1、实验一 722 型分光光度计的性能检查、 目的1、了解 722 型分光光度计的性能2、熟悉仪器的技术指标及一般检查方法3、掌握仪器的正确使用方法、 原理722 型分光光度计是采用单光束自准式光路，色散元件为衍射光栅，能在近紫外，可 见光谱内对样品进行分析，根据被测物质在可见光区范围内（360800nm ）吸收特性及吸光的程度（吸光定律：A=-lgT=bc）对物质进行定性和定量测定的仪器。为保证分析的灵敏度和准确性，国家计量局规定：对仪器应定期进行检查，检查周期为一年。检查的主要技术项目有：仪器外观、波长精密度和重现型、分辨率、吸收 值精密和仪器的线型范围。对于符合闭耳定律的溶液测量时溶液的浓度
2、与吸光值之间有良好的线性；一套比色皿之间应互相匹配以及仪器的绝缘等。上述各项性能应符合仪器所规定的技术指标（见操作步骤），本实验采用规定方法对上述各项目进行检查。 三、试剂和器皿1、 K2Cr2O7标准溶液：1mgml -12、 CoCl2标准溶液： 10mgml-13、 CuSO4标准溶液：10mg ml-14、 0.1mol/LHCl5、 0.05mol/LH2SO46、 4 只比色皿、10 支 10ml 比色管、 1 支 2ml 移液管和 4 支 10ml 移液管、 实验步骤1、仪器外观检查 仪器所有紧固件应紧固良好，各调节器能正常工作，仪器之余平稳工作台上操作时不得有摆动现象，比色皿座
3、应推动自如，无松动、卡住的现象。光束透过各透光孔应畅通无阻。仪器所配比色皿的透光面应光洁，无表面刮痕、擦毛和斑点，任何一面不得有裂纹。2、 波长精度的检查 在波长标度上的波长标度值误差，应符合以下规定：波长范围 420500nm 510600nm 610700nm允许误差 3nm 5nm 6nm检查方法：使用仪器配备的镨钕玻璃片，该片对不同波长的光透光率不同。在分光光度计上测定其透光率波长曲线，从曲线上找出镨钕玻璃片的透光率峰值，则该仪器的波长误差 0。 = 2nm 0 等于 529nm（或 808nm）3、 线型误差的检查 在吸光度为 0.10.8（透光率为 8016）的范围内，将符合比耳定
4、律的溶液进行测定，在不同的吸光度值范围测量溶液浓度的线型误差应符合以下规定：吸光度范围 0.10.3 0.30.6 0.60.8线性误差 6 3 4检查方法：配制 K2Cr2O7；CoCl2；CuSO4 溶液，每种溶液配置以下三个浓度：溶液名称 溶液浓度（10 3gml-1） 测定波长 备注K2Cr2O7 0.0300 0.0900 0.150 440nm 浓度以 Cr 计量CoCl2 2.00 6.00 10.00 510nm 浓度以 Co 计量以溶剂为空白，用仪器分别测量以上各个溶液的吸光度，每一浓度的溶液必须重复测量 3 次，取其平均值。将记录的吸光度与对应浓度，按下列公式计算各点的线性
5、误差。C1KA 1； C2KA 2； C1KA 3321AK）（的 线 性 误 差 011 ）（的 线 性 误 差 A22A）（的 线 性 误 差 1033 式中：C 1、C2 、C3 是同一种溶液的三个浓度；A 1、A2、A3 是测得的相应的吸光度4、灵敏度的检查 仪器的灵敏度是度变化值与相应溶液浓度变化值之比，其比值应符合下表规定：溶液名称 灵敏度（A/g ml-1） 测定波长K2Cr2O7 0.012/3 440nmCoCl2 0.014/200 510nmCuSO4 0.014/200 690nm检查方法：配制如下浓度的溶液：溶液名称 溶液浓 度（10 3gml-1） 测定波长 备注K
6、2Cr2O7 0.0300 与 0.0330 440nm 浓度以 Cr 计量CoCl2 2.00 与 2.20 510nm 浓度以 Co 计量CuSO4 2.00 与 2.20 690nm 浓度以 Cu 计量在指定波长下分别测量各溶液吸光度，设每种溶液的两个浓度间变化值为 C，测得CuSO4 2.00 6.00 10.00 690nm 浓度以 Cu 计量的相应的吸光度为 A，则 灵敏度 S=A/C。5、重现性检查 仪器在同一工作条件下，用同一种溶液连续重复测定 7 次其吸光度最大读数与最小读数之差不应大于 0.5%检查方法，将波长固定在 690nm，用含 Cu 2.00103gml-1 硫酸铜
7、溶液连续测定7 次，计算其吸光度最大读数与最小读数之差。6、吸收池（比色皿）匹配性的检查 在同一波长下，配套使用的吸收池之间透光率之差要求不大于 0.5%。检查方法：将波长固定在 440nm，用含 Cr 0.0300103gml-1 的 K2Cr2O7 溶液分别注入一套吸收池，将其中一只推入光路中，调节至 95%（T 值可选小于 100%而又尽量大的任一值），然后将各吸收池一一推入光路，记录各吸收池同第一只吸收池之间的透光率差值，差值不大于 0.5%即可配对或配套使用。五、仪器的外形和使用方法1、722 型分光光度计仪器外形图2、使用方法：（1）将灵敏度旋转置“1”档（放大倍数最小）（2）开启
8、电源，指示灯亮，仪器预热 20 分钟，选择开关置于 “T”（3）打开试样室盖（光门自动关闭），调节“0%T”旋钮，使数字显示为“00.0”（4）将装有溶液的比色皿放置比色架中（5）旋动仪器的波长手轮，把测试所需的波长调节至刻度线处（6）盖上样品室盖，将参比溶液比色皿置于光路，调节通过率“100%T”旋钮，使数字显示为“100.0T” （如果显示不到 100%T，则可适当增加灵敏度的档数，同 时应重复“3”调整仪器的“00.0”。（7）蒋被测溶液置于光路中，数字表上直接读出被测溶液通过率 T 值。（8）吸光度的测量，按照“3”， “6”调整仪器的“00.0” 和 “100.0”，将 选择开关置于
9、 A 旋动吸光度调零旋钮，使得数字显示为 000，然后移入被测溶液， 显示值即为试样的吸光度 A 值。（9）浓度 C 的测量：选择开关由 A 旋至 C，将以 标定浓度的溶液移入光路，调节浓度旋钮，使数字显示为标定值，将被测溶液移入光路，可读出相应的浓度值。（10）如果大幅度改变测试波长时，在调整“00.0”和“100”后稍等片刻（因光能量变化急剧，光电管受光后响应缓慢，需一段光响应平衡时间），当 稳定后，重新调整“00.0”和“100”即可工作。六、注意事项使用前，使用者应该首先了解本仪器的结构和原理，以及各个旋或之功能。仪器接地要良好，否则显示数字不稳定。仪器左侧下角有一只干燥剂筒，应保持其干燥，发现干燥剂变色应立即更新或烘干后再用。每台仪器所配套的比色皿不能与其他仪器上的比色皿 单个调换当仪器停止工作 时，切断电源，电源开关同时切断，并罩好仪器。如果大幅度改变测试波 长时，须等数分钟后才能正常工作。（因波长由长波向短波或短波向长波移动时，光能量变化急剧，管电管受光相应慢，需一段平衡时间）。七、思考题1、同组比色皿透光性的差异对比色有何影响？2、检查分光光度计的下列性能，有什么实际意义：波长精度、稳定度、灵敏度、重 现性、 线性
