1、仪器分析实验,高效液相色谱法测定饮料中的咖啡因,主 要 内 容,一、实验目的 二、实验原理 三、实验步骤 四、注意事项 五、数据处理,一、实验目的,1、学习高效液相色谱法分离咖啡因的原理。 2、练习高效液相色谱仪的基本操作。 3、掌握高效液相色谱法进行定性及定量分析的基本方法。,二、实验原理,咖啡中含咖啡因约1.21.8%，茶叶中含2.04.7%，可乐饮料和APC药片中均含有咖啡因。其分子式为C8H10O2N4，结构式：,定量测定咖啡因的传统分析方法是采用萃取分光光度法。,二、实验原理,利用混合物不同组分在固定相和流动相中分配系数(或吸附系数、渗透性等)的差异，使不同组分在作相对运动的两相中进
2、行反复分配，实现分离的分析方法。,色谱法,色谱法分类,高压泵,流动相溶剂,废液,色谱柱,进样口,检测器,高效液相色谱仪,保留值定性分析,校准曲线法定量分析,或,三、实验步骤,1、溶液的配制：分别取1、2、3、4、5 mL 100 g mL-1的咖啡因标准储备液，以超纯水稀释至50 mL，即得到20、40、60、80、100 g mL-1的标准溶液。 2、绘制标准曲线：待基线平稳后，吸取系列标准溶液，分别进样分析，绘制标准曲线。 3、样品测定：吸取待测样品进样分析，根据其峰面积，依据标准曲线计算样品中咖啡因含量。,1、流动相和样品溶液需过滤后使用。 2、流动相还需脱气。 3、基线平稳后才能进样分析。 4、进样前要清洗微量进样器。 5、实验结束后要冲洗系统和色谱柱。,四、注意事项,五、数据处理,1、根据标准溶液色谱图进行咖啡因成分的定性； 2、绘制标准曲线并打印； 2、计算样品中咖啡因含量。,End！,
