1、紫外可见分光光度法测定水杨酸的含量一、实验目的1、了解紫外可见分光光度计的性能、结构及其使用方法。2、掌握紫外可见分光光度法定性、定量分析的基本原理和实验技术。二、实验原理紫外-可见光谱是用紫外-可见光测获的物质电子光谱，它研究产生于价电子在电子能级间的跃迁，研究物质在紫外-可见光区的分子吸收光谱。当不同波长的单色光通过被分析的物质时能测得不同波长下的吸光度或透光率，以 ABS为纵坐标对横坐标波长 作图，可获得物质的吸收光谱曲线。一般紫外光区为190-400nm，可见光区为 400-800nm。紫外吸收光谱的定性分析为化合物的定性分析提供了信息依据。由于分子结构不同但只要具有相同的生色团，它们
2、的最大吸收波长值就相同。因此，通过对末知化合物的扫描光谱、最大吸收波长值与已知化合物的标准光谱图在相同溶剂和测量条件下进行比较，就可获得基础鉴定。利用紫外吸收光谱进行定量分析时，必须选择合适的测定波长。苯甲酸和水杨酸的紫外吸收光谱如图 1 所示。图 1 苯甲酸与水杨酸紫外吸收光谱图1-苯甲酸；2- 水杨酸水杨酸在波长 300 nm 处有吸收峰，而苯甲酸此处无吸收，在波长 230 nm两组吸收峰重叠，为了避开其干扰，选用 300 nm 波长作为测定水杨酸的工作波长。由于乙醇在 250350nm 无吸收干扰，因此可用 60%乙醇为参比溶液。三、仪器与试剂1仪器紫外可见分光光度计（UVWIN 5，北
3、京普析通用仪器有限公司） ；容量瓶 100mL 1 个、50mL 5 个；刻度吸量管 1mL、2mL、5mL 各 1 支 。2试剂水杨酸对照品（分析纯） ；60%乙醇溶液（自制） 。四、实验步骤1、标准溶液的制备：准确称取 0.0500 g 水杨酸置于 100 mL 烧杯中，用 60%乙醇溶解后，转移到 100 mL 容量瓶中，以 60%乙醇稀释至刻度，摇匀。此溶液浓度为 0.5mgmL-1。2、将五个 50mL 容量瓶按 1-5 依次编号。分别移取水杨酸标准溶液0.50、1.00、2.00、3.00、4.00mL 于相应编号容量瓶中，各加入 60%乙醇溶液，稀释至刻度，摇匀。3、用 1 cm
4、 石英吸收池、 ，以 60%乙醇作为参比溶液，在 200350 nm 波长范围内测定一份水杨酸标准溶液的紫外吸收光谱，确定最大吸收波长。4、在选定波长下，以 60%乙醇为参比溶液，由低浓度到高浓度测定水杨酸标准溶液系列及未知液的吸光度。以水杨酸标准溶液的吸光度为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，根据水杨酸试液的吸光度，通过标准曲线计算水杨酸试样中水杨酸的含量。表 1 标准曲线制定及未知试样浓度检测标准溶液浓度：0.5mgmL -1编号 移取标准溶液体积 （mL ） 溶液浓度（gmL-1） 吸光度（A）空白 0 0 0标 1 0.5 5标 2 1 10标 3 2 20标 4 3 30标 5 4 40未知浓度溶液编号 未知溶液的吸光度（A） 溶液浓度（gmL -1）未知液五、数据处理1、根据某一浓度下的全波长扫描图，确定最佳吸收波长。2、绘制标准曲线，计算工作曲线方程及 R2 值。3、计算未知样中水杨酸的浓度。六、注意事项1、配制样品前要将所使用的玻璃仪器清洗干净。2、移取标准溶液之前要润洗移液管。3、测量前用待测液润洗比色皿，测量由低浓度到高浓度依次进行。思考题1、综述紫外吸收光谱分析的基本原理。2、归纳影响紫外光谱定性、定量检测时的各种误差影响因素。3、为什么选用 300 nm 而不选用 230 nm 波长进行蒽醌的定量分析？4、本实验为什么用 60%乙醇作参比溶液?
