1、,细胞遗传学技术一、培养基 1、外周血淋巴细胞染色体制备培养基配制新生小牛血清 20%RPMI1640基本培养基 80%植物血球凝集素（PHA) 按说明配置,2、绒毛、羊水细胞培养基配置胎牛血清 20%1640、HamF10培养基原液 80%,二、细胞培养方法 1、人外周血淋巴细胞染色体制备 1）方法静脉血0.3/5ml培养基37培养72小时收细胞前2-3小时加秋水仙素制片，染色,2）特点取材方便、方法稳定、易掌握和推广 3）意义检查该个体体细胞核型2、羊水细胞染色体制备羊水细胞主要来自胎儿皮肤、胃肠道、呼吸道、泌尿生殖道的粘膜上皮。 1）方法：培养15天左右,2）特点：（1）孕期为16-20
2、周取材，B超监测取材，专人操作。（2）培养15天左右（3）方法复杂、设备较昂贵、成功率较低。 3）安全性：流产率约1%左右 4) 意义：检测胎儿核型,3、绒毛细胞染色体制备绒毛为受精卵经有丝分裂衍生出来的胎儿附属结构 1）方法：直接法培养法：短期和长期培养 2）特点：（1）孕8-10周取材，B超检测，严格无菌，专人操作。（2）培养15天左右或直接制片（3）直接法较为简单，可避免母体污染，但染色体形态较差，分裂期细胞少。,3）安全性：流产率约2-4% 4）意义：检测胎儿核型，进行早期诊断。 4、骨髓细胞染色体制备技术直接法或培养法意义：（1）血液病的染色体异常检测（2）骨髓细胞染色体畸变作为遗传
3、物质受损检测指标较为灵敏。,三、染色体显带技术 1、Q显带 1）特点：荧光染料染色1、9、16号染色体着丝粒区和Y染色体长臂部分区域荧光明显 2）优点：带纹清晰 3) 缺点: 试剂仪器价高,带纹易退色,2、G显带 1）特点：胰酶处理、Giemsa染色、带纹与Q带相似 2）优点：制作方便、费用低廉、标本易保存 3）缺点：带纹不及Q显带清晰,3、C显带着丝粒区深染确定着丝粒数目和位置1、9、16着丝粒区深染而大Y染色体长臂部分深染,四、荧光原位杂交技术 fluorescence in-situ hybridization, FISH,1、基本原理 指利用已进行荧光标记的探针与细胞、组织切片上的核酸
4、进行杂交，检测特异序列的DNA或RNA。它是在细胞遗传学、分子遗传学和免疫学相结合的基础上发展起来的一项技术。,2、探针标记的方法直接法进行标记,间接法进行标记,3、 FISH技术的特点操作操作简便,探针标记后稳定,一次标记后可使用二年.方法敏感,能迅速得到结果.在同一标本上,可同时检测几种不同探针.不仅可用于分裂期细胞染色体数量或结构变化的研究,而且还可用于间期细胞的染色体数量及基因改变的研究.,4、FISH在细胞遗传学中的应用 （1）重复序列的探针（卫星(satellite)探针）卫星DNA探针主要检测人染色体的着丝粒 卫星DNA位于端着丝粒染色体及各号染色体的异染色体质周围 经典卫星DN
5、A(classic-saiellite DNA)位于染色体1、9、15、16和Y染色体长臂异染色质周围 临床应用：羊水细胞可不培养直接筛查21三体Down氏综 合片）18三体（Edward综合征），13体（Patau 综合征），45、XO(Torner氏综合征)和47XXY（Klinfelter综合征）。,（2）单一序列探针 确定碱基突变、基因缺失、基因定位,（3）全染色体探针(whole chromosome painting probe,WCP) 又称染色体涂染探针确定染色体结构畸变,染色体分析技术,一、选择分散程度较好、形态规整的分裂相。能区分染色体的大小和着丝粒位置 二、对20-30个分裂相进行染色体计数。对不同染色体数目的分裂相进行记录辨别制片时染色体丢失还是核型异常,三、选择分裂相进行核型分析。外周血淋巴细胞计数分析20个分裂相，分析5个核型，骨髓细胞分析20个核型。染色体数目异常时，2个以上分裂相具有相同核型视为异常。,四、染色体检测报告 报告单位姓名、性别、年龄主要临床症状、本人有害有毒射线等接触史、亲属中流产和遗传病史核型图结果、分析者、复审者、日期,小结掌握外周血淋巴细胞、绒毛细胞、羊水细胞染色体检查的特点和意义。掌握G显带、Q显带、C显带的特点及优缺点，FISH的原理特点及探针的种类和检测的临床意义。,
