1、重庆医科大学学报2008年第33卷第5期(Journal of Chongqing Medical University 2008V0133 No5) 一629一临床研究算文章编号：02533626(2008)050629023种不同方法检测甲胎蛋白的比较陈海蔚，伍勇(中南大学湘雅三医院检验科，长沙410003)【摘要】目的：比较测定甲胎蛋白(Alphafetoprotein，AFP)的3种不同方法。方法：采用时间分辨荧光免疫分析法(Timeresolved fluoroimmuno assay，TRFIA)、放射免疫法(Radio immuno assay，RIA)与酶联免疫吸附法(Enzm
2、e linked immunoahsorbentassay，ELISA o分别进行线性、精密度、对比实验比较。结果：3种方法中，TRFIA法线性范围最宽；精密度试验中TRFIA法批内为33，批间为47；RIA法批内为53，批问为89；ELISA法批内为105，批间为152。比较试验显示RIA法与TRFIA法的结果相关性比ELISA法与RIA法好。结论：TRFIA法测定AFP优于RIA法和ELISA法。【关键词】甲胎蛋白；时间分辨荧光免疫分析法；放射免疫法；酶联免疫吸附法【中国图书分类法分类号】R44661 【文献标识码】B 【收稿日期】20070710Determination Of seru
3、m o(-fetoprotein by TRFIA，RIA and ELISACHEN Ha一wei。et al(Department of Clinical Laboratary，the Third XiangTa Hospital，Centrd South Universit)【Abstract】Objective：To assess the efficacy of timeresolved fluoroimmuno assay(TRFIA)for quantative determination ofdfetoprotein(AFP)in comparison with radio im
4、muno assay(RIA)and enzme linked immunoabsorbent assay(ELISA)Methods：Thirty serum samples from randomly selected patients were collected to test AFP content with TRFIA，RIA and ELISArespectivelyResults：The linear range of AFP was 1 to 1 000 ngml for TRFIA，5400ngml for RIA ail(5300ngml forELISAThe intr
5、aassay coefficients of variation(CV)and interassay CV were 33and 47for TR、IA53and 89forRIAand 105and 152for ELISA，respectivelyCorrelation tests revealed that the resuhs of RIA were more closelycorrelated with those of TRFIA than with those of ELISAConclusion：TRFIA is shown to be a better method for
6、AFPquantitation than RIA and ELISA in terms of precision and linear range【Key words】Alphafetoproteins；Timeresolved fluoroimmuno assay；Radioimmuno assay；Enzmelinked immunoabsorbent assayAFP是诊断肝癌最特异的标志物，AFP检测是发现和诊断原发性肝癌细胞瘤的重要手段【1。21。对于AFP的检测，已有酶标法(EIA)、RIA、化学发光免疫分析法(CLIA)，常规多采用RIA法，此法有较高的灵敏度和准确性，但试剂存在
7、放射性环境污染及标记物半衰期短、批问差异大等缺陷；ELISA法简单，易于普及，但定量欠精确，线性范围窄，且存在“钩状效应”等不足。TRFIA有灵敏度高、特异性强，且不存在同位素的放射性污染等优点，被认为是超微量免疫分析的实验室诊断方法之一【34】。为了进一步了解该方法测定AFP的特点，我们对这3种方法测定AFP作一比较。1材料与方法作者介绍：陈海蔚(1970一 )，女，主管技师，研究方向：临床生物化学。11仪器和试剂111仪器ANYTEST2000时间分辨荧光测定仪、酶标仪、洗板机均为苏州新波生物技术有限公司产品；1一计数仪为上海日环仪器一厂生产的SN一695B型产品。112试剂ANYTEST
8、2000时间分辨荧光测定仪AFP测定试剂盒为苏州新波生物技术有限公司生产，自带标准物，批号为20040610。RIA法所用试剂为北京原子高科核技术应用股份有限公司生产的AFP放免试剂盒，白带标准物，批号为20030505。ELISA法所用试剂为上海科华生物工程股份有限公司进口的美国BiossedAFP酶标包板，批号为HK90353。12原理与方法121原理3种AFP测定均采用双抗体夹心法，不同之处主要为标记物不同：TRFIA法为稀土离子Eu“标记；RIA法为放射性元素标记；ELISA法为辣根过氧化物酶。TRFIA法的原理为：单克隆AFP抗体包被、封闭一加入检测样品(含AFP抗原)一加入Ea3+
9、标记的单克隆AFP抗体一加入增强液一检测产物荧光强度一根据产物和相对荧光强度的比值，一630一 重庆医科大学学报2008年第33卷第5期(Journal of Chongqing Medical University 2008V0133 No5)求出AFP的含量1561。122方法TRFIA法：AFP标准品和样品25仙I，孔一分析缓冲液200“l一室温慢速振动60min一洗板2次一已稀释(1：50)的Eu3+标记溶液200IXl一室温慢速振动60min一洗板6次一增强液200 tx l一室温慢速振动孵育5min-*钡J定荧光值，自动计算AFP值。RIA法：血清样本100斗l+”IAFP+抗血清
10、100斗l混匀，37。C温育3h，测总T(每分钟脉冲数)，与此平行同做NSB管(非特异性管)、SO管(最大吸收管)、标准管，各管加分离剂1 000仙l，混匀，室温孵育15min、3 500rm离心15min，弃上清，计数仪测定各管衰变率。ELISA法：稀释液100l孔一血清样本20斗l一37孵育30min一洗板4次一酶标抗体150斗l孑L一37孵育30min一洗板一显色一酶标仪450nm读数测定，自动拟合曲线并计算AFP含量。123检测样本随机抽检30份病人血清标本。2结果21线性比较将AFP标准品(苏州新波生物技术有限公司提供)1 000ngml按不同的浓度稀释后做线性实验。结果显示，ELI
11、SA法、RIA法和TRFIA法分别当AFP浓度在5300ngml、5400ngml、11 000ngml范围内呈现良好的线性关系。22精密度试验比较取一混合血清(AFP含量为62ngm1)分别用3种方法同时平行20次计算批内误差；连续10d，次d，计算批间误差，结果见表1。23对比试验将随机抽检的30份病人血清标本分别用3种方法进行检测，并对3种方法进行比较。回归方程：设Y为RIA法所测AFP含量，X。为TRFIA法所测AFP含量，x：为ELISA法所测AFP含量，结果见表2。3讨论表1 TRFIA法、RIA法和ELISA法的精密度试验CV：变异系数表2 TRFIA法、RIA法和ELISA法的
12、相关试验Y为RIA法所测AFP含量；X为TRFIA法所测AFP含量；X：为ELISA法所测AFP含量(p005)通过3种方法测定AFP比较，曲线线性范围不同，ELISA法为5300ngml，RIA法为5400ngml，TRFIA法为1。1 000ngml。TRFIA法利用了具有独特荧光特性的镧系元素及其螯合物为示踪物【刁，代替荧光物质、酶、同位素、化学发光物质，标记抗体、抗原、激素、多肽、蛋白质、核酸探针及生物细胞，大幅度降低了非特异性结合并提高了灵敏度。TRFIA法的固相技术，也是保持其灵敏度的一个重要因素，因此在包被抗体之前，往往要对抗体进行纯化，以提高抗体的包被量和均一性。另外，增强液在
13、TRFIA中的作用特别重要，优质的增强液是提高检测灵敏度的另一个关键因素，加人增强液后，可以使Eu3+从反应复合物中解离下来，游离的Eu“同增强液中的另一种螯合剂形成一种胶态分子团，这种分子团在激发光的激发下能够发出强烈荧光，信号可以增强100万倍。从表1可知，TRFIA法的批内、批间精密度均比RIA法、ELISA法好，这可能是由于TRFIA法利用了具有独特荧光特性的镧系元素及其螯合物为示踪物，几乎完全消除了背景荧光的干扰，且试剂稳定性好，因而检测重现性好。RIA法具有灵敏度高，但其标记物为放射性同位素，有潜在的放射性污染，试剂具有半衰期，并且每次操作都要做标准曲线，尤其是反应时间长，致使其精
14、密度不如TRFIA法。ELISA法检测影响因素较多邮j。另外，ELISA法定量AFP试剂盒的线性及标准问题是测定结果准确性的关键8】。ELISA法的“钩状效应”，即测定显色随着待测标本中抗原浓度的增加而升高至一定程度后，测定吸光度随抗原浓度的增加而开始下降至不显色，容易造成假阴性结果。从表2可以看出，RIA法与TRFIA法的结果相关性比ELISA法与RIA法好。这可能是因为RIA法与TRFIA法较ELISA法精密度高，线性范围宽，而AFP定量ELISA试剂盒间存在线性和标准的问题18jn(下转第640页)一640一 重庆医科大学学报2008年第33卷第5期(Journal of Chongqi
15、ng Medical University 2008V0133 No5)等；告知患者及家属禁止用其它任何物品自行填塞鼻孔，防止逆行感染；避免用力咳嗽和拧鼻，防止液体引流受阻而逆流；禁止做鼻腔冲洗、滴药以及经鼻腔行气管插管实施抢救和经鼻腔插胃管实施胃肠减压或鼻饲等。同时密切观察体温变化，有无呕吐，头痛，颈项强直等脑膜刺激症状，如有异常及时向医生汇报，早期发现，早期处理。脑脊液鼻漏病人由于活动受限，治疗时间长，病情反复，花费大，及担心治疗效果，常表现出焦虑、恐惧、烦躁，甚至拒绝治疗，影响了对医嘱的依从性。护士应多巡视病人，多与其交谈，及时了解病人的心理状况，并根据患者的具体情况作出相应的干预措施，
16、协同解决病人的心理顾虑，恢复其对治疗的信心，增加其对医嘱的依从性，最大限度配合治疗和护理。护士应向病人讲解鼻漏的形成原理，讲解经鼻内镜行修补术的先进性和优越性，强调其微创性和可耐受性，增强患者对治疗的信心；解释绝对卧床休息的意义及重要性，解释治疗、护理程序及配合要求，说明只要配合治疗，疾病是可以痊愈的；主动与患者及家属就费用方面进行详细沟通，并及时向患者和家属反馈治疗进展，讲清各种检查、治疗、护理的必要性，并使其了解医疗系统收费原则，增加其对医护的信任，从而增加对医嘱的依从性。针对经济困难者，尽量避免直接与患者进行有关费用方面的沟通，可与医生联系，在病情允许情况下尽早手术，缩短住院日以减少费用
17、，必要时可与相关社会团体或组织联系，帮助获得社会的支持。部分患者因治疗时间较长，或认为自己精神状态不错，日常生活可以自理，不能坚持而出现松懈、饶幸心理，对医嘱的依从性有降低的倾向。个别患者出现对鼻内镜修补术期望过高的现象，当术后发生与术前预期稍有差异时即感失望、烦躁。总之，护士需利用各种机会与脑脊液鼻漏患者患者及家属交流、沟通，了解其心理状况，在手术前后对患者提供必要的行为干预、支持性心理干预等措施，可有利于稳定患者情绪，消除其思想顾虑，提高患者对医嘱的依从性，使积极配合治疗，促进漏口早日愈合。参考文献1黄漫容，邝燕华脑脊液鼻漏护理综述J中华护理杂，2003；38(6)：469471【2王忠诚
18、神经外科学M武汉：湖北科学技术出版社，1998359【33 余蓉，冯先琼鼻内窥镜下脑脊液鼻漏修补术的护理J实用护理杂志，1998；14(8)：416(责任编辑：关蕴良)一一卜-卜-+-4-卜-一-一一+-一+一-一-I-4-+一+-+一+-+-+-+-+-+一+一+-+-+“+一+一+*+一+一+”+”+*+-+*+一+一+一+-+”+-+-+(上接第625页)ration：implication for biventricular pacing therapy【J】Pacing ClinElectrophysiol，2003：26(2)：5625703】吴金星，雷寒，廖惠，等定量组织速度成像
19、对冠脉搭桥术短期疗效的评价J重庆医学，2007；36(3)：237239【4 Richardson P，Mckenna W，Bristow M，et a1Repon of the 1 995WHOISFC task force on the definition and classification of myocardiomyopathiesJCirculation，1996；93(5)：841842【5Tskayama M，Norris RM，Takayama MA，et a1Postystolic shortening of acutely ischemic canine myocard
20、ium predicts early and laterecovery of function after coronary artery reperfusionJCirculation，1988：78(4)：99410076】Brown MA，Norris RM，Takayama M，et a1Postystolic shorteningis a marker of potential for early recovery of acutely ischaemic myocardium in the dogJCardiovasc Res，1987；21(10)：703716(责任编辑：谭乐勤
21、)-+-。_卜。+。+”+”+。+。+”+”+”+”+。+”+。+*+”+。+。+一+”+-+一+*+-+一+”+一+-+一+”+-+一+一+-+-+一+-+-+一+-+-+(上接第630页)TRFIA法具有敏度高、操作简便、示踪物稳定、标准曲线范围宽、不受样品自然荧光干扰、无放射性污染、多标记等优点，灵敏度超过RIA法4个数量级。现已成为生物医学研究和临床超微量生化检验中一项最有发展前景的分析手段。参考文献1刘宝善消化器官肿瘤学M北京：人民卫生出版社，2004475【2】商健彪，李彦豪，刘方颖，等肝细胞性肝癌18FFDG PET显像与血清甲胎蛋白的相关|生研究J】第一军医大学学报，2004；
22、24(6)：6976993】李振甲，陈泮藻，高平时间分辨荧光分析技术与应，Ej【M北京：科学出版社，1996244】魏东，邓爱文，牟成惠ICA、RIA和ELISA法测定甲胎蛋白的比较J第一军医大学学报，2001；21(6)：459460【5Lhomme R，Brouwers E，A1一Maharik N，et a1Timeresolvedfluoroimmuno assay of plasma and urine O-desmethylangolensinJSteroid Biochem Mol Biol，2002；81(4-5)：3533616杭建峰，吴英松，李 明时间分辨荧光免疫分析的研究
23、进展及应用J热带医学杂志，2004；4(3)：3403427Uehar M，Arai Y，WatanabeS，et a1Compaarison of plasma andurinary phytoestrogens in Japanese and Finish women by timere-solved fluoroimmuno assayJBiofaetors，2000；12(1-4)：2172258毛爱珍，许斌ELISA定量AFP试剂盒的线性及标准问题啤临床检验杂志，1997；15(2)：1121139】郑怀亮，韩松临床检验ELISA指南M北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社，1995166168(责任编辑：关蕴良)
