1、ICS 65.160B 35DB 52贵 州 省 地 方 标 准DB 52/ T XXXX2017烟草及烟草制品 棕榈酸、亚油酸、亚麻酸及硬脂酸的测定 气相色谱-火焰离子化检测器法Tobacco and tobacco productsDetermination of palmitic acid,linoleic acid, linolenic acid and stearic acid Gas chromatography-flame ionization detector method点击此处添加与国际标准一致性程度的标识（征求意见稿）（本稿完成日期：2017-6-19）2017 - XX
2、 - XX 发布 2017 - XX - XX 实施贵 州 省 质 量 技 术 监 督 局 发 布DBXX/ XXXXXXXXXI目 次前言 .II1 范围 .12 规范性引用文件 .13 原理 .14 试剂 .15 仪器及材料 .26 样品制备 .27 分析步骤 .28 精密度和回收率 .39 检测报告 .3附录 A（资料性附录） .4DBXX/ XXXXXXXXXII前 言本标准按照GB/T 1.1-2009标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写给出的规则起草。本标准由中国烟草总公司贵州省公司提出并归口。本标准起草单位：中国烟草总公司贵州省公司、贵州省烟草科学研究院。本标准主要起草人：
3、蔡凯、雷波、向章敏、赵会纳、潘文杰、许冬青、赵瑞娟。DBXX/ XXXXXXXXX1烟草及烟草制品 棕榈酸、亚油酸、亚麻酸及硬脂酸的测定 气相色谱-火焰离子化检测器法1 范围本标准规定了烟草和烟草制品中棕榈酸、亚油酸、亚麻酸及硬脂酸的气相色谱测定方法。本标准适用于烟草和烟草制品中棕榈酸、亚油酸、亚麻酸及硬脂酸的测定。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法 YC/T 31-1996 烟草及烟草制品 试样的
4、制备和水分测定 烘箱法3 原理以己二酸为内标物质，10%（体积分数）硫酸-甲醇溶液在常温常压条件下甲酯化高级脂肪酸（棕榈酸、亚油酸、亚麻酸及硬脂酸） ，二氯甲烷对甲酯化产物进行萃取，将萃取液采用气相色谱-火焰离子化检测器测定。4 试剂4.1 棕榈酸、含量97%（质量分数） 。4.2 亚油酸、含量97%（质量分数） 。4.3 亚麻酸，含量97%（质量分数） 。4.4 硬脂酸，含量97%（质量分数） 。4.5 浓硫酸，含量95%（质量分数） 。4.6 实验室用水按照 GB/T 6682-2008 执行。4.7 甲醇，二氯甲烷，分析纯试剂。4.8 甲酯化溶液：10%硫酸-甲醇溶液（体积分数） 。4.
5、9 尼龙针式滤头（0.22 m） 。4.10 标准溶液4.10.1 标准物质标准储备液分别称取 123.2 mg 棕榈酸、129.6 mg 亚油酸、348.4 mg 亚麻酸及 97.0 mg 硬脂酸于 100 mL 容量瓶中，用 100 mL 甲醇定容后利用超声波超声溶解 5 min 后静置，分别得到 1.232 mg/mL、1.296 mg/mL、3.484 mg/mL 和 0.970 mg/mL 的棕榈酸、亚油酸、亚麻酸及硬脂酸标准储备液。冷藏于 4保存，有效期 3 个月。取用时，放置于常温下，达到常温后方可使用。4.10.2 内标物质标准储备液DBXX/ XXXXXXXXX2称取 972
6、.8 mg 己二酸于 100 mL 容量瓶中，用 100 mL 甲醇定容后利用超声波超声溶解 5 min 后静置，得到 9.728 mg/mL 的己二酸标准储备液。冷藏于 4 保存，有效期 3 个月。取用时，放置于常温下，达到常温后方可使用。5 仪器及材料5.1 旋风式样品磨，40 目筛片。5.2 分析天平，精确至 0.1 mg。5.3 涡旋振荡器。5.4 离心机5.5 气相色谱仪，配置火焰离子化检测器。色谱柱：5%苯基-95%二甲基聚硅氧烷固定相，规格为 0.25 m 膜厚，0.32 mm60 m。6 样品制备6.1 按照 YC/T 31-1996 执行制备烟草样品并测定水分含量。7 分析步
7、骤7.1 样品处理准确称取 100 mg 烟末（精确至 0.1 mg）于 50 mL 离心试管中，加入 100 L 己二酸标准储备液和 2 mL 10%硫酸 -甲醇溶液（体积分数） ，旋紧旋盖，涡旋振荡 2 min，室温放置过夜甲酯化反应 24 h 2 h。反应后加入 5 mL 去离子水，5 mL 二氯甲烷，旋紧旋盖，涡旋振荡 3 min 后 3000 rpm 离心 5 min，取下层有机相过 0.22 m 尼龙针式滤头后进行气相色谱-火焰离子化检测器测定。7.2 色谱分析进样口温度：250，不分流；进样量：1 L；氮气流速：2 mL/min，恒流模式；柱温：40下保持 5 min，然后以 5
8、/min 的速率升至 260，保持 10 min；检测器：火焰离子化检测器，检测器气体流量 N2、H 2及 O2分别为 30、35 及 350 mL/min；运行时间：59 min。7.3 标准工作曲线标准工作曲线的制作为分别吸取棕榈酸、亚油酸、亚麻酸及硬脂酸标准储备液 20 uL、50 uL、100 uL、200 uL、500 uL 于 50 mL 离心试管中，再分别加入 100 L 己二酸标准储备液，氮气吹干后，加入 2 mL 10%硫酸-甲醇溶液（体积分数） ，旋紧旋盖，涡旋振荡 2 min，室温放置过夜甲酯化反应 24 h 2 h。反应后加入 5 mL 去离子水，5 mL 二氯甲烷，旋
9、紧旋盖，涡旋振荡 3 min 后 3000 rpm 离心 5 min，取下层有机相过 0.22 m 尼龙针式滤头后进行气相色谱-火焰离子化检测器测定。以标准物质的峰面积/内标物质的峰面积为纵坐标（Y） ，标准物质的质量/内标物质的质量为横坐标（X） ，拟合一元一次方程（Y=a+bX） ，分别得到棕榈酸、亚油酸、亚麻酸及硬脂酸的标准工作曲线和相关性系数。一般来说，相关性系数（ R2）大于 0.999，则表明该标准工作曲线可靠。7.4 样品测定DBXX/ XXXXXXXXX3按照样品处理（7.1）与色谱分析（7.2）条件测定样品中的棕榈酸、亚油酸、亚麻酸及硬脂酸，根据保留时间定性，内标物质己二酸内
10、标法定量。每个样品平行测定两次，高级脂肪酸标准物质和样品的色谱图参见附录 A。7.5 结果的计算与表述样品中高级脂肪酸的含量按照式（1）进行计算。（Y-a ） cR=bm (1-w)（1）式中，R样品中高级脂肪酸的含量，单位为毫克每克（mg/g） ；Y样品中高级脂肪酸与内标物质己二酸的峰面积比值；a高级脂肪酸标准工作曲线的截距；b高级脂肪酸标准工作曲线的斜率；c内标物质己二酸的质量，单位为微克（g） ；m样品的质量，单位为克（g） ；w样品中的水分含量， （%） ；取两次平行测定值的平均值作为样品的测定结果，两次平行测定值间的相对平均偏差不应大于5%，结果精确至 0.01 mg/g。8 精密度
11、和回收率本方法的精密度和回收率测试结果见表 1表 1 四种高级脂肪酸回收率及精密度测定化合物 浓度/mg/g 平均值/n=5含量 添加 总量 回收率/% 精密度/%棕榈酸 1.65 1.00 2.64 99.0 3.32.00 3.58 96.5 3.2亚油酸 1.44 0.70 2.16 102.9 4.51.40 2.78 95.7 3.9亚麻酸 2.88 1.50 4.37 99.3 2.73.00 5.74 95.3 2.3硬脂酸 0.48 0.30 0.79 103.3 4.60.60 1.06 96.7 3.99 检验报告检验报告应包括以下内容：识别被测样品需要的所有信息；参照本标
12、准所使用的试验方法；检测结果，包括各单次测定结果及其平均值；与本标准规定的分析步骤的差异；在检测中观察到的异常现象；检测日期；检测人员。DBXX/ XXXXXXXXX4附 录 A（资料性附录）高级脂肪酸标准物质和样品色谱图示例高级脂肪酸标准物质 （A）及样品（B）的分析色谱图。051015202530354045505605001001500200250030035004004500500500600mVT(min)亚 油 酸内 标 (己 二 酸 )棕 榈 酸 亚 麻 酸硬 脂 酸A051015202530354045505605001001500200250030035004004500500500600硬 脂 酸亚 油 酸棕 榈 酸内 标 (己 二 酸 )mVT(min)亚 麻 酸B
