1、酶标仪基本知识及其检测原理 酶标仪基本知识及其检测原理，文章简要介绍了酶标仪的原理和及应用。 光是电磁波，波长 100nm-400nm 称为紫外光， 400nm-780nm之间的光可被人眼观察到，大子 780nm 称为红外光。人们只所以能够看到色彩，是 因 为光照射到物 体 上被物 体 反射回来。绿色植物之所以是绿色，是 因 为植物吸收了光中的红色光谱。酶 标 仪测定的原理是在特定波长下，检测被测物的吸光值。 检测单位： 光通过被检测物，前后的能量差异即是被检测物吸收掉的能量，特定波长下，同一种被检测物的浓度与被吸收的能量 成 定量关 系。 检测单位用 OD值表 示 ， OD是 optical
2、delnsity（光密度）的缩写，表 示 被检测物吸收掉的光密度， OD=10g（ 1/trans），其中 trans 为检测物的透光值。根据 Bouger-amberT-beer 法则， OD 值与光强度 成 下述 关 系： E=OD=log 0/ 其中 E 表 被吸收的光密度， 0为在检测物之前的光强度， 为从被检测物出来的光强度。 OD 值由下述公式 计算： E=OD=CDE 其中： C 为检测物的浓度； D 为检测物的厚度； E 为摩尔 子。 在特定波长下测定每一种物质都有其特定的波长，在此波长下，此物质能够吸收最多的光能量。如果选择其它的波长段，就会造 成 检测结果的不准确。 因 此
3、，在测定检测物时，我们选择特定的波长进行检测，称为测量波长。 但是每一种物质对光能量还存在一定的非特异性吸收，为了消除这种非特异性吸收，我们再 选取一个参照波长，以消除这个不准确性。在参照波长下，检测物光的吸收最小。检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收。 酶 标 仪检测值计算 仪器中的检测器接收透过被检测物的光能量，转换 成 二进位数字信号，最大为 4095.仪器定义没有光源下的透光值为 0%，没有检测物的透光值为 100%。则实际检测中，检测物的透光值均在 0%-100%之间。 透光值的计算如下： T=（ Meas-Min） /（ Max-Min） 其中 T 为透光值， Mea
4、s 为检测的二进位数值， Min为在 0%的情 况 下检测的二进位数值， Max为在 100%的情 况 下检测的二进位数值，举例如下： 酶 标 仪的中心定位 仪器会自动对酶 标 孔进行中心定位，中心定位是 要 消除酶 标孔底的凸凹引起的厚薄不均带来检测的不准确。在对每一个酶 标仪进行检测时，仪器其实 要 进行 35个点的测量，选取最中间的5 个点的均值为本孔的 OD值。 光源的参照通道 参照通道是用来校准由 于 电压不稳或灯泡磨损带来的影响。 酶 标 仪的用途和其它提 示 用 于 ELISA 试剂的测定，广泛用 于 各种实验室，包括临床实验室。 质量控 制 质量控 制 是试剂检测的重 要因 素
5、。请按照试剂说明书的 要 求进行质量控 制 。 空白校正 有一些试剂盒的说 明 书 将空白孔设置为空气，其它大多数空白孔的设置是用试剂来设置的，请按照试剂盒的说明书 求进行。 检测结果的解释 由 于 有相当多的 因 素会影响检测的结果，如不同的酶 标 板，检测试剂的 体 积，都会造 成 OD值的不 同 ， 因 此，只有使用同一酶 标 板反应的试剂检测结果才能比较和分析。对结果的临床解释请依照试剂盒的说明书进行。 酶 标 仪的使用注意事项 1、工作环境 酶 标 仪是一种精密的光学仪器， 因 此良好的工作环境不仅能确保其准确性和稳定性，还能够延长其使用寿命。根据 DINVDE0871条例，仪器应放
6、置在无磁 场 和干扰电压的位置。依据 DIN45635-19 条例： 仪器应放置在低 于 40分贝的环境下。 为延缓光学部件的老化，应避免阳光直射。 操作时环境温度应在 15 -40 之间，环境湿度在 15%-85%之间。 操作电压应保持稳定。 操作环境空气清洁，避免水汽，烟尘。 保持干燥、干净、水 平 的工作台面，以及足够的操作空间。 2、操作注意事项 酶 标 仪的 功 能是用来读取酶联免疫试剂盒的反应结果， 此得到准确结果，试剂盒的使用必须规范。许多医院在使用酶 标 仪之前是通过目测判断结果，操作过 程 随意性较大，在使用酶 标 仪后如果不能及时纠正操作习惯，会造 成 较大误差。在酶 标
7、仪的操作中应注意以下事项： 使用加液器加液，加液头不能混用。 洗板 要 洗干净 。如果条件允许，使用洗板机洗板，避免交叉污染。 严格按照试剂盒的说明书操作，反应时间准确。 在测量过 中，请勿碰酶 标 板，以防酶 标 板传送时挤伤操作人员的手。 请勿将样品或试剂洒到仪器表面或内部，操作完 成 后请洗手。 如果使用的样品或试剂具有污染性、毒性和生物学危害，请严格按照试 剂盒的操作说明，以防对操作人员造 损害。 如果仪器接触过污染性或传染性物品，请进行清洗和消毒。 不 要 在测量过 程 中 关 闭电源。 对 于因 试剂盒问 题 造 成 的测量结果的偏差，应根据实际情 况及时修改参数，以达到最佳效果。 使用后盖好防尘罩。 出 现 技 术 故障时应及时与厂 家 联系，切勿擅自拆卸酶 标 仪。
