1、 DTT( Dithiothreitol)二硫苏糖醇定义:苏糖醇的 C-1及 C-4位羟基置换成巯基的化合物。在生化反应中用做还原剂,保护蛋白质或酶中的巯基不致氧化而失活。也常用于还原蛋白质分子中的二硫键等。简介二硫苏糖醇(Dithiothreitol,简称为 DTT)是一种小分子有机还原剂,化学式为C4H10O2S2。其还原状态下为线性分子,被氧化后变为包含二硫键的六元环状结构。二硫苏糖醇的名字衍生自苏糖(一种四碳单糖) 。DTT 的异构体为二硫赤糖醇(DTE) ,即 DTT 的C3-差向异构体。识 别CAS 号 3483-12-3应用学科: 应用于生物化学与分子生物学简介华越洋生物 DTT
2、 二硫苏糖醇 说明:还原蛋白质 S-S 键的试剂;生化研究用作巯基保护剂;酶的专一性抑制剂;测定酶活力。SDS-PAGE 上样缓冲液的配制等。别名:1,4-二硫代-DL-苏糖醇;1,4-二巯基-DL-苏糖醇;1,4-二巯基-2,3- 丁二醇;1,4-Dithio-DL-threitol;Threo-1,4-dimercapto-2,3-butandiol分子式:C4H10O2S2 分子量:154.25CAS:3483-12-3外观:白色针状或白色颗粒、粉末特性:纯度:97%(滴定)氧化型二硫苏糖醇:0.5% 熔点:41-44溶解性:用20ml 0.01mol/l 乙酸钠溶液(pH5.2)溶解3
3、.09gDTT,过滤除菌,每管分装1ml,于-20 贮存。R:22-36/37/38 S:26-36储存条件:2-8 性 质化学式 C4H10O2S2摩尔质量 154.253 gmol1外观 白色固体熔点 42-43 C沸点 125-130 C (2 mmHg 压力下)在水中的溶解度 可溶若非注明,所有数据来自25 C,100 kPa还原性DTT 是一种很强的还原剂,其还原性很大程度上是由于其氧化状态六元环(含二硫键)的构象稳定性。它的氧化还原电势在 pH 为7时为-0.33 伏。二硫苏糖醇对一个典型的二硫键的还原是由两步连续的巯基-二硫键 交换反应所组成:其中,第一步反应所形成的中间态很不稳
4、定,因为 DTT 上的第二个巯基趋向于与被氧化的硫原子连接,使中间态很快被转化为 DTT 的环状氧化结构,从而完成对二硫键的还原。DTT 的还原力受 pH 值的影响,只在 pH 值大于7的情况下能够发挥还原作用。这是因为只有脱去质子的硫醇盐负离子(-S )才具有反应活性,硫醇(-SH)则没有;而巯基的 pKa一般为8.3。应用DTT 的用途之一是作为巯基化 DNA 的还原剂和去保护剂。巯基化 DNA 末端硫原子在溶液中趋向于形成二聚体,特别是在存在氧气的情况下。这种二聚化大大降低了一些偶联反应实验(如 DNA 在生物感应器中的固定)的效率;而在 DNA 溶液中加入 DTT,反应一段时间后除去,
5、就可以降低 DNA 的二聚化。DTT 也常常被用于蛋白质中二硫键的还原,可用于阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。但 DTT 往往无法还原包埋于蛋白质结构内部(溶剂不可及)的二硫键,这类二硫键的还原常常需要先将蛋白质变性(高温加热或加入变性剂,如6M 盐酸胍、8M 尿素或 1% SDS) 。反之,根据 DTT 存在情况下,二硫键还原速度的不同,可以判断其包埋程度的深浅。特点由于容易被空气氧化,因此 DTT 的稳定性较差;但冷冻保存或在惰性气体中处理能够延长它的使用寿命。由于质子化的硫的亲核性较低,随着 pH 值的降低,DTT 的有效还原性也随之降低;而 Tris(2-carboxyethyl)phosphine HCl(TCEP 盐酸盐)可以作为低 pH 值条件下DTT 的替代品,而且也比 DTT 更为稳定。