1、封面一（深色底） 本案主题标题文字为28号方正兰亭粗黑简体 你的部门名称或本案引导标题 2012年9月12日,淋巴造血系统肿瘤检测项目介绍 艾迪康医学检验中心 实验室 孙晓柏,血液肿瘤分类进程,MICM FAB形态学诊断(Morphology) 免疫学检查(Immunology ) 细胞遗传学检查(Cytogenetics) 分子遗传学检查(Molecular)WHY? 主观影响 方法学限制,检测方法,形态学: 细胞学：外周血、骨髓涂片，淋巴结穿刺 组织学：骨髓活检、淋巴结活检、血凝块 免疫学： 流式细胞术（FCM） 免疫组织化学 细胞遗传学：核型分析（染色体异常）、荧光原位杂交（FISH）
2、分子遗传学：融合基因（RT-PCRQ-PCR)/基因突变（DNA测序）,形态学,骨髓涂片看细胞、骨髓活检看结构， 二者相互补充相互验证不能相互替代。,长度 1.5cm，血凝块,免疫固定电泳免疫固定电泳对多发性骨髓瘤、Waldenstrom巨球蛋白血症、分泌型骨髓瘤、轻链病、重链病等研究有重大意义。常规检测免疫球蛋白中常见的IgG,IgA,IgM,IgD和IgE概率极低，当检测结果出现单独轻链，不能排除是IgE和IgD结合轻链的可能，若需要确定是否为游离轻链，将进一步检测。多发性骨髓瘤患者在治疗后易出现轻链丢失，电泳图谱与重链病图谱相似，此类患者建议加做尿液的免疫固定电泳检测是否存在游离轻链，以
3、作进一步区分。,遗传学,分子生物学,融合基因筛查,适用患者本筛查项目主要用于筛查ALL、AML、CML、AMMOL、CMML、MDS等血液病病种可能出现的31种融合基因或癌基因，及其融合基因的110余种剪切变异情况。适合无法确定融合基因类别的初诊患者，便于医生对血液病患者进行分子标志物的确定，并进行后续微小残留病灶的监控。 本项目建议配合染色体核型分析一起检测，以免由于染色体数目异常或携带少见融合基因而造成漏诊。,不同疾病筛查项目,ALL融合基因筛查（18种） AML融合基因筛查（23种） APL融合基因筛查（3种） MLL融合基因筛查（11种）,APL的5种融合基因亚型,Chromosoma
4、l t (15;17) t (11;17) t (11;17) t (5;17) dup (17) aberration (q22;q21) (q23;q21) (q13;q21) (q35;q21) (q21.3q23)Frequency 95% 12% rare rare rare Fusion gene PML-RARa PLZF-RARa NuMA-RARa NPM-RARa STAT5b-RARa100% 100% yes yes yesRARa-PML RARa-PLZF RARa-NuMA RARa-NPM RARa-STAT5b6070% 100% no yes noNucle
5、ar in 100 micro speckles localized in microspeckle sheet like microspeckle localization which maybe microspeckles pattern aggregation pattern, maybelocalized in be localizedcytoplasm in cytoplasm Response to ATRA good no, may respond good yes noto ATRA+G-CSFChemo good no, may respondto chemo/ATRAArs
6、enic good, with no PLZF-RARa not known not known not known degradation of degradation PML-RARa,CML的三种融合基因亚型,BCR-ABL, a model of activation of protein tyrosine kinase (PTK) in leukemo-genesis: growth and survival advantages,突变检测项目,WHO 2008 新界定的突变,技术交叉,TCR和IgH重排项目 有5-10%的患者无法通过常规方法辨别其淋巴系统的增生是恶性增生还是反应性
7、增生。 正常淋巴细胞在成熟过程中重排是多克隆性的，但恶性肿瘤（98%）表现为单克隆性Ig和/或TCR基因重排。 适用患者及适应症：疑似淋巴瘤患者的良恶性鉴别诊断。淋系白血病患者的鉴别诊断及微小残留跟踪检测。,免疫学,流式细胞术的应用目的,确定髓系和淋巴系别，及细胞分化阶段； 鉴别反应性与克隆性淋巴细胞增生性疾病； 确定髓系白血病各亚型（M0，M3，M6，M7）； 对形态学分类不明/比例低的细胞进行定性（淋巴瘤-凝 血功能障碍或甲减等）； 诊断急性混合细胞白血病（确诊）； 诊断微小残留白血病或白血病浸润； 辅助MPD/MDS诊断； 判断白血病/淋巴瘤预后，指导治疗。,微小残留病变检测,抗体选择
8、白血病/淋巴瘤免疫表型检测（30CD） 白血病/淋巴瘤免疫表型检测（20CD）对于无法诊断或是临床倾向不明的患者，确定细胞系别来源及分化程度，辅助分型，提供诊断以及治疗依据。 微小残留病灶检测（6CD）有初诊资料并且观察到微小残留跟踪标记 微小残留病灶检测（20CD）无初诊资料或病情有复发情况 MDS免疫表型检测（20CD） 多发性骨髓瘤免疫表型检测（14CD）,MICM整合报告,Pig-a基因的克隆性干细胞突变 Glycosylphosphatidylinositol anchor，GPI缺失 部分缺失：型细胞 全部缺失：型细胞,PNH克隆检测,检测哪些细胞？ 红细胞 中性粒细胞 单核细胞
9、淋巴细胞 血小板,FLAER 气单胞菌溶素（aerolysin）直接连接于GPI锚蛋白，GPI阴性的PNH细胞对aerolysin出现抵抗。利用这一特性，制备出了采用荧光素（如ALEXA-488）标记aerolysin的变异体（FLARE），通过流式细胞术或激光共聚焦等方法分析GPI阳性或阴性细胞。,Michael J. Borowitz et al. Guidelines for the diagnosis and monitoring of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria and related disorders by ow cytometry. Cytometry Part B 2010; 78B: 211230.,血液病质量体系建设,与UCLA（加利福尼亚大学）签订病理合作协议，建立了远程病理会诊平台，对疑难病例进行会诊研讨和科研.,吴亿慧 医学博士 美国病理医生,刘正智 医学博士、理学博士 伊利诺伊大学厄巴纳-尚佩恩分校医学院临床副教授，主任病理医师,查宏斌 医学博士 南加利福尼亚永久医疗集团洛杉矶医疗中心血液病理专科执业医师,
