1、全国艾滋病检测技术规范1第六章 HIV 抗原检测1 范围本章规定了 P24抗原的检测方法适用于 HIV-1 P24抗原的检测。2 规范性引用文件Guidelines for the BLOOD TRANSFUSION SERVICES IN THE UNITED KINGDOM. Third Edition.MMWR 45 (RR-2);1-9，Publication date:03/01/1996.Vironostika HIV-1 Antigen Microelisa System Assay package insert and all references within.http:/w
2、ww.niaid.nih.gov/daids/vir_manual/full_vir_manual.pdf3 实验条件3.1 人员从事 HIV-1抗原检测的人员须具有艾滋病实验室的上岗资格，并接受过省级以上艾滋病实验室安全及实验操作技术培训。3.2 设施和设备生物安全柜（生物安全 II级） 、离心机、加样器、冰箱、酶标仪；洗板机。3.3 防护用具专用的工作服、隔离衣、帽子、鞋套、防护眼镜、口罩及手套。3.4 实验材料HIV-1 P24抗原检测试剂盒、酶标板、移液器。4 抗原检测4.1适用范围4.1.1 HIV-1抗体不确定或窗口期的辅助诊断。4.1.2 HIV-1抗体阳性母亲所生婴儿早期的辅助
3、鉴别诊断。4.1.3 第四代 HIV-1 抗原/抗体 ELISA试剂检测呈阳性反应，但 HIV-1抗体确认阴性者的辅助诊断。4.1.4 监测病程进展和抗病毒治疗效果。4.2 试剂一般用 ELISA双抗体夹心法试剂，必须经过国家食品药品监督管理局批准注册、在有效期内的试剂。全国艾滋病检测技术规范25 HIV P24抗原检测方法P24抗原的检测通常是采用 ELISA夹心法，已知抗体包被固相反应板孔底，加入待测血清，若血清中含有 P24抗原则与包被抗体形成抗原-抗体复合物，再加入酶（HRP）标记的 HIV-1抗体与抗原结合，加底物显色，在酶标仪上读结果。为了提高检测血清中 P24抗原的敏感性，需先将
4、血清中免疫复合物解离后再进行测定，目前已发展了 ICD P24抗原（immun-complex disassociate，免疫复合物解离，ICD）测定试剂，用于 HIV-1 P24抗原测定。即使将复合物解离，敏感性提高，也只能在大约 50%无症状感染者中检出 P24抗原。 5.1 试验准备5.1.1 将待检样品从冰箱中取出，核对样品编号，放室温自然融化。5.1.2 将试剂盒从冰箱中取出，室温放置 30min，试剂盒应通过国际标准，通过国家批批检。5.1.3 准备好试验所需的废物缸、加样器、吸头等物品。5.1.4 调好水浴箱、恒温箱的温度。5.1.5 检查酶标仪洗板机是否正常。5.1.6 根据所
5、选试剂盒确定试验操作步骤。5.2 试验操作5.2.1 计算试验所需的检测孔数，每次试验设阴性对照 3孔，阳性对照 1孔，内部对照 1孔。5min内，每孔加入 25l 裂解液，含对照孔。5.2.2 加入 100l 待测样品及对照，用胶纸封好。5.2.3 置于水浴箱或温箱 372C 孵育 605min。5.2.4 洗涤 6遍。5.2.5 加入 100l 酶标抗体，勿搅动，室温孵育 1h。5.2.6 重复步骤 5。5.2.7 加入 100l 底物液，勿封闭板条，室温放置 30min。5.2.8 加入 100l 1M硫酸终止反应，于 15min内置酶标仪读数，单波长 450nm，或双波长 450nm/
6、630nm测 OD值。5.3 试验结果5.3.1 填写好试验操作记录，5.3.2 检测样品及对照结果，5.3.3 试剂厂家、批号、效期，5.3.4 检测人、复核人签名，5.3.5 试验日期，5.3.6 将试验结果存档保留，处理试验废物，擦净实验台。5.4 结果报告和解释5.4.1 HIV-1 P24抗原的阳性结果必须经过中和试验确认，若阳性标本的 OD值比中和反应前减全国艾滋病检测技术规范3少 50%以上，才确定为 HIV P24抗原结果阳性。5.4.2 HIV-1 P24抗原阳性仅作为 HIV感染窗口期的辅助诊断依据，不能据此确诊。5.4.3 HIV-1P24抗原检测的敏感性为 3090，低于病毒载量测定。HIV-1P24 抗原阴性结果只表示在本试验中无反应，不能排除 HIV感染。5.4.4 婴幼儿经过胎盘或哺乳从母亲获得的 HIV抗体不能用于诊断是否经母婴传播感染 HIV。婴幼儿体内从母亲得到的 HIV抗体持续存在时间最长不超过 18个月。在 18月龄以前可以用多种不同的非抗体依赖性的检验方法对新生儿 HIV感染进行辅助诊断，包括：HIV P24抗原检测、病毒分离培养、RNA 或 DNA测定。
