缓冲溶液的配制.doc

1、序号溶液名称 配制方法 PH 值1 氯化钾-盐酸 13ml 0.2mol/L 盐酸与 25mol 0.2mol/L kcl 混合,加水稀释至 100ml1.72 氨基乙酸-盐酸 500ml 水中溶解氨基乙酸 150g,加 480ml 浓盐酸,再加水稀释至 1000ml2.33 一氯乙酸-氢氧化钠200ml 水中溶解 2g 一氯乙酸后,加 40g 氢氧化钠,溶解完全后再加水稀释至 1000ml2.84 邻苯二甲酸氢钾-盐酸25ml 0.2mol/L 的邻苯二甲酸氢钾溶液与 6ml0.1mol/L 盐酸混合,加水稀释至 100ml3.65 邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠25ml 0.2mol/L 的邻苯

2、二甲酸氢钾溶液与17.5 ml 0.1mol/L NaOH 混合，加水稀释至 100 ml4.8 6 六亚甲基四胺-盐酸200 ml 水中溶解六亚甲基四胺 40 g，加浓 HCl 10 ml，再加水稀释至 1 L5.47 磷酸二氢钾-氢氧化钠把 25ml 0.2 mol/L 的磷酸二氢钾与23.6 ml 0.1 mol/L NaOH 混合均匀，加水稀释至 100 ml 6.88 硼酸-氯化钾-氢氧化钠25.0 ml 0.2 mol/L 的硼酸-氯化钾与4.0 ml 0.1 mol/L NaOH 混合均匀，加水稀释至 100 ml 8.09 氯化铵-氨水 0.1 mol/L 氯化铵与 0.1 m

3、ol/L 氨水以 2：1 比例混合均匀9.110 硼酸-氯化钾-氢氧化钠25.0 ml 0.2 mol/L 的硼酸-氯化钾与43.9 ml 0.1 mol/L NaOH 混合均匀，加水稀释至 100 ml1011 氨基乙酸-氯化钠-NaOH49ml 0.1 mol/L 氨基乙酸-氯化钠与 51ml 0.1 mol/L NaOH混合均匀 11.612 磷酸氢二钠-氢氧化钠50ml 0.05 mol/L Na2HPO4 与 26.9 ml 0.1 mol/L NaOH 混合均匀，加水稀释至 100 ml1213 氯化钾-氢氧化钠25.0 ml 0.2 mol/L KCl 与 66.0 ml 0.2

4、 mol/L NaOH 混合均匀，加水稀释至 100 ml 13.0一、常用溶液的配制（一）溶液配制注意事项 1药品要有较好的质量 试剂分为优级纯（保证试剂，Guaranteed reagent，GR）、分析试剂（Antalytical reagent，AR）化学纯（Chemical pure，CP）和实验试剂（Laboratory reagent，LR）等等。工业用的化学试剂，杂质较多，只在个别情况下应用，如配洗液用的硫酸、配干燥剂的氯化钙等。 2药品称量要精确。 3配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸馏水，比电阻值在 50 万欧姆以上，pH 在5.57.0 之间才可应用，在组织培养等特殊用

5、途时应注意此项要求，配制一般化验用溶液只要求用双蒸馏水或去离子水。 配好后的溶液，应立即除菌处理（如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质），以防杂菌生长。（二）0.067（1/15）Mol/L 磷酸缓冲液 11/15Mol/L 磷酸二氢钾溶液的配制：称取磷酸二氢钾（KH2PO4，AR）9.08g，用蒸馏水溶解后，倾入 1 000ml 容量瓶内，再稀释至刻度（1 000ml）。 2/15Mol/L 磷酸二氢钠溶液的配制：称取无水磷酸氢二钠（Na2HPO4，A.R.）9.47g（或者 Na2HPO42H2O 11.87g）用蒸馏水溶解后，放入 1 000ml 容量瓶内，再加蒸馏水稀释至刻度（1 000ml）

6、。 3按附表的比例，配制成不同 pH 值的缓冲溶液。 附表 1 磷酸盐缓冲液配制法（单位：毫升） pH 1/15Mol/L Na2HPO4 1/15Mol/L KH2PO4 pH 1/15Mol/L Na2HPO4 1/15Mol/L KH2PO4 5.8 8.0 92.0 7.1 66.6 23.4 5.9 9.9 90.1 7.2 72.0 28.0 6.0 12.2 87.8 7.3 76.8 23.2 6.1 15.3 84.7 7.3 80.8 19.2 6.2 18.6 81.4 7.5 84.1 15.9 6.3 22.4 77.6 7.6 87.0 13.0 6.4 26.7

7、73.3 7.7 89.4 10.6 6.5 31.8 68.2 7.8 91.5 8.5 6.6 37.5 62.5 7.9 93.2 6.8 6.7 43.5 56.5 8.8 94.7 5.3 6.8 49.6 50.4 8.1 95.8 4.2 6.9 55.4 44.6 8.2 97.0 3.0 7.0 61.1 38.9 8.4 98.0 2.0 （三）0.15Mol/L PB 液 附表 2 0.15Mol/LPB 液配制法 pH 0.15Mol/L Na2HPO4（ml） 0.15Mol/L NaH2PO4（ml） 6.4 26.5 73.5 6.6 37.5 62.5 6.8

8、49.0 51.0 7.0 61.0 39.0 7.2 72.0 28.0 7.4 81.0 19.0 7.6 87.0 13.0 Na2HPO42H2O 分子量=175.05 0.15Mol/L 溶液含 26.7g/L。 Na2HPO412H2O 分子量=358.22 0.15Mol/L 溶液含 53.7g/L。 NaH2PO4H2O 分子量=138.00 0.15Mol/L 溶液含 20.7g/L。 NaH2PO42H2O 分子量=156.03 0.15Mol/L 溶液含 23.4g/L。 （四）0.2Mol/L PB 缓冲液 附表 3 0.2mol/L PB 缓冲液配制法 pH 0.2

9、Mol/L Na2HPO4（ml） 0.2Mol/L NaH2PO4（ml） 5.8 8.0 92.0 6.0 12.3 87.7 6.2 18.5 81.5 6.4 26.5 73.5 6.6 37.5 62.5 6.8 49.0 51.0 7.0 61.0 39.0 7.2 72.0 28.0 7.4 81.0 19.0 7.6 87.0 13.0 7.8 91.5 8.5 8.0 94.7 5.3 0.2Mol/L Na2HPO42 H2O 溶液 35.61g/L Na2HPO412 H2O 溶液含 71.64g/L 0.2Mol/LNaH2PO4H2O 溶液含 27.60g/L NaH

10、2PO42 H2O 溶液含 31.21g/L 欲配 0.1Mol/L PB 缓冲液则在 0.2Mol/L PB 缓冲液的基础上加 H2O 稀释 1 倍即可。欲配制PBS 液时，则在溶液中加 0.85的 NaCl 溶液即可。 （五）无钙镁离子磷酸缓冲盐水（PBS） （0.15Mol/L PH 7.2） NaCl 8.0g KCl 0.2g Na2HPO4 1.15g （如为 Na2HPO412H2O，则为 2.89g） KH2PO4 0.2g 将上述试剂依次溶于 1 000ml 去离子水中，完全溶解后，115高压灭菌 10min15min，存在 4冰箱中备用。此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗

11、涤细胞培养物。 （六）硼酸盐缓冲液（Borate saline buffer） 1硼酸（3BO3） 0.2Mol/L 硼酸：硼酸 12.37g 加水至 1 000ml。 2硼砂（Na2B4O7） 0.05Mol/L 硼砂：硼砂 19.07g 加水至 1 000ml。 附表 4 不同 pH 的 0.2Mol/L 硼酸缓冲液配制法 pH 0.05Mol/L 硼砂（ml） 0.2Mol/L 硼酸（ml） pH 0.05Mol/L 硼砂（ml） 0.2Mol/L 硼酸（ml） 7.4 1.0 9.0 8.2 3.5 6.5 7.6 1.5 8.5 8.4 4.5 5.5 7.8 2.0 8.0 8.7

12、 6.0 4.0 8.0 3.0 7.0 9.0 8.0 2.0 （七）巴比妥缓冲液 1pH8.2 离子强度 0.05Mol/L 巴比妥缓冲液 巴比妥钠 47.6g 蒸馏水 3 000ml 1.17N HCl 55.0ml （1.17 N HCl=193ml 浓 HCl 加 1 807ml 蒸馏水） 将 4.76g 巴比妥钠溶于 3 000ml 蒸馏水。 加 1.17 N HCl 55ml。 用 HCl 调节 pH 到 8.2，并加蒸馏水至 4 265ml。 2pH8.4 0.06Mol/L 巴比妥缓冲液 巴比妥 1.84g 巴比妥钠 10.30g 加蒸馏水至 1 000.00ml 3pH8.

13、6 0.06Mol/L 巴比妥缓冲液 巴比妥 1.66g 巴比妥钠 12.76g 加蒸馏水 1 000.00ml （八）0.2Mol/L 醋酸盐缓冲液 见表附表 5 附表 5 0.2Mol/L 醋酸盐缓冲液配制法 pH 0.2Mol/L Tris（ml） 0.1Mol/L HCl（ml） pH 0.2Mol/L Tris（ml） 0.1Mol/L HCl（ml） 23 37 23 37 9.10 8.95 25 5 8.06 7.90 25 27.5 8.92 8.76 25 7.5 7.96 7.82 25 30.0 8.75 8.60 25 10.5 7.87 7.73 25 32.5 8

14、.62 8.48 25 12.5 7.77 7.63 25 35.0 8.50 8.37 25 15.5 7.66 7.52 25 37.5 8.40 8.27 25 17.5 7.54 7.40 25 40.0 8.32 8.18 25 20.0 7.36 7.22 25 42.5 （九）三羟甲基甲烷盐酸缓冲液（TrisHCl 缓冲液） 不同 pH，0.05Mol/L 25ml0.2Mol/L 三羟甲基氨基甲烷加 ml0.1NHCl，加水稀释至 100ml（见下表） 附表 6 TrisHCl 缓冲液配制法 pH 0.2Mol/L Tris(ml) 0.1NHCl (ml) pH 0.2Mol

15、/L Tris(ml) 0.1NHCl (ml) 23 37 23 37 9.10 8.96 25 5 8.05 7.90 25 27.5 8.92 8.78 25 7.5 7.96 7.82 25 30.0 8.74 8.60 25 10.0 7.87 7.73 25 32.5 8.62 8.48 25 12.5 7.77 7.63 25 35.0 8.50 8.37 25 15.0 7.66 7.52 25 37.5 8.40 8.27 25 17.5 7.54 7.40 25 40.0 8.32 8.18 25 20.0 7.36 7.22 25 42.5 8.23 8.10 25 22

16、.5 7.20 7.05 25 45.0 8.14 8.00 25 25.0 25 三羟甲基氨基甲烷（Tris） 分子量=121.14 0.2Mol/L 三羟甲基氨基甲烷：Tris24.23g，加水至 1 000ml。 0.1NHCl：取 HCl8.6ml，加水至 1 000ml。 （十）0.5Mol/L pH9.5 碳酸盐缓冲液 NaHCO3 3.70g Na2CO3 0.60g 溶于 600.00ml 蒸馏水中即得。 不用时塞紧瓶塞，以免吸收空气中二氧化碳使 PH 下降。最好小量配制。 （十一）甘油磷酸缓冲液 1配制 pH8.0 磷酸缓冲液 0.1Mol/L Na2HPO4 94.50ml

17、 0.1N NaH2PO4 5.50ml 混合即可 29 份甘油与 1 份 pH8.0 磷酸缓冲液混合，即为甘油磷酸缓冲液。 用途：用于免疫荧光试验。 （十二）Hanks 液 1贮存液 NaCl 80.00g KCl 4.00g Na2HPO412 H2O 1.52g KH2PO4 0.60g 葡萄糖 4.00g 0.4酚红液 50.00ml 双馏水加至 100.00ml 115高压灭菌 15min，冰冻保存。 2工作液 贮存液 1 份 双馏水 9 份 115高压灭菌 15min。临用时用灭菌的 5.6NaHCO3 液调 pH 值至 7.2 左右（溶液呈橙红色）。 （十三）萘（钠）氏试剂（Ne

18、sslers reagent） 配方 1：氯化汞 6.0g 碘化钾 12.4g 20NaOH 30ml 加蒸馏水至 100ml 配方 2：碘化汞 11.5g 碘化钾 8g 蒸馏水 50ml （完全溶解后）过滤，加 20NaOH 50ml。 用途：检测溶液中氨离子。 （十四）阿氏（Alsevers）液 葡萄糖 2.05g 柠檬酸钠 0.80g 氯化钠 0.42g 蒸馏水 100ml 溶解后，以 10%柠檬酸调节 pH 至 6.1，过滤，分装，10 磅 10min 灭菌，4保存。 （十五）青、链霉素混合液（简称 SP液或双抗液） 青霉素（40 万 U） 5 支 链霉素（200 万 g） 1 支 分

19、别溶于 100ml 灭菌无离子水中或共同溶于 200ml 灭菌无离子水中，混合后分装小瓶，置-10-20冰箱保存备用（1 万单位 g/ml）。 临用时，按 1%的量加入营养液或其他溶液中，最后浓度是青霉素 100U/ml，链霉素100ug/ml。 （十六）洗液（清洁液） 配方 1：重铬酸钾 150g 蒸馏水 300ml 浓硫酸 3 000ml 将重铬酸钾加入蒸馏水中，使之自然溶解或水浴溶解，亦可在大坩埚中加热溶解，然后慢慢加入浓硫酸，边加边搅拌，见发热过剧则稍停，冷却后再继续加。此为强洗液。 盛清洁液的容器要坚固，上加厚玻璃盖，操作时要穿橡皮围裙、长统胶靴、戴上眼镜和厚胶皮手套，以保安全。 洗

20、液一旦变绿，表示铬酸已经还原，失去了氧化能力，不宜再用。如将这样洗液加热，再加适量重铬酸钾，又可重新使用。 配方 2：浓硫酸 50% 蒸馏水 50% 重铬酸钾 5% 此为中等强度洗液。 配方 3：重铬酸钾 100g 蒸馏水 1 000ml 加热溶解，冷却后缓慢加入 工业硫酸 100ml 此液为弱洗液，为棕红色。使用此液时，必须预先用热肥皂水将玻璃器皿洗净，经自来水冲洗，沥干然后才能浸入，否则该洗液很快失效缓 冲 溶 液 （ 英 文 ： buffer solution） 是 一 种 能 在 加 入 少 量 酸 或 碱 和 水 时 大 大 减低 pH 变 动 的 溶 液 。 pH 缓 冲 系 统

21、对 维 持 生 物 的 正 常 pH 值 和 正 常 生 理 环 境 起 到 重 要 作用 。 多 数 细 胞 仅 能 在 很 窄 的 pH 范 围 内 进 行 活 动 ， 而 且 需 要 有 缓 冲 体 系 来 抵 抗 在 代 谢 过程 中 出 现 的 pH 变 化 。 在 生 物 体 中 有 三 种 主 要 的 pH 缓 冲 体 系 ， 它 们 是 蛋 白 质 缓 冲 系统 、 重 碳 酸 盐 缓 冲 系 统 以 及 磷 酸 盐 缓 冲 系 统 。 每 种 缓 冲 体 系 所 占 的 分 量 在 各 类 细 胞 和器 官 中 是 不 同 的 。 在 生 化 研 究 工 作 中 ， 常 常

22、需 要 使 用 缓 冲 溶 液 来 维 持 实 验 体 系 的 酸 碱 度 。 研 究 工作 的 溶 液 体 系 pH 值 的 变 化 往 往 直 接 影 响 到 研 究 工 作 的 成 效 。 如 果 “提 取 酶 ”实 验 体系 的 pH 值 变 动 或 大 幅 度 变 动 ， 酶 活 性 就 会 下 降 甚 至 完 全 丧 失 。 所 以 配 制 缓 冲 溶 液 是一 个 不 可 或 缺 的 关 键 步 骤 。 常 用 作 缓 冲 溶 液常 用 作 缓 冲 溶 液 的 酸 类 由 弱 酸 及 其 共 轭 酸 盐 组 合 成 的 溶 液 具 有 缓 冲 作 用 。 生 化实 验 室 常 用

23、 的 缓 冲 系 主 要 有 磷 酸 、 柠 檬 酸 、 碳 酸 、 醋 酸 、 巴 比 妥 酸 、 Tris（ 三 羟 甲基 氨 基 甲 烷 ） 等 系 统 ， 生 化 实 验 或 研 究 工 作 中 要 慎 重 地 选 择 缓 冲 体 系 ， 因 为 有 时 影 响实 验 结 果 的 因 素 并 不 是 缓 冲 液 的 pH 值 ， 而 是 缓 冲 液 中 的 某 种 离 子 。 如 硼 酸 盐 、 柠 檬酸 盐 、 磷 酸 盐 和 三 羟 甲 基 甲 烷 等 缓 冲 剂 都 可 能 产 生 不 需 要 的 化 学 反 应 。 硼 酸 盐 ： 硼 酸 盐 与 许 多 化 合 物 形 成 复

24、 盐 、 如 蔗 糖 。 柠 檬 酸 盐 ： 柠 檬 酸 盐 离 子 容 易 与 钙 结 合 ， 所 以 存 在 有 钙 离 子 的 情 况 下 不 能 使 用 。 磷 酸 盐 ： 在 有 些 实 验 ， 它 是 酶 的 抑 止 剂 或 甚 至 是 一 个 代 谢 物 ， 重 金 属 易 以 磷 酸 盐的 形 式 从 溶 液 中 沉 淀 出 来 。 而 且 它 在 pH7.5 以 上 时 缓 冲 能 力 很 小 。 三 羟 甲 基 氨 基 甲 烷 ： 它 可 以 和 重 金 属 一 起 作 用 ， 但 在 有 些 系 统 中 也 起 抑 制 作 用。 其 主 要 缺 点 时 温 度 效 应 。

25、 这 点 往 往 被 忽 视 ， 在 室 温 pH 是 7.8 的 Tris 缓 冲 液 ， 4时 是 8.4， 37 时 是 7.4， 因 此 ， 4 配 制 的 缓 冲 液 在 37 进 行 测 量 时 ， 其 氢 离 子 浓 度就 增 加 了 10 倍 。 在 pH7.5 以 下 ， 其 缓 冲 能 力 极 为 不 理 想 。 缓 冲 溶 液 组 成缓 冲 体 系 由 、 弱 酸 和 它 的 盐 （ 如 HAc-NaAc） 2、 弱 碱 和 它 的 盐 （ NH3.H2O-NH4Cl） 3、 多 元 弱 酸 的 酸 式 盐 及 其 对 应 的 次 级 盐 （ 如 NaH2PO4-Na2H

26、PO4） 的 水 溶 液 组 成 。 决 定 缓 冲 液 pH 值 的 因 素设 缓 冲 系 统 的 弱 酸 的 电 离 常 数 为 K（ 平 衡 常 数 ） ， 平 衡 时 弱 酸 的 浓 度 为 酸 ， 弱酸 盐 的 浓 度 为 盐 ， 则 由 弱 酸 的 电 离 平 衡 式 可 得 下 式 ： H+ = Ka 弱 酸 /共 轭 碱 pH = pKa + log 共 轭 碱 /弱 酸 这 就 是 Henderson-Hasselbach 等 式 。 如 果 弱 酸 = 共 轭 碱 ， pH = pKa 根 据 此 式 可 得 出 下 列 几 点 结 论 ： 1 缓 冲 液 的 pH 值 与

27、 该 酸 的 电 离 平 衡 常 数 K 及 盐 和 酸 的 浓 度 有 关 。 弱 酸 的 pH 值衡 定 ， 但 酸 和 盐 的 比 例 不 同 时 ， 就 会 得 到 不 同 的 pH 值 。 酸 和 盐 浓 度 相 等 时 ， 溶 液 的pH 值 与 PK 值 相 同 。 2 酸 和 盐 浓 度 等 比 例 增 减 时 ， 溶 液 的 pH 值 不 便 。 3 酸 和 盐 浓 度 相 等 时 ， 缓 冲 液 的 缓 冲 效 率 为 最 高 ， 比 例 相 差 越 大 ， 缓 冲 效 率 越 低 ，缓 冲 液 的 一 般 有 效 缓 冲 范 围 为 PK1pH。 缓 冲 溶 液 的 配

28、制只 要 知 道 缓 冲 对 的 PK 值 ， 和 要 配 制 的 缓 冲 液 的 pH 值 （ 及 要 求 的 缓 冲 液 总 浓 度 ）， 就 能 按 公 式 计 算 盐 和 酸 的 量 。 这 个 算 法 涉 及 对 数 换 算 ， 较 麻 烦 ， 前 人 为 减 少 后人 的 计 算 麻 烦 ， 已 为 我 们 总 结 出 pH 值 与 缓 冲 液 对 离 子 用 量 的 关 系 列 出 了 表 格 。 只 要我 们 知 道 要 配 制 的 缓 冲 液 的 pH， 经 查 表 便 可 计 算 处 所 用 缓 冲 剂 的 比 例 和 用 量 。 例 如 配制 500nmpH5.8 浓 度

29、 为 0.1M 磷 酸 缓 冲 液 。 经 查 表 知 pH5.8 浓 度 为 0.2M Na2HPO48.0 毫 升 ， 而 0.2M Na2HPO492.0 毫 升 。 依此 可 推 论 出 配 制 100ml0.1M 的 磷 酸 缓 冲 液 需 要 0.1M Na2HPO48.0 毫 升 ， 而 0.1M Na2HPO4 需 要 92.0 毫 升 。 计 算 好 后 ， 按 计 算 结 果 准 确 称 好 固 态 化 学 成 分 ， 放 于 烧 杯 中 ， 加 少 量 蒸 馏 水 溶解 ， 转 移 入 50ml 容 量 瓶 ， 加 蒸 馏 水 至 刻 度 ， 摇 匀 ， 就 能 得 到 所 需 的 缓 冲 液 。 各 种 缓 冲 溶 液 的 配 制 ， 均 按 表 格 按 比 例 混 合 ， 某 些 试 剂 ， 必 须 标 定 配 成 准 确 浓 度 才能 进 行 ， 如 醋 酸 、 氢 氧 化 钠 等 。 另 外 ， 所 有 缓 冲 溶 剂 的 配 制 计 量 都 能 从 以 上 的 算 式 准确 获 得 。