1、1专题 24 微生物的利用挖命题【考情探究】5 年考情考点 考向 要求考题示例 素养要素 难度预测热度1微生物的实验室培养培养基与微生物的纯化2018 课标全国 ,37,15 分中 2微生物的分离与计数微生物的分离与计数实验与探究2018 课标全国 ,37,15 分科学思维、社会责任中 分析解读 本专题内容一直是高考的命题热点,考查内容集中在微生物的实验室培养、特定微生物数量的测定方法、培养基对微生物的选择作用等;题目情境贴近生活或科技进展,但试题答案落脚于教材主干知识。预计 2020 年高考中这种命题趋势还将继续存在。复习时应注意对各种技术的系统理解和横向对比,可将果酒、果醋与泡菜的制作、特
2、定微生物的分离纯化等实践操作构建过程模型,以加深对相关技术的记忆和理解。【真题典例】2破考点考点一 微生物的实验室培养【考点集训】考向 培养基与微生物的纯化1.(2019 届吉林实验中学第三次月考,41,15 分)下表是某同学列出的分离土壤中微生物的培养基配方,据此回答下列问题:KH2PO4 Na2HPO4 MgSO47H2O 尿素 葡萄糖 琼脂14 g 2.1 g 0.2 g 10 g 10.0 g 15.0 g将上述物质溶解后,用蒸馏水定容到 1 000 mL。(1)从作用上看,该培养基属于 培养基,提供氮源的物质是 ,细菌能利用该氮源是由于体内能合成 酶。 (2)在对分离的能分解尿素的细
3、菌进行鉴定时,还需在培养基中加入 指示剂,若指示剂变 ,说明有目的菌株存在。 3(3)为了测定微生物的数量,接种时应采用 法,某同学在 4 个培养基上分别接种稀释倍数为 106 的土壤样液 0.1 mL,培养后菌落数分别为 180、155、176、129 个,则每升原土壤样液中上述微生物的数量为 个,测定的活菌数比实际活菌数 (填“低” “高”或“基本一致”)。 答案 (1)选择(1 分) 尿素 脲 (2)酚红 红 (3)稀释涂布平板 1.610 12 低2.(2019 届宁夏育才中学第二次月考,37,15 分)为了调查银川市自来水水源地的水质情况,某研究小组对该地自来水水样中的大肠杆菌进行了
4、测定,请回答下列问题:(1)该小组采用平板划线法分离提纯水样中的细菌,划线时在培养基上共画了 4 个区域,则需要 次灼烧接种环。在第二次及以后划线时,总是从上一次的末端开始划线,这样做的目的是 。 (2)在纯化菌种时,所用的培养基都需要在接种前用 法进行灭菌。将1 mL 水样稀释 1 000 倍,在 3 个平板上用涂布法分别接入 0.1 mL 稀释液,经适宜条件下培养后,3 个平板上的菌落数分别为 51、50 和 49。据此可得出每升水样中的活菌数为 。要使该实验所得结果可靠,还应该同时在另一平板上接种 作为对照进行实验。 (3)菌种需临时保藏时,要先将菌种接种到试管的 培养基上,在合适的温度
5、下培养。当菌落长成后,将试管放入 冰箱中保藏。但此方法存在的缺点是 。 (4)在培养时,需将培养皿倒置并放在 中。实验结束时,使用过的培养基应该进行 处理后才能丢弃。 答案 (1)5(1 分) 将聚集的菌种逐步稀释以便获得单个菌种的表面 (2)高压蒸汽灭菌 5.0108 等量的无菌水 (3)固体斜面(1 分) 4 (1 分) 保存的时间不长,菌种容易被污染或产生变异 (4)恒温培养箱(1 分) 灭菌(1 分)考点二 微生物的分离与计数【考点集训】考向 微生物的分离与计数1.(2019 届湖北华中师大附中高三上学期期中,37,15 分)为更好地解决冬季污水处理厂氨氮去除率低的问题,某研究小组尝试
6、从海水中筛选在低温下能高效去除氨氮的硝化细菌。将采4集到的海水样本加入液体培养基 A(其氮源为氨态氮),放在 24 的培养箱中培养 5 天,然后取少量培养液在固体培养基上涂布,得到三种形态、颜色均不相同的单菌落。回答下列问题:(1)液体培养基 A 应选用的灭菌方法是 (填“高压蒸汽灭菌法”或“干热灭菌法”),不选另外一种的原因是 。 (2)在配制培养基 A 时,对碳源的要求是 (填“提供有机碳源”或“不提供碳源”),理由是 。 (3)最后分离得到的单菌落有三种,其形态、颜色各不相同,表明硝化细菌 。 (4)该研究小组在上述实验的基础上,已经获得了高效去除氨氮的硝化细胞,则需要经过 处理,才能筛
7、选出符合要求的能高效去除氨氮的硝化细菌。 答案 (1)高压蒸汽灭菌法(2 分) 干热灭菌法针对耐高温需要保持干燥的物品,若选干热灭菌法会使培养基中的水分蒸发(3 分) (2)不提供碳源(2 分) 硝化细菌能进行化能合成作用,为自养生物(3 分) (3)存在不同的种类(3 分) (4)低温(2 分)2.(2019 届四川南充一诊,37,15 分)有机磷农药是用于防治植物害虫的含磷有机化合物,广泛应用于农业生产中,有时会造成瓜果蔬菜等食品农药残留超标,不少品种对人、畜的毒性很强,人误食后如不及时医治就会危及生命。某班同学欲从土壤中分离高效降解有机磷农药的微生物。请回答下列问题:(1)为了获得能降解
8、有机磷农药的微生物菌种,可在被有机磷农药污染的土壤中取样,并在含有碳源、氮源及等的选择培养基上添加适量的 进行选择培养。 (2)在制备固体培养基时需加入的常用凝固剂是 。若培养基需要调节 pH,则应在灭菌之 (填“前”或“后”)调节。 (3)该小组在接种前,随机取若干灭菌后的空白平板先培养一段时间,这样做的目的是 。 (4)若要测定培养液中选定菌种的菌体数,既可在显微镜下用 直接计数,也可选用 法统计活菌数目。 (5)将获得的 3 种待选微生物菌种甲、乙、丙分别接种在 1 L 含 20 mg 有机磷农药的相同培养液中培养(培养液中其他营养物质充裕、条件适宜),观察从实验开始到微生物停止生长所5
9、用的时间,甲、乙、丙分别为 32 小时、45 小时、16 小时,则应选择微生物 (填“甲”“乙”或“丙”)作为菌种进行后续培养,理由是 。 答案 (1)水和无机盐 有机磷农药 (2)琼脂 前 (3)检测培养基平板灭菌是否合格 (4)血细胞计数板 稀释涂布平板 (5)丙 微生物丙分解有机磷农药的能力比甲、乙强过专题【五年高考】A 组 统一命题课标卷题组1.(2018 课标全国,37,15 分)将马铃薯去皮切块,加水煮沸一定时间,过滤得到马铃薯浸出液。在马铃薯浸出液中加入一定量蔗糖和琼脂,用水定容后灭菌,得到 M 培养基。回答下列问题:(1)M 培养基若用于真菌的筛选,则培养基中应加入链霉素以抑制
10、 的生长,加入了链霉素的培养基属于培养基。 (2)M 培养基中的马铃薯浸出液为微生物生长提供了多种营养物质,营养物质类型除氮源外还有 (答出两点即可)。氮源进入细胞后,可参与合成的生物大分子有 (答出两点即可)。 (3)若在 M 培养基中用淀粉取代蔗糖,接种土壤滤液并培养,平板上长出菌落后可通过加入显色剂筛选出能产淀粉酶的微生物。加入的显色剂是 ,该方法能筛选出产淀粉酶微生物的原理是 。 (4)甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定某一土壤样品中微生物的数量,在同一稀释倍数下得到以下结果:甲同学涂布了 3 个平板,统计的菌落数分别是 110、140 和 149,取平均值 133;乙同学涂布了 3
11、个平板,统计的菌落数分别是 27、169 和 176,取平均值 124。有人认为这两位同学的结果中,乙同学的结果可信度低,其原因是 。 答案 (1)细菌 选择 (2)碳源、无机盐 蛋白质、核酸(3)碘液 淀粉遇碘液显蓝色,产淀粉酶的菌落周围淀粉被水解,形成透明圈 (4)乙同学的6结果中,1 个平板的计数结果与另 2 个相差悬殊,结果的重复性差2.(2018 课标全国,37,15 分)在生产、生活和科研实践中,经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。回答下列问题:(1)在实验室中,玻璃和金属材质的实验器具 (填“可以”或“不可以”)放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。 (2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高
12、温瞬时消毒法,与煮沸消毒法相比,这两种方法的优点是 。 (3)密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒,其原因是紫外线能 。在照射前,适量喷洒 ,可强化消毒效果。 (4)水厂供应的自来水通常是经过 (填“氯气” “乙醇”或“高锰酸钾”)消毒的。 (5)某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时,若压力达到设定要求,而锅内并没有达到相应温度,最可能的原因是 。 答案 (1)可以 (2)在达到消毒目的的同时,营养物质损失较少 (3)破坏 DNA 结构 消毒液 (4)氯气 (5)未将锅内冷空气排尽 3.(2018 课标全国,37,15 分)回答下列与酵母菌有关的问题:(1)分离培养酵母菌通常使用 (填“牛肉膏蛋白胨”
13、 “MS”或“麦芽汁琼脂”)培养基,该培养基应采用 灭菌法灭菌。若将酵母菌划线接种在平板上,培养一段时间后可观察到菌落,菌落的含义是 。 (2)酵母菌液体培养时,若通入氧气,可促进 (填“菌体快速增殖” “乙醇产生”或“乳酸产生”);若进行厌氧培养,可促进 (填“菌体快速增殖” “乙醇产生”或“乳酸产生”)。 (3)制作面包时,为使面包松软通常要在面粉中添加一定量的酵母菌,酵母菌引起面包松软的原因是 。 答案 (1)麦芽汁琼脂 高压蒸汽 由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体 (2)菌体快速增殖 乙醇产生 (3)酵母菌分解葡萄糖会产生 CO2,CO2使面包松软4.(2017 课标全国,37,
14、15 分)某些土壤细菌可将尿素分解成 CO2和 NH3,供植物吸收和利用。回答下列问题:(1)有些细菌能分解尿素,有些细菌则不能,原因是前者能产生 。能分解尿素的细菌不7能以尿素的分解产物 CO2作为碳源,原因是 。但可用葡萄糖作为碳源,进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是 (答出两点即可)。 (2)为了筛选可分解尿素的细菌,在配制培养基时,应选择 (填“尿素” “NH4NO3”或“尿素+NH 4NO3”)作为氮源,不选择其他两组的原因是 。 (3)用来筛选分解尿素细菌的培养基含有 KH2PO4和 Na2HPO4,其作用有 (答出两点即可)。 答案 (1)脲酶 分解尿素的细菌是异养生物,不能利用
15、CO2来合成有机物 为细胞生命活动提供能量,为其他有机物的合成提供原料(2)尿素 其他两组都含有 NH4NO3,能分解尿素的细菌和不能分解尿素的细菌都能利用NH4NO3,不能起到筛选作用(3)为细菌生长提供无机营养,作为缓冲剂保持细胞生长过程中 pH 稳定5.(2016 课标全国,39,15 分,0.24)某同学用新鲜的泡菜滤液为实验材料分离纯化乳酸菌。分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明,乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。回答下列问题:(1)分离纯化乳酸菌时,首先需要用 对泡菜滤液进行梯度稀释,进行梯度稀释的理由是 。 (2)推测在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用有 和
16、。分离纯化时应挑选出 的菌落作为候选菌。 (3)乳酸菌在-20 长期保存时,菌液中常需要加入一定量的 (填“蒸馏水” 、 “甘油”或“碳酸钙”)。 答案 (1)无菌水(2 分) 泡菜滤液中菌的浓度高,直接培养很难分离得到单菌落(3 分)(2)鉴别乳酸菌 中和产生的乳酸(或酸)(每空 3 分,共 6 分) 具有透明圈(2 分)(3)甘油(2 分)6.(2015 课标全国,39,15 分,0.6127)已知微生物 A 可以产生油脂,微生物 B 可以产生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生产。回答有关问题:(1)显微观察时,微生物 A 菌体中的油脂通常可用 染色。微生物 A 产生的油脂不易挥发,可
17、选用 8(填“萃取法”或“水蒸气蒸馏法”)从菌体中提取。 (2)为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物 B 的单菌落,可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样,并应选用以 为碳源的固体培养基进行培养。 (3)若要测定培养液中微生物 B 的菌体数,可在显微镜下用 直接计数;若要测定其活菌数量,可选用 法进行计数。 (4)为了确定微生物 B 产生的脂肪酶的最适温度,某同学测得相同时间内,在 35 、40 、45 温度下降解 10 g 油脂所需酶量依次为 4 mg、1 mg、6 mg,则上述三个温度中, 条件下该酶活力最小。为了进一步确定该酶的最适温度,应围绕 设计后续实验。答案 (1)苏丹(或苏丹)
18、 萃取法(每空 2 分,共 4 分)(2)油脂(3 分)(3)血细胞计数板 稀释涂布平板(每空 2 分,共 4 分)(4)45 40(每空 2 分,共 4 分)7.(2014 课标全国,39,15 分,0.5106)植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解。回答下列问题:(1)分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶,该酶是由 3 种组分组成的复合酶,其中的葡萄糖苷酶可将分解成 。 (2)在含纤维素的培养基中加入刚果红(CR)时,CR 可与纤维素形成 色复合物。用含有 CR 的该种培养基培养纤维素分解菌时,培养基上会出现以该菌的菌落为中心的 。 (3)为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌
19、落,某同学设计了甲、乙两种培养基(成分见下表):酵母膏 无机盐 淀粉 纤维素粉 琼脂 CR 溶液 水培养基甲 + + + + - + +培养基乙 + + + - + + +注:“+”表示有,“-”表示无。据表判断,培养基甲 (填“能”或“不能”)用于分离和鉴别纤维素分解菌,原因是 ;培9养基乙 (填“能”或“不能”)用于分离和鉴别纤维素分解菌,原因是 。 答案 (1)纤维二糖 葡萄糖 (2)红 透明圈 (3)不能 液体培养基不能用于分离单菌落 不能 培养基中没有纤维素,不会形成 CR纤维素红色复合物,即使出现单菌落也不能确定其为纤维素分解菌8.(2014 课标全国,39,15 分,0.5527
20、)为了调查某河流的水质状况,某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量,并进行了细菌分离等工作。回答下列问题:(1)该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前,随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间,这样做的目的是 ; 然后,将 1 mL 水样稀释 100 倍,在 3 个平板上用涂布法分别接入 0.1 mL 稀释液;经适当培养后,3 个平板上的菌落数分别为 39、38 和 37。据此可得出每升水样中的活菌数为 。 (2)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时,接种环通过 灭菌,在第二次及以后的划线时,总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是 。 (3)示意图 A
21、和 B 中, 表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。 (4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀,一部分进行静置培养,另一部分进行振荡培养。结果发现:振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是:振荡培养能提高培养液中 的含量,同时可使菌体与培养液充分接触,提高 的利用率。 答案 (15 分)(1)检测培养基平板灭菌是否合格 3.810 7(每空 2 分,共 4 分)(2)灼烧(2 分) 将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落(3 分)(3)B(2 分)(4)溶解氧 营养物质(每空 2 分,共 4 分)教师用书专用(911)9.(2013 课标全国,39,15 分,0.5
22、633)临床使用抗生素前,有时需要做细菌耐药实验。实验时,首先要从病人身上获取少量样本,然后按照一定的实验步骤操作,以确定某致病菌对不同10抗生素的敏感性。回答下列问题:(1)为了从样本中获取致病菌单菌落,可用 法或 法将样本接种于固体培养基表面,经过选择培养、鉴别等步骤获得。 (2)取该单菌落适当稀释,用 法接种于固体培养基表面,在 37 培养箱中培养 24 h,使其均匀生长,布满平板。 (3)为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性,将分别含有 A、B、C、D 四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置,培养一段时间后,含 A 的滤纸片周围出现透明圈,说明该致病菌对抗生素 A ;含 B 的滤纸
23、片周围没有出现透明圈,说明该致病菌对抗生素 B ;含C 的滤纸片周围的透明圈比含 A 的小,说明 ; 含 D 的滤纸片周围的透明圈也比含 A 的小,且透明圈中出现了一个菌落,在排除杂菌污染的情况下,此菌落很可能是抗生素 D 的 。 (4)根据上述实验结果,为达到抗菌目的,最好应选用抗生素 。 答案 (15 分)(1)划线 稀释涂布(或涂布)(每空 2 分,共 4 分)(2)涂布(1 分)(3)敏感 不敏感 该致病菌对 C 的敏感性比对 A 的弱 耐药菌(每空 2 分,共 8 分)(4)A(2 分)10.(2011 课标,39,15 分)有些细菌可分解原油,从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同
24、学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题:(1)在筛选过程中,应将土壤样品稀释液接种于以 为唯一碳源的固体培养基上。从功能上讲,该培养基属于 培养基。 (2)纯化菌种时,为了得到单菌落,常采用的接种方法有两种,即 和 。 (3)为了筛选出高效菌株,可比较单菌落周围分解圈的大小,分解圈大说明该菌株的降解能力 。 (4)通常情况下,在微生物培养过程中,实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、 和 。无菌技术要求实验操作应在酒精灯 附近进行,以避免周围环境中微生物的污染。答案 (1)原油 选择(2)平板划线法 稀释涂布平板法11(3)强(4)干热灭菌 高压蒸汽灭菌 火焰11.(2009
25、全国,33,10 分)利用微生物分解玉米淀粉生产糖浆,具有广阔的应用前景。但现有野生菌株对淀粉的转化效率低,某同学尝试对其进行改造,以获得高效菌株。(1)实验步骤:配制 (固体、半固体、液体)培养基,该培养基的碳源应为 。 将 接入已灭菌的培养基平板上。 立即用适当剂量的紫外照射,其目的是 。 菌落形成后,加入碘液,观察菌落周围培养基的颜色变化和变化范围的大小,周围出现 现象的菌落即为初选菌落。经分离、纯化后即可达到实验目的。 (2)若已得到二株变异菌株和,其淀粉转化率较高。经测定菌株淀粉酶的催化活性高,菌株的淀粉酶蛋白含量高。经进一步研究发现,突变发生在淀粉酶基因的编码区或非编码区,可推测出
26、菌株的突变发生在 区,菌株的突变发生在 区。 答案 (1)固体 玉米淀粉 野生菌株 对野生菌株进行诱变 浅色范围大 (2)编码 非编码B 组 自主命题省(区、市)卷题组1.(2018 江苏单科,31,8 分)酵母的蛋白质含量可达自身干重的一半,可作为饲料蛋白的来源。有些酵母可以利用工业废甲醇作为碳源进行培养,这样既可减少污染又可降低生产成本。研究人员拟从土壤样品中分离该类酵母,并进行大量培养。下图所示为操作流程,请回答下列问题:(1)配制培养基时,按照培养基配方准确称量各组分,将其溶解、定容后,调节培养基的 ,及时对培养基进行分装,并进行 灭菌。 (2)取步骤中不同梯度的稀释液加入标记好的无菌
27、培养皿中,在步骤中将温度约 (在 25 、50 或 80 中选择)的培养基倒入培养皿混匀,冷凝后倒置培养。 (3)挑取分离平板中长出的单菌落,按步骤所示进行划线。下列叙述合理的有 12。 a.为保证无菌操作,接种针、接种环使用前都必须灭菌b.划线时应避免划破培养基表面,以免不能形成正常菌落c.挑取菌落时,应挑取多个菌落,分别测定酵母细胞中甲醇的含量d.可以通过逐步提高培养基中甲醇的浓度,获得甲醇高耐受株(4)步骤中,为使酵母数量迅速增加,培养过程中需保证充足的营养和 供应。为监测酵母的活细胞密度,将发酵液稀释 1 000 倍后,经等体积台盼蓝染液染色,用 2516 型血细胞计数板计数 5 个中
28、格中的细胞数,理论上 色细胞的个数应不少于 ,才能达到每毫升 3109个活细胞的预期密度。 答案 (8 分)(1)pH 高压蒸汽(湿热) (2)50 (3)a、b、d(4)氧气 无 302.(2017 江苏单科,31,7 分)苯酚及其衍生物广泛存在于工业废水中,对环境有严重危害。小明同学准备依据下图操作步骤,从处理废水的活性污泥中分离筛选酚降解高效菌株。请回答下列问题:(1)酚降解菌富集培养基含有蛋白胨、K 2HPO4、MgSO 4、苯酚和水,其中可作为碳源的有 。 (2)将采集到的样品接种培养,苯酚用量应随转接次数增加而逐渐 ,以达到富集酚降解菌的目的。若如图平板中菌落过于密集,应进一步 ,
29、以便于菌落计数与分离。制备平板培养基时除了需要水、营养物质外,还必须添加 。 (3)如图为连续划线法示意图,在图中 (填图中序号)区域更易获得单菌落。 (4)采用比色测定法(使用苯酚显色剂)检测降解后的废水中苯酚残留量。先制作系列浓度梯度并进行显色反应,下表中 15 号比色管的苯酚浓度应分别为 。 13管号 1 2 3 4 5 6苯酚浓度(mg/L)1如果废水为 50 mg/L 苯酚溶液,降解后约有 21%的苯酚残留,则需将残留液稀释 (填序号:5 10 20)倍后,再进行比色。 答案 (7 分)(1)蛋白胨、苯酚 (2)增加 稀释涂布 凝固剂 (3) (4)0、0.2、0.4、0.6、0.8
30、 【三年模拟】非选择题(共 90 分)1.(2019 届湖南长郡中学第二次月考,35)日前微博传言手机细菌比马桶多。如图,央视和北京卫视通过实验展示调查结果。回答下列相关问题。(15 分)(1)该实验需制备培养基,培养基一般都含有水、碳源、氮源、 ,培养基一般放入 中进行灭菌。 (2)据图,两电视台均采用 法接种,该方法需要 。(多选) A.接种环 B.酒精灯 C.移液管 D.涂布器 E.无菌水(3)通过观察菌落的 ,可知手机屏幕和马桶按钮都存在多种微生物。两电视台实验操作均正确且完全一致,但报道结果截然不同,你认为原因是 。 (4)按图操作取样面积,实验员测定某手机屏幕的细菌数量,将 10
31、mL 菌悬液进行梯度稀释,分别取 0.1 mL 稀释倍数为 102的样品液接种到三个培养基上,培养一段时间后,统计菌落数分别为 48、50、52,则该手机屏幕的细菌数为 个/平方厘米。该实验对照组该如何设置? 。 答案 (1)无机盐(1 分,“琼脂”不作为扣分或给分的标准) 高压蒸汽灭菌锅 (2)稀释涂布平板 BCDE(全对 2 分,答对 23 个得 1 分) (3)形态、大小(答出一点即给 2 分,也可填14“颜色”或其他合理答案) 手机的取样和马桶的取样都不相同 (答出“取样不同”即得2 分) (4)210 4 取培养基涂布 0.1 mL 无菌水进行培养2.(2019 届山东青岛期初调研,
32、36)蛋白酶在生物医药和日用化工等生产领域具有重要的经济价值。某同学为筛选产蛋白酶的高产菌株,做了如下实验步骤(配制了下列培养基,在适宜条件下培养):(15 分)步骤 取样 培养基 培养结果 土壤样品葡萄糖,(NH 4)2SO2,K2HPO43H2O,KH2PO4,NaCl,CaCl2,MgSO47H2O,加水定容培养液 a1 mL 培养液a同上 菌落 挑取单菌落 细菌培养基 培养液 b(1)为实现筛选目的,步骤所使用的培养基配方中,应去除 并加入高浓度的 。该培养基从功能上看属于 培养基。 (2)灭菌是否彻底或是否被污染需要检测,检测方法是 。 (3)为实现目的菌的分离和计数,步骤所使用的培
33、养基中还常加入 制成平板,采用的接种方法是 。 (4)步骤的目的是 。 答案 (1)葡萄糖 蛋白质 选择 (2)未接种的培养基在适宜条件下放置一段时间后,观察培养基上是否有菌落产生 (3)琼脂 稀释涂布平板法 (4)快速增加目的菌的种群数量(扩大培养)3.(2019 届黑龙江大庆实验中学第一次月考,44)酸雨主要是由大气中所含的 SO2造成的。研究人员为了获得用于烟气脱硫的脱硫细菌,进行了相关实验。回答下列问题:(15 分)(1)采集菌种:在某热电厂烟囱周围区域采集土样,取样用的小铁铲和盛装土样的信封在使用前都需要 。将采集的土样进行稀释处理后,接种到培养基上进行培养。 (2)分离目的菌:将目
34、的菌转移到含少量无菌水的锥形瓶中,边搅拌边持续通入 SO2,驯化几15分钟后接种到固体培养基上,待长出菌落后再重复上述步骤,并逐步延长通 SO2的时间,与此同时逐步降低培养基的 pH。由此分离得到的目的菌具有较强的 的能力。 (3)活菌计数:为获得大量目的菌用于生产,在培养过程中需连续取样进行计数, 法常用来统计样品中的活菌数目。通常情况下,用此方法得到的活菌数目往往比实际数目 (填“高”或“低”)。 (4)检测目的菌对抗生素的敏感性:取该单菌落适当稀释后的液体 2 滴,接种于固体培养基表面,并用 使菌液均匀分布。在 37 培养箱中培养 24 小时后,将大小相同且分别含有不同抗生素的圆纸片均匀
35、置于该平板的不同位置,再培养一段时间,结果如图所示(圆纸片周围的白色区域表示没有菌落分布),据此实验结果推测,五种抗生素中对该菌抑制作用最强的是 (答序号和名称)。 (5)菌种保存:采用平板划线法分离纯化得到了脱硫细菌,可以采用 的方法,对菌种长期保存。 答案 (1)灭菌 (2)利用 SO2和耐酸 (3)稀释涂布平板 低 (4)涂布器 青霉素 (5)甘油管藏4.(2019 届安徽合肥高三调研,25)如图是纯化纤维素分解菌并生产乙醇的基本工作流程,请回答下列问题:(15 分)(1)图中过程选取富含纤维素的土壤,在鉴定和筛选所需微生物时需用 对纤维素进行染色并制成选择培养基。最后还要在平板培养基上
36、分离纯化目的菌。为避免杂菌污染培养物和环境,接种时要在操作。 (2)图中环节获得的酶是一种复合酶,一般认为它至少包括三种组分,分别为 C1酶、C X酶和 。前两种酶使纤维素分解成 ,第三种酶将其进一步分解成葡萄糖。环节常用的菌种是 。 (3)用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中纤维素分解菌数量。在对应稀释倍数为 106的培16养基中,取 0.2 mL 稀释液涂布,得到以下统计结果:涂布了三个平板,统计的菌落数是210、240 和 246;请计算每毫升原液中的菌体数是 。用这种方法测得的菌体数比实际活菌数量 。 答案 (1)刚果红 酒精灯火焰旁 (2)葡萄糖苷酶 纤维二糖 酵母菌 (3)1.161
37、0 9 少5.(2019 届河南信阳高中一模,37)土壤中的细菌数量多、分布广,人类能根据需要从土壤中分离提纯各种细菌,因此可以从土壤的枯枝败叶层分离出纤维素分解菌。回答下列问题:(15分)(1)培养细菌的培养基除含有碳源外,还必须含有的基本成分是 。 (2)为避免培养皿污染,需将倒平板后的培养皿呈 状态放置。为了排除培养基被污染,需设置接种等量 的培养基作为空白对照。 (3)若要鉴别所分离的细菌是否为纤维素分解菌,则应该在培养基中加入 ,观察培养基中是否出现以纤维素分解菌为中心的透明圈,从而可以鉴定是否筛选出纤维素分解菌。 (4)为避免培养液中菌体浓度过高,需将培养液进行 处理。为了测定培养
38、液中的菌体数量,一般采用 法将一定量的菌液接种到固体培养基上,统计菌落的数量来代表菌体数,这种检测方法测得的结果一般偏小,原因是 。 答案 (1)氮源、水、无机盐 (2)倒置 无菌水 (3)刚果红染料 (4)梯度稀释(或系列稀释) 稀释涂布平板 有些菌落是由两个或多个活菌共同形成的(且有活菌在培养过程中死亡)6.(2019 届江西新余四中第一次月考,34)为了调查某学校附近河流的水质状况,该学校生物兴趣小组测定了河流水样中的细菌含量,并进行了细菌的分离等工作。回答下列问题:(15分)(1)如图,该小组采用的是 分离水样中的细菌。操作时,接种环通过 17灭菌,在第二次及以后的操作时,总是从上一次
39、的末端开始,这样做的目的是 。 (2)该实验组将接种好的培养皿在恒温箱中培养时倒置,其目的是 。 (3)菌落是 。单个菌落在生态学中可以被称为 。根据培养皿上菌落的平均数可以计算河水中该细菌的密度,但计算的数据要比实际活菌的数目少,原因是 。除了上述的活菌计数法外, 也是测定微生物数量的常用方法。 (4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀,一部分进行静置培养,另一部分进行振荡培养。结果发现:振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是 。 答案 (1)平板划线法 灼烧 将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落 (2)防止凝结在皿盖上水滴落在培养基上产生杂菌污染 (3)由一个细胞在固体培养基上繁殖而来的肉眼可见的子细胞群 种群(1 分) 当两个或者多个细胞连在一起时平板上观察到的是一个菌落 显微镜直接计数 (4)振荡培养能提高培养液的溶解氧的含量(1 分),同时可以使菌体与培养液充分接触,提高营养物质的利用率(1 分)
