1、 (1)所加的提取缓冲液终浓度: Sodium phosphate buffer 100 mM pH8.0 Tris-HCl 100 mM pH8.0 EDTA 100 mM pH8.0 CTAB 1 (w/v) NaCl 1.5 mol/L (2) 提取步骤: 配制 10 ml 提取缓冲液; 取 0.6ml 样品 均分 到 三个 2ml EP 管, 10,000 rpm 离心 10 min; 倒去上清液,然后加入 2ml 提取缓冲液,吸打混匀,在液氮和 65 水浴中反复冻融三次 ; 加入溶菌酶 (终浓度 1 mg/ml)和蛋白酶 K(终浓度 0.2 mg/ml), 37 温浴 30 min,
2、 最后加入终浓度为 2的 SDS,混合均匀 ; 在 65 水浴中放置 60 min,期间每 10 min 颠倒混匀一次 ; 处理后的样品 10,000 rpm 离心 10 min,将上清液转移到另一个干净的 EP 管 (注意勿将沉淀物带入 ); 在上清液中加入等体积的氯仿,上下颠倒 EP 管混匀, 10,000 rpm 离心 10 min,重复一次; 取上清到另一个干净的 EP 管,加 入 0.6 倍体积的异丙醇,混匀,10,000 rpm 室温离心 10 min, 弃上清 ; 75 乙醇洗涤沉淀块两次,在室温下自然干燥, 用适量灭菌双蒸水溶解, 20 冰箱保存。 0.8%琼脂糖凝胶电泳检测 DNA 质量。