1、抗原抗体反应,抗原抗体反应原理 免疫学检验中所涉及的抗原、抗体多为蛋白质类 在反应前能以较稳定的胶体溶液状态存在 稳定因素 当抗原抗体发生特异性结合,稳定因素被破坏,便会出现肉眼可见现象 抗原抗体的结合力为非共价结合 静电引力、范德华力、氢键、疏水作用(50%) 抗原抗体的特异性结合,使疏水基团暴露,水化膜被破坏 电解质在溶液中所解离出的阴阳离子中和表面电荷,衡量抗原抗体结合能力 亲和性(affinity) 抗原抗体间固有的结合力 亲和力(avidity) 在反应系统中抗原抗体实际的结合能力,抗原抗体反应特点,特异性 抗体的超变区与抗原的抗原决定簇的结合 是建立免疫学检验的基础 当两种抗原之间
2、存在相同抗原决定簇时会发生交叉反应 交叉反应会对结果产生干扰,也可加以利用简化检测,抗原抗体反应特点,比例性 抗原为多价、抗体为双价,只有当两者的结合价相互满足,产物的体积较大,迅速出现明显现象,在抗原抗体反应过程中,往往对标本进行稀释,其目的是使两者比例处在等价带范围内,等价点 抗原抗体比例最合适,两者完全反应,上清液中无游离的抗原或抗体,1:2,1:4,1:8,1:16,1:64,1:128,1:256,倍比稀释:将待测的血清(抗体)进行倍比稀释,1:32,1:512,等价带:1:81:128,等价点:1:32,前带,后带,效价:与已知试剂发生反应出现明显现象()的标本最高稀释度,抗原抗体
3、反应特点,可逆性 抗原抗体之间为弱的非共价结合 高盐、低pH能破坏抗原抗体的结合 用于物质的提纯 用于建立检测技术,抗原抗体反应特点,阶段性 结合阶段 抗原抗体发生碰撞后,由于空间结构的吻合,所发生的近距离作用 发生迅速,但不出现肉眼可见现象 为抗原抗体的一级反应 反应阶段 抗原抗体长时间作用,发生交联,并在电解质的作用下出现肉眼可见现象 发生缓慢,出现肉眼可见现象 为抗原抗体的二级反应,影响抗原抗体反应的因素,反应物自身的因素 抗原 性状、结合价、种类 抗体 来源 H型抗体、R型抗体、单克隆抗体 特异性和亲和力 浓度,影响抗原抗体反应的因素,环境因素 电解质 提供阴阳离子,中和表面电荷 生理盐水、磷酸盐缓冲液等较为常用 pH 合适的pH使抗原或抗体表面带有一定的电荷 pH69较为适宜 温度 影响抗原抗体的热运动 37最常采用 震荡与搅拌 混匀抗原抗体、增加两者的接触机会,抗原抗体反应的类型,非标记的免疫反应 沉淀反应 凝集反应 补体参与的反应 中和反应 免疫标记技术 荧光免疫技术 放射免疫技术 酶免疫技术 发光免疫技术 金标免疫技术,