1、两种工艺制备竹沥中游离氨基酸比较两种工艺制备竹沥中游离氨基酸比较【关键词】烧制法；， ，回流提取法；， ，淡竹沥；， ，游离氨基酸摘要：目的比较传统烧制法和回流提取法两种方法制备的淡竹沥中游离氨基酸含量。方法采用柱前衍生 HPLC 法比较了两种不同方法制备的淡竹沥中游离氨基酸含量和种类。结果烧制法中含有天冬氨酸、丝氨酸和亮丝氨酸等 15 种氨基酸，而回流提取法中有 7 种氨基酸：苷氨酸、丙氨酸、酷氨酸、蛋氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸；回流提取法所得游离氨基酸总量较烧制法高出近 12倍。结论该研究为竹沥制备工艺的改进奠定了基础。关键词：烧制法；回流提取法；淡竹沥;游离氨基酸Comparativ
2、e Research on Free Amino Acid in DanZhuLi Prepared byTwo MethodsAbstract： ObjectiveTo compare the kinds and contents of freeamino acids in DanZhuLi prepared from baked process and refluxingprocess. Methods The kinds and contents of free amino acids inDanZhuLi prepared from two processes were analyze
3、d by pre-columnderivatization-high-performance liquid chromatography. Results Theresults showed that there were fifteen kinds of free amino acidsincluding aspartic acid and leucine amino acid in DanZhuLi preparedby the baked process, while there were lack of seven kinds of freeamino acids such as gl
4、ycine, lsyine etc in DanZhuLi prepared by thefefluxing process. On the other hand, the contents of total aminoacids in DanZhuLi prepared by the refluxing process was 12 times aslarge as the other method. Conclusionlt provieded foundation forimprovement on preparation process.Key words： Baked process
5、; Refluxing process ; DanZhuLi; Freeamino acid禾本科刚竹属淡竹 Phyllostachys nigra (Lodd. ) Munro var. henonis(Mitf) Stapf ex Rendle 除了应用于建筑和造纸等行业外；在医药方面有很重要的药用价值，它的秆用火烤灼流出的淡黄色澄淸的液汁称为淡竹沥，药理上具有清热化痰，开窍定惊的作用，临床中用于治疗痰热咳嗽，痰黄气促，中风痰盛,惊风、破伤风等证1。据文献报道24，竹沥中主要含有氨基酸类、酚类、无机元素以及有机酸类成分，其中愈创木酚及氨基酸类成分是祛痰止咳作用的主要有效成分57。但是竹沥的
6、质量易受天气变化、环境的影响，本研究采用 HPLC 法比较了不同方法制备淡竹沥中游离氨基酸的含量和种类，为竹沥制备工艺改进和药理作用研究提供科学依据。1.1 材料淡竹为禾本科刚竹属淡竹 Phyllostachys nigra (Lodd.)Munro var. henonis (Mitford) Stapf ex Rendle,采自湖南长沙岳麓区，经湖南中医药大学药学院生药教研室周日宝教授鉴定。标本存于湖南中医学院中药教研室。1.2 仪器与试剂岛津高效液相色谱仪 LC6A, RF530 荧光检测器；LE80K型超速离心机；18 种氨基酸标准储备液；其他所用溶剂均为分析纯，流动相配制用色谱纯。2
7、 方法与结果0. 1 色谱条件 Hypersil ODS C18 色谱柱（5 pm, 4.6 mmX200 mm)；流动相：A： 0. 14 mol/L 乙酸钠磷酸缓冲液（pH=5. 0),内含 0. 17 mol/L 三乙胺；B: 60%乙腈水溶液，两液等体积混合均勻：流速：1. 0 ml/min；柱温；20C；激发波长：338 nm,发射波长：425 nm。2. 2 传统烧制法制备样品溶液选同一批淡竹，竿径竹长相近，除去枝叶，两端去节，取 1 000 g，用火从竹段中间点燃，收集两头烧出的竹沥汁，汁尽为止，收集备用。所得淡竹沥转移到 100 ml 容量瓶中，加水稀释至刻度。2.3 回流提取
8、法制备样品溶液 选同一批淡竹，竿径竹长相近，除去枝叶，两端去节，适当粉碎成粗粉。准确称取淡竹粗粉 50. 0g，置于圆底烧瓶中，用 70%乙醇浸泡 60 min 后，于水浴上回流提取 2 次，溶媒用量分别为 10, 10BV,提取时间分别为 2，2 h,合并两次提取液回收乙醇至无醇味，抽滤，蒸馏水洗至 250 ml 容量瓶中，加水稀释至刻度。2.4 供试品溶液制备精密吸取按 2. 2，2. 3 项下方法制备的淡竹沥各10.0 ml,子 4C, 14 000 r/min 条件下离心 20 rain 后，取上清液，经微孔滤膜过滤；取滤液 5 m 1 经邻苯二甲醛衍生液 50 p 1 柱前衍生后，直
9、接进样。2.5 结果见表 1。表 1 烧制法和回流提取法制备的淡竹浙中游离氨基酸含量测定（略）3 讨论烧制法中含有天冬氨酸、蛋氨酸等 15 种氨基酸，而回流提取法中有 7 种氨基酸：苷氨酸、丙氨酸、酪氨酸、蛋氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸未被检测到，可能是提取过程中遭到破坏，其具体原因有待进一步研究。本实验以游离氨基酸的含量为指标，采用 HPLC 对传统工艺烧制法和回流提取法制备的淡竹沥进行了比较。实验表明：丝氨酸的含量最高，分别为 1.660, 19. 550 mg/100g;烧制法和回流提取法所得游离氨基酸的含量分别为 4. 116, 48.800 mg/100g.回流提取法所得游离氨基酸
10、总量较烧制法高出近 12 倍。参考文献：1 江苏新医学院.中药大辞典M.上海：上海人民出版社，1977:899.2 乔章星，朱妙珍.竹沥中氨基酸成分的研究J.中国药学杂志，1993, 28 (1) ： 18.3 高吾名.竹沥油中主要无机元素和氨基酸含量的测定J.中成药,2000, 22 (8) ： 553.4 李平山，周甫生，李承先，等.鲜竹浙的化学成分研究J.中草药，1984, 15 (4) ： 3.5 贾红慧，吴向东.慈竹沥的药理作用初探J.中药材，1992, 15(10) ： 85.6 殷玉生，丁青龙竹沥浅谈J.江西中医药，1987，4： 47.7 殷玉生，丁青龙?竹沥止咳成分探讨及临床疗效观察J.中国医院药学杂志，1988，11： 519.
