液:取储存液 1.25mL,用蒸馏水稀释至 1000mL.分装每瓶 100mL 或每管 10mL,121高压灭菌 15min.23 明胶磷酸盐缓冲液成分:明胶 2g磷酸氢二钠 4g蒸馏水
22、 1000mLpH6.2制法:加热溶解,校正 pH,121高压灭菌 15min.24 乳酸-苯酚溶液成分:苯酚 10g乳酸(比重 1.21) 10g甘油 20g蒸馏水 10mL制法:将苯酚在水中加热溶解,然后加入乳酸及甘油.用途:检验真菌形态时用.25 肉浸液肉汤成分:绞碎牛肉 500g氯化钠 5g蛋白胨 10g磷酸氢二钾 2g蒸馏水 1000mL制法:将绞碎之去筋膜无油脂牛肉 500g 加蒸馏水 1000mL,混合后放冰箱过夜,除去液面之浮油,隔水煮沸半小时,使肉渣完全凝结成块,用绒布过滤,并挤压收集全部滤液,加水补足原量.加入蛋白胨,氯化钠和磷酸盐,溶解后校正 pH7.47.6 煮沸并过滤
23、,分装烧瓶,121高压灭菌 30min.26 肉浸液琼脂成分:肉浸液肉汤(PH7.4) 1000mL琼脂 1720g制法:加热溶化琼脂,分装烧瓶或试管,121高压灭菌 30min.根据需要,倾注平板或放成斜面.27 牛肉(或牛心) 消化汤成分:绞碎牛肉(或牛心) 1000g15%氢氧化钠溶液 27mL胰蛋白酶 40mL三氯甲烷 1mL氯化钠 10g蒸馏水 2000mL制法:1 称取碎牛肉,加蒸馏水,隔水加热到 80,维持 15min.2 加氢氧化钠溶液,对 pH 试纸呈弱碱性,冷至 40.3 加胰蛋白酶,氯仿,在 361放置 45h,每小时摇动一二次.4 4h 后,吸取上层液 5mL 于试管中
24、,加 5%硫酸铜溶液 0.1mL,4%氢氧化钠溶液 5mL,混合之.若呈红色,则不须再消化,可由温箱取出.5 加入 15%乙酸溶液 45mL,对 pH 试纸呈酸性.6 煮沸 15min,使胰蛋白酶破坏,冷后,放冰箱内一夜.7 次日吸取上层清液,加氯化钠 10g,并加水补足原量,煮沸.8 校正 pH7.47.6(加 15%氢氧化钠溶液约 10mL),加热,用滤纸过滤,分装烧瓶,121高压灭菌 20min.注:此培养基可作为琼脂培养基的基础,不需加蛋白胨.胰蛋白酶之配制:称取去脂绞碎的猪胰 500g,加入乙醇 500mL,蒸馏水 1500mL,混合之,装人玻塞瓶内.每日摇匀三次.3d 后,用绒布过
25、滤挤出其汁,加盐酸至 0.05%,放冰箱内保存备用.28 血消化汤成分:绞碎猪胃 100g绞碎猪血块 100g蒸馏水 1000mL浓盐酸 10mL制法:1 洗涤猪胃,除去油脂,保留胃粘膜,用绞肉机绞碎.2 用绞肉机将猪血块绞碎.3 将蒸馏水加热至 55,加入猪胃,猪血块和盐酸,置 55水浴中 24h,时常加以摇动.4 从水浴内取出,加入 1moL/L 碳酸钠溶液 5mL,煮沸 10min,置于冰箱内一夜.5 吸取上层清液,加磷酸氢二钾 1g,加热至 75,加入 1mol/L 碳酸钠溶液 45mL,煮沸,校正 pH7.27.4.6 用滤纸过滤,分装烧瓶,121高压灭菌 20min.29 豆粉琼脂
26、成分:牛心消化汤(PH7.47.6) 1000mL琼脂 20g黄豆粉浸液 50mL制法:将琼脂加在牛心消化汤内,加热溶解,过滤.加入豌豆粉浸液,分装每瓶 100mL,121高压灭菌 15min.豌豆粉浸液制法:取豌豆粉 5g,氯化钠 10g,加入蒸馏水 100mL.置 100水浴内加热 1h,放于冰箱中过夜.吸取上清液即为豌豆浸液.30 血琼脂成分:pH7.47.6 豆粉琼脂 100mL脱纤维羊血(或兔血) 510mL制法:加热溶化琼脂,冷至 50,以灭菌手续加入脱纤维羊血,摇匀,倾注平板.亦可分装灭菌试管,置成斜面.亦可用其他营养丰富的基础培养基配制血琼脂.31 营养琼脂成分:蛋白胨 10g
27、牛肉膏 3g 氯化钠 5g琼脂 1520g蒸馏水 1000mL制法:将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内,加入 15%氢氧化钠溶液约 2mL,校正 pH 至 7.27.4.加入琼脂,加热煮沸,使琼脂溶化.分装烧瓶,121高压灭菌 15min.注:此培养基可供一般细菌培养之用,可倾注平板或制成斜面.如用于菌落计数,琼脂量为 1.5%;如作成平板或斜面,则应为 2%.32 营养肉汤成分:蛋白陈 10g牛肉膏 3g氯化钠 5g蒸馏水 1000mLpH7.4制法:按上述成分混合,溶解后校正 pH,分装烧瓶,每瓶 225mL,121高压灭菌 15min.33 乳糖胆盐发酵管成分:蛋白胨 20g猪胆盐(或牛
28、,羊胆盐) 5g乳糖 10g0.04%滇甲酚紫水溶液 25mL蒸馏水 1000mLpH7.4制法:将蛋白胨,胆盐及乳糖溶于水中,校正 pH,加入指示剂,分装每管 10mL,并放入一个小倒管,115高压灭菌 15min.注:双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外,其他成分加倍.34 乳糖发酵管成分:蛋白胨 20g乳糖 10g0.04%溴甲酚紫水溶液 25mL蒸馏水 1000mLpH7.4制法:将蛋白胨及乳糖溶于水中,校正 pH,加入指示剂,按检验要求分装 30mL,10mL 或 3mL,并放入一个小倒管,115高压灭菌 15min.注:双料乳糖发酵管除蒸馏水外,其他成分加倍.30mL 和 10mL 乳糖发
29、酵管专供酱油及酱类检验用,3mL 乳糖发酵管供大肠菌群证实试验用 .35 EC 肉汤成分:胰蛋白胨 20g3 号胆盐(或混合胆盐) 1.5g乳糖 5g磷酸氢二钾 4g磷酸二氢钾 1.5g氯化钠 5g蒸馏水 1000mL制法:将上述成分混合,溶解后,分装有发酵倒管的试管中,121高压灭菌 15min,最终 pH 为 6.90.2.36 缓冲蛋白胨水(BP)成分:蛋白胨 10g氯化钠 5g磷酸氢二钠(Na2HPO412H2O) 9g磷酸二氢钾 1.5g蒸馏水 1000mLpH7.2制法:按上述成分配好后以大烧瓶装,121高压灭菌 15min.临用时无菌分装每瓶 225mL.注:本培养基供沙门氏菌前
30、增菌用.37 氯化镁孔雀绿增菌液(MM)甲液胰蛋白胨 5g氯化钠 8g磷酸二氢钾 1.6g蒸馏水 1000mL乙液氯化镁(化学纯) 40g蒸馏水 100mL4.13.3 丙液0.4%孔雀绿水溶液.制法:分别按上述成分配好后,121高压灭菌 15min 备用.临用时取甲液 90mL,乙液 9mL,丙液 0.9mL,以无菌操作混合即可.注:本培养基亦称 Rappaport 10(R10)增菌液.38 四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB)基础培养基多胨或眎胨 5g胆盐 1g碳酸钙 10g硫代硫酸钠 30g蒸馏水 1000mL碘溶液碘 6g碘化钾 5g蒸馏水 20mL制法:将基础培养基的各成分加入蒸馏水中,
31、加热溶解,分装每瓶 100mL.分装时应随时振摇,使其中的碳酸钙混匀.121高压灭菌 15min 备用.临用时每 100mL 基础培养基中加入碘溶液 2mL,0.1%煌绿溶液 1mL.39 四硫磺酸钠煌绿增菌液(换用方法 )基础液:蛋白胨 10g牛肉膏 5g氯化钠 3g碳酸钙 45g蒸馏水 1000mL将各成分加入于蒸馏水中,加热至约 70溶解,校正 pH 至 7.00.1,121高压灭菌 20min.硫代硫酸钠溶液硫代硫酸钠(Na2S2O35H2O) 50g蒸馏水 加至 100mL碘溶液碘片 20g碘化钾 25g蒸馏水加至 100mL将碘化钾充分溶解于是少量的蒸馏水中,加入碘片,振摇玻瓶至碘
32、片全部溶解,再加入蒸馏水至规 定量.贮于棕色玻瓶内,紧塞瓶盖备用.煌绿水溶液煌绿 0.5g蒸馏水 100mL存放暗处,不少于 1d,使其自然灭菌.牛胆盐溶液干燥的牛胆盐 10g蒸馏水 100mL煮沸溶解,121高压灭菌 20min. 制备:基础液 900mL硫代硫酸钠溶液 100mL碘液 20mL煌绿溶液 2mL牛胆盐溶液 50mL临用前,按上列顺序,以无菌操作依次加入于基础液中,每加入一种成分,均应摇匀后再加入另一种成分.分装于灭菌瓶中,每瓶 100mL.40 亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)成分:蛋白胨 5g乳糖 4g亚硒酸氢钠 4g磷酸氢二钠 5.5g磷酸二氢钾 4.58L-胱氨酸 0.01
33、g蒸馏水 1000mL1%L-胱氨酸- 氢氧化钠溶液的配法:称取 L-胱氨酸 0.1g(或 DL-胱氨酸 0.2g),加 1mol/L 氢氧化钠 1.5mL,使溶解,再加入蒸馏水 8.5mL 即成.制法:将除亚硒酸氢钠和 L-胱氨酸以外的各成分溶解于 900mL 蒸馏水中 ,加热煮沸,俟冷备用.另将亚硒酸氢钠溶解于 100mL 蒸馏水中,加热煮沸,候冷,以无菌操作与上液混合.再加入 1%L-胱氨酸-氢氧化钠溶液 1mL.分装于灭菌瓶中,每瓶 100mL,pH 应为 7.00.1.41 GN 增菌液成分:胰蛋白胨 20g葡萄糖 1g甘露醇 2g柠檬酸钠 5g去氧胆酸钠 0.5g磷酸氢二钾 4g磷
34、酸二氢钾 1.5g氯化钠 5g蒸馏水 1000mLpH7.0制法:按上述成分配好,加热使溶解,校正 pH.分装每瓶 225mL,115高压灭菌 15min.42 肠道菌增菌肉汤成分:蛋白胨 1 10g葡萄糖 5g牛胆盐 20g磷酸氢二钠 8g磷酸二氢钾 2g煌绿 0.015g蒸馏水 1000mLpH7.2制法:按上述成分配好,加热使溶解,校正 pH.分装每瓶 30mL,115高压灭菌 15min.43 亚硫酸铋琼脂(BS)成分:蛋白胨 10g牛肉膏 5g葡萄糖 5g硫酸亚铁 0.3g磷酸氢二钠 4g煌绿 0.025g柠檬酸铋铵 2g亚硫酸钠 6g琼脂 1820g蒸馏水 1000mLpH7.5制
35、法:1 将前面 5 种成分溶解于 300mL 蒸馏水中.2 将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠另用 50mL 蒸馏水溶解.3 将琼脂于 600mL 蒸馏水中煮沸溶解,冷至 804 将以上三液合并,补充蒸馏水至 1000mL,校正 pH,加 0.5%煌绿水溶液 5mL,摇匀.冷至 5055,倾注平皿.注:此培养基不需高压灭菌.制备过程不宜过分加热.以免降低其选择性.应在临用前一天制备,贮存于室温暗处.超过 48h 不宜使用.44 DHL 琼脂成分:蛋白胨 20g牛肉膏 3g乳糖 10g蔗糖 10g去氧胆酸钠 1g硫代硫酸钠 2.3g柠檬酸钠 1g柠檬酸铁铵 1g中性红 0.03g琼脂 1820g蒸馏水 10
36、00mLpH7.3制法:将除中性红和琼脂以外的成分溶解于 400mL 蒸馏水中,校正 pH. 再将琼脂于 600mL 蒸馏水中煮沸溶解,两液合并,并加入 0.5%中性红水溶液 6mL,待冷至 5055,倾注平板.45 HE 琼脂成分:脙胨 12g牛肉膏 3g乳糖 12g蔗糖 12g水杨素 2g胆盐 20g氯化钠 5g琼脂 1820g蒸馏水 1000mL0.4%溴麝香草酚蓝溶液 16mLAndrade 指示剂 20mL甲液 20mL乙液 20mLpH7.5制法:将前面七种成分溶解于 400mL 蒸馏水内作为基础液;将琼脂加入于 600mL 蒸馏水内,加热溶解.加入 甲液和乙液于基础液内,校正 p
37、H.再加入指示剂,并与琼脂液合并,待冷至 5055,倾注平板. 注:此培养基不可高压灭菌.甲液的配制硫代硫酸钠 34g柠檬酸铁铵 4g蒸馏水 100mL乙液的配制去氧胆酸钠 10g蒸馏水 100mLAndrade 指示剂酸性复红 0.5g1mol/L 氢氧化钠溶液 16mL蒸馏水 100mL将复红溶解于蒸馏水中,加入氢氧化钠溶液.数小时后如复红褪色不全,再加氢氧化钠溶液 12mL.46 SS 琼脂基础培养基:牛肉膏 5g眎胨 5g三号胆盐 3.5g琼脂 17g蒸馏水 1000mL 再将两液混合,121高压灭菌 15min,保存备用.完全培养基:基础培养基 100mL乳糖 10g柠檬酸钠 8.5
38、g硫代硫酸钠 8.5g10%柠檬酸铁溶液 10mL1%中性红溶液 2.5mL0.1%煌绿溶液 0.33mL加热溶化基础培养基,按比例加入上述染料以外之各成分,充分混合均匀,校正至 pH7.0,加入中性红和煌绿溶液,倾注平板. 注:制好的培养基宜当日使用,或保存于冰箱内于 48h 内使用.煌绿溶液配好后应在 10d 以内使用.可以购用 SS 琼脂的干燥培养基.47 WS 琼脂成分:胨 12g牛肉膏 3g氯化钠 5g乳糖 12g蔗糖 12g十二烷基硫酸钠 2g琼脂 15gAndrade 指示剂 20mL0.4%溴麝香草酚蓝溶液 16mL甲液 20mL蒸馏水 1000mLpH7.0制法:除指示剂和甲
39、液外,将其他成分加热溶解,不需消毒,校正 pH 后加入指示剂和甲液,倾注平板应呈草绿色. 注:供沙门氏菌分离用.Andrade 指示剂和甲液的配制均见 HE 琼脂.48 麦康凯琼脂成分:蛋白胨 17g眎胨 3g猪胆盐(或牛,羊胆盐) 5g氯化钠 5g琼脂 17g蒸馏水 1000mL乳糖 10g0.01%结晶紫水溶液 10mL0.5%中性红水溶液 5mL制法:1 将蛋白胨,眎,胆盐和氯化钠溶解于 400mL 蒸馏水中,校正 pH7.2.将琼脂加入 600mL加热溶解.将两液合并,分装于烧瓶内,121高压灭菌 15min 备用.2 临用时加热溶化琼脂,趁热加入乳糖,冷至 5055时,加入结晶紫和中
40、性红水溶液,摇匀后倾注平板.注:结晶紫及中性红水溶液配好后须经高压灭菌.49 伊红美蓝琼脂(EMB)成分:蛋白胨 10g乳糖 10g磷酸氢二钾 2g琼脂 17g2%伊红 Y 溶液 20mL0.65%美蓝溶液 10mL蒸馏水 1000mLpH7.1制法:将蛋白胨,磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中,校正 pH,分装于烧瓶内,121高压灭菌 15min 备用.临用时加入乳糖并加热溶化琼脂,冷至 5055,加入伊红和美蓝溶液,摇匀,倾注平板.50 三糖铁琼脂(TSI)成分:蛋白胨 20g牛肉膏 5g乳糖 10g蔗糖 10g葡萄糖 1g氯化钠 5g硫酸亚铁铵Fe(NH4)2(SO4)26H2O 0.2g硫代硫
41、酸钠 0.2g琼脂 12g酚红 0.025g蒸馏水 1000mLpH7.4制法:将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中,校正 pH.加入琼脂,加热煮沸,以溶化琼脂.加入 0.2%酚红水溶液 12.5mL,摇匀.分装试管,装量宜多些,以便得到较高的底层.121高压灭菌 15min.放置高层斜面备用.51 三糖铁琼脂(换用方法)成分:蛋白胨 15g眎胨 5g牛肉膏 3g酵母膏 3g乳糖 10g蔗糖 10g葡萄糖 1g氯化钠 5g硫酸亚铁 0.2g硫代硫酸钠 0.3g琼脂 12g酚红 0.025g蒸馏水 1000mLpH7.4制法:将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中,校正 pH.加入琼脂,加
42、热煮沸,以溶化琼脂.加入 0.2%酚红水溶液 12.5mL,摇匀.分装试管,装量宜多些,以便得到较高的底层.121高压灭菌 15min,放置高层斜面备用.52 克氏双糖铁琼脂(KI)上层培养基成分血消化汤(pH7.6) 500mL琼脂 6.5g硫代硫酸钠 0.1g硫酸亚铁铵 0.1g乳糖 5g0.2%酚红溶液 5mL下层培养基成分血消化汤(pH7.6) 500mL琼脂 2g葡萄糖 1g0.2%酚红溶液 5mL制法:1 取血消化汤按上层和下层的琼脂用量,分别加入琼脂,加热溶解.2 分别加入其他各种成分.将上层培养基分装于烧瓶内;将下层培养基分装于灭菌 12mm100mm 试管内,每管约 2mL.
43、115高压灭菌 10min.3 将上层培养基放在 56水浴箱内保温;将下层培养基直立放在室温内,使其凝固.4 当下层培养基凝固后,以无菌手续将上层培养基分装于下层培养基的上面,每管约 1.5mL,放成斜面.53 克氏双糖铁琼脂(换用方法)成分:蛋白胨 20g牛肉膏 3g酵母膏 3g乳糖 10g葡萄糖 1g氯化钠 5g柠檬酸铁铵 0.5g硫代硫酸钠 0.5g琼脂 12g酚红 0.025g蒸馏水 1000mLpH7.4制法:将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中,校正 pH.加入琼脂,加热煮沸,以溶化琼脂.加入 0.2%酚红水溶液 12.5mL,摇匀.分装试管,装量宜多些,以便得到比较高的底层.
44、121高压灭菌 15min.放置高层斜面备用.54 葡萄糖半固体发酵管成分:蛋白胨 1g牛肉膏 0.3g氯化钠 0.5g1.6%溴甲酚紫酒精溶液 0.1mL葡萄糖 1g琼脂 0.3g蒸馏水 100mLpH7.4制法:将蛋白胨,牛肉膏和氯化钠加入于水中,校正 pH 后加入琼脂加热溶解,再加入指示剂和葡萄糖,分装小试管,灭菌 121 15 min.55 5%乳糖发酵管成分:蛋白胨 0.2g氯化钠 0.5g乳糖 5g2%溴麝香草酚蓝水溶液 1.2mL蒸馏水 100mLpH7.4制法:除乳糖以外的各成分:溶解于 50mL 蒸馏水内,校正 pH.将乳糖溶解于另外 50mL 蒸馏水内,分别灭菌 121 1
45、5min,将两液混合,以无菌操作分装于灭菌小试管内.注:在此培养基内,大部分乳糖迟缓发酵的细菌可于 1d 内发酵.56 CAYE 培养基此培养基附在肠毒素诊断试剂盒内,如无此培养基,亦可用 Honda 氏产毒肉汤 .57 Honda 氏产毒肉汤成分:水解酪蛋白 20g酵母浸膏粉 10g氯化钠 2.5g磷酸氢二钠 15g葡萄糖 5g微量元素 0.5mL蒸馏水 1000mLpH7.5制法:溶解后校正 pH,高压灭菌 121 15min,待冷至 4550时,加入林可霉素溶液,每毫升培养基内含 90g.微量元素配方:硫酸镁 5g,氯化铁 0.5g,氯化钻 2g,蒸馏水 100mL58 Elek 氏培养
46、基(毒素测定用)成分:胨 20g麦芽糖 3g乳糖 0.7g氯化钠 5g琼脂 15g40%氢氧化钠溶液 1.5mL蒸馏水 1000mLpH7.8制法:用 500mL 蒸馏水溶解琼脂以外的成分,煮沸,并用滤纸过滤.用 1mo1/L 氢氧化钠校正 pH.用另外 500mL蒸馏水加热溶解琼脂.将两液混合,分装试管 10mL 或 20mL.121高压灭菌 15min.临用时加热溶化琼脂倾注平板.59 氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培养基成分:甲液:胰蛋白胨 10g蒸馏水 1000mL乙液:磷酸氢二钠 9.5g蒸馏水 1000mL丙液:氯化镁(MgCl26H2O) 40g蒸馏水 400mL以上分别在 121灭菌
47、15min.丁液:孔雀绿 0.2g蒸馏水 100mL戊液:羧苄青霉素 1mg/mL制法:取甲液 620mL,乙液 160mL,丙液 212mL 混合,再加入丁液 6.4mL 和戊液 2.4mL,即为 1000mL 培养基.分装灭菌烧瓶,每瓶 100mL,或灭菌试管 10mL.60 胰蛋白胨水成分:胰蛋白胨 10g蒸馏水 1000mLpH7.0制法:将上述成分溶解,校正 pH.分装试管,121高压灭菌 15min.61 Rustigian 氏尿素培养液成分:尿素 20.0g酵母浸膏 0.1g磷酸二氢钾(KH2PO4) 0.091g磷酸氢二钠(Na2HPO4) 0.095g酚红 0.01g蒸馏水
48、1000mL制法:将上述成分:于蒸馏水中溶解,校正 pH 为 6.80.2. 不要加热,过滤除菌,无菌分装于灭菌小试管 中,每管为约 3mL.用途:尿素酶试验用.62 氯化钠结晶紫增菌液成分:蛋白胨 20g氯化钠 40g0.01%结晶紫溶液 5mL蒸馏水 1000mLpH9.0制法:除结晶紫外,其他按上述成分:配好,加热溶解.约加 30%氢氧化钾溶液 4.5mL,校正 pH.加热煮沸,过滤.再加入结晶紫溶液,混合后分装试管.121高压灭菌 15min.63 氯化钠蔗糖琼脂成分:蛋白胨 10g牛肉膏 10g氯化钠 50g蔗糖 10g琼脂 18g0.2%溴麝香草酚蓝溶液 20mL蒸馏水 1000m
49、LpH7.8制法:将牛肉膏,蛋白胨及氯化钠溶解于蒸馏水中,校正 pH.加入琼脂,加热溶解,过滤.加入指示剂,分装烧瓶 100mL.121高压灭菌 15min 备用.临用前在 100mL 培养基内加入蔗糖 1g,加热溶化并冷至 50,倾注平板.64 嗜盐菌选择性琼脂成分:蛋白胨 20g氯化钠 40g琼脂 17g0.01%结晶紫溶液 5mL蒸馏水 1000mLpH8.7制法:除结晶紫和琼脂外,其他按上述成分配好,校正 pH.加入琼脂,加热溶解.再加入结晶紫溶液,分装烧瓶,每瓶 100mL.65 3.5%氯化钠三糖铁琼脂成分:三糖铁琼脂 1000mL氯化钠 30g制法:按前面三糖铁琼脂,再加入氯化钠 30g,分装试管,121高压灭菌 15min.放置高层斜面备用.66 氯化钠血琼脂成分:酵母膏 3g蛋白胨 10g氯化钠 70g磷酸氢二钠 5g甘露醇 10g结晶紫 0.001g琼脂 15g蒸馏水
