1、李 奎中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,撰写国家自然科学基金申请书的几点体会-兼论课题组长在基金申报中的作用(个人观点、个人理解，不能作为依据，仅供参考）,第一部分 撰写申请书的体会,国家自然科学基金申报评审程序 （申报人角度）,形式审查,专家函评 （ 海外专家）,基金委根据专家点评结果确定会评项目,会议评审（答辩）,基金委确定资助项目,一、国家自然科学基金申报评审程序,二、仔细研究基金委当年指南确定申请类型,面上项目青年基金地区基金重点项目重大研究计划地区联合基金优青杰青创新海外及港澳青年合作基金国际合作,国家自然科学基金项目分类,【注】：（1）不同项目有不同的写法，种类很多机会也很多，认真
2、研究指南确定 重要申报类型。（2）重点项目、重大研究计划、地区联合基金、重大国际合作，按 指南申报，首先是争取立项，写入指南。,三、选择申报学科（不同学科，不同写作思路）,选择自己人脉广的学科； 选择专业对口的学科； 选择自己有优势的学科； 慎重选择两个学科（主、辅学科）； 同一课题组相近项目最好选择不同学科； 根据学科调整写作思路。,四、全面了解基金项目评审要点,2012年度指南中指出：生命科学部一直坚持积极鼓励开展具有创新性学术思想和新技术、新方法的研究，尤其是对原创性的，对学科发展有重要推动作用的项目申请，或是在长期研究基础上提出的新理论、新假说和学科交叉的申请项目给予特别的重视。今后生
3、命科学部将继续关注生命科学研究中的重要前沿和新兴领域，注重学科均衡、协调发展；生命科学部鼓励科学家长期围绕关键科学问题开展系统性、原创性的研究工作。,根据自己的研究基础，认真思考，确定拟申报选题 （具体明确的科学问题）； 全面广泛阅读国内外相关文献； 全面了解基金委前期资助项目； 确定拟申报研究科学问题； 创新（学术思想、方法），标新立异，与众不同，不跟风赶时髦，避免争议，避免与国家重大计划重复。,五、量身定做, 慎重选题,六、国家自然科学基金项目申请书存在的问题技术转移类申报项目; 缺乏实质性的源头创新或创新思想，立意偏于保守； 大、空，深度不够； 立项依据不充分，无近三年文献； 写作格式问
4、题、错别字等申请书粗糙、不严谨。,（一）题目：1. 反映主要研究内容和创新之处；2. 起点高、面要窄、吸引人、有新意、具体明确；3. 根据题目确定关键词，从而确定立论依据的写法。,七、撰写申请书时的注意事项,【举例】： 1）2003年重点项目：猪脂肪和肌细胞发育或分化阶段比较转录谱和差异表达 基因的结构与功能 2） 2008年重点项目：中外猪种胎儿骨骼肌表型差异分子基础及其影响产肉性 状形成的比较发育遗传学研究 3）2004年青年基金题目（主持人朱正茂博士）：人鼠中未检测到同源序列的一个猪中新基因的结构与功能 4）2006年青年基金题目（主持人唐中林博士）：细胞外基质通路对猪骨骼肌的细胞社会学
5、行为及产肉性 状形成的分子调控,（二）400字摘要（十分关键）层次分明，全面准确反映项目来龙去脉、研究内容与创新之处, 语句讲究、凝炼、通顺、重要性、研究方法、研究？内容 ？达到？目标、 学术思想，科学意义：1）在方面非常重要2）将用研究方法3）研究内容4）实现目标5）会有科学意义 【举例】：,猪矮小性状相关miR-200s基因簇功能及表观遗传调控研究（2011年青年基金，任红艳博士）,我国小型猪具有体型小、遗传稳定等特点，已作为理想的实验动物模型和生物医学材料应用于多个领域，但其矮小性状的调控机制仍然是一个谜。果蝇的microRNA-8基因是调控果蝇体型大小的重要因子，能够与胰岛素信号通路上
6、关键因子互作影响细胞增殖和个体生长。但关于该基因在哺乳动物体型大小调控中的研究迄今国内外尚无报道。本课题组首次发现该基因在猪中存在同源类似物（microRNA-200基因簇），而且证实其序列、结构和表达特征与果蝇miR-8极为相似。据此我们提出假设：猪miR-200s具有同果蝇miR-8类似的功能，在猪矮小性状调控中起作用。为证实这一假说，本研究拟在已建立的五指山小型猪资源群体基础上，从分子、细胞、个体和群体四个层面对miR-200s基因簇分子特征、结构、功能和表达调控机制进行深入研究，明确miR-200s在猪矮小性状调控中的作用机理，提出猪矮小性状调控的新机制。,猪泛素-蛋白酶体途径关键酶E
7、3的基因间相关、蛋白质互作及与经济性状的关联,泛素-蛋白酶体途径与抗原提呈、转录调控等许多重要生命活动密切相关，且仍有许多未知因素有待研究和发现。本申请项目在申请人主持的前二项国家自然科学基金项目有关猪蛋白酶体相关基因研究工作基础上，采用基因芯片、RNAi和SNP联合模型，从几个层次研究猪泛素-蛋白酶体途径连接酶E3的基因间相关，筛选获得一些E3的重要基因。并利用申请人已拥有的通城猪试验群体、英国PIC公司资源群体和荷兰资源群体共1286个样本，研究重要基因与经济性状的关联，确定一些与经济性状相关的基因标记。 此外，还将采用酵母双杂交技术，初步研究E3相关蛋白质的互作。本项目从一个途径着手，从
8、基因网络和蛋白质互作的角度出发，有助于更准确地揭示猪重要经济性状（数量性状）的分子基础。同时也将加深对泛素-蛋白酶体途径的认识和对猪基因组的了解。,人鼠中未检测到同源序列的一个猪中新基因的结构与功能,在验证了猪新基因m218在杜洛克和通城猪胚胎不同发育阶段骨骼肌组织中表达的显著差异，完成了该基因的物理定位，得到了该基因大部分的cDNA序列和部分SNP多态信息并初步对SNP位点进行了性状关联分析的基础上，获得m218基因的全长cDNA及启动子序列，剪切点信息，推导蛋白质序列。转染入C2C12细胞系，研究其蛋白质亚细胞定位，合成特异性抗体，研究蛋白质表达模式和活性蛋白形式，在本室猪实验群体和PIC
9、（国际猪改良公司）公司家系中深入研究其对产肉性状的影响。率先研究人鼠中未检测到同源序列的猪中新基因m218的结构，功能和表达，获得具有我国知识产权的猪功能基因。研究结果为揭示猪肌肉生长和肌肉品质等产肉性状的分子机理提供新知识，为标记辅助选择提供新的基因资源。,七、撰写申请书时的注意事项,（三）立项依据：1. 引出科学问题（研究领域的重要性）；2. 研究进展，着重指出研究瓶颈及问题，最后落 脚到你要解决该问题的创新思路；3. 研究成功实现目标的科学意义（科学价值理 论意义和潜在的实践意义/应用前景）。,4.每一段开头都有一个总结性的小标题：（1）胎盘生长发育差异的分子机制研究是解析中外猪种繁殖性
10、状差异的重要方面；（2）猪胎盘印记基因功能的研究可深入了解胎盘和胎儿的生长发育分子机理；,七、撰写申请书时的注意事项,（3） 申请人前一国家基金研究结果表明二花脸和大白猪胎盘发育后期一批基因表达差异显著，且其中部分基因为印记基因，NNAT可能是其中一个与胎盘功能相关的重要印记基因； （4） NNAT基因及其相关通路在猪胎盘及胎儿生长方面及作为影响初生重的基因和标记的发掘方面极具研究价值。,（四）研究目标：要集中，不宜写得过大，集中解 决一个问题 （五）研究内容：1. 正确定位：基础或应用基础；2. 假说驱动；3. 确定研究的问题，查文献+预实验；4. 提出假设，实验设计，验证及分析；5. 提出
11、解决问题的新思路、新理论、新方法；6. 避免过多过大、层次分明、围绕目标。,七、撰写申请书时的注意事项,（六）参考文献：参考文献要新（近3年，一直到今年 年初的）标注参考文献时一定不要遗漏重要参考文献）。 （七）研究方案：文字描述，技术路线（图）清晰，方法得当。 （八）可行性分析：针对关键难点技术。前期研究已进行、立论理论和实验依据充分；已掌握关键技术；好的研究经验及研究基础；硬件条件具备。,七、撰写申请书时的注意事项,七、撰写申请书时的注意事项,（九）创新性：1. 题目有新意，内容新（目前热点等）；2. 研究思路与理论上创新；3. 研究视角独特、解决问题方式新颖；4. “目前研究很少”，“无
12、人问津”等问题出现是 因为：研究意义不大？问题已经解决？或根本行不通？5. 提出了新假说？对某未知领域的新探索？为解决某重要科学问题提供新思路和途径？学术思想的创新性?,下丘脑弓状核中雌激素受体a(Era)表达量在滩羊季节性繁殖调控中的作用 (2011年青年基金，狄冉博士) 本项目的特色与创新之处： （1）学术思想创新：从ER表达量的角度探索乏情期下丘脑对雌激素负反馈作用敏感性增强的原因，并对乏情期和发情期下丘脑“促进中枢”和“抑制中枢”ER数量影响绵羊发情状态的调节机制提出了假设。另外，通过本研究可推测绵羊下丘脑“促进中枢”和“抑制中枢”所在的位置，目前国内外学术界对它们的位置还无定论。 （
13、2）研究方法特色：本项目将最新的RNA原位杂交技术（Quanti- Gene ViewRNA）应用到季节性繁殖调控机制研究中，以期得到最准确的实验结果。,细胞外基质通路对猪骨骼肌细胞社会学行为及产肉性状形成的分析调控,本项目的特色与创新之处：（1）率先将细胞社会学引入动物遗传育种研究领域，具有学科交叉性，在研究思路上具有创新。针对细胞外基质通路相关基因，申请者从基因社会学、细胞社会学角度，研究基因互作遗传网络和细胞外环境与 细胞的互作。并借用“还原论”的思想，从分子水平还原到细胞和组织水平，研究细胞外基质生化通路相关基因对猪骨骼肌细胞社会性的调控。,通过表达网络模型构建，对通路中关键基因的表达
14、调控机制进行探讨。而传统的思路是从单基因着手，并片面重视骨骼肌细胞结构基因及肌生成因子，而忽视细胞外环境的作用，或只在单一的分子水平对基因进行研究。本研究提出了从细胞社会学角度探索细胞外环境和细胞互作对家畜动物复杂性状形成的分子机制进行研究的新思路。这是该课题的一个重要特色与创新之处。,（2）申请项目起点较高，此研究是前期国家自然科学基金重点项目研究成果的深入。申请者博士论文研究的内容是受国家自然科学基因重点项目“猪脂肪和肌细胞发育或分化阶段比较转录谱和差异表达基因的结构与功能”（项目编号：30330440，李奎主持）资助。研究发现，在胚胎骨骼肌发育过程中，细胞外基质通路相关基因是通城猪和长白
15、猪两品种差异最大的一类基因。因此，本课题立项起点高，是前期国家自然科学基金重点项目资助所取得成果的深入，具有很好的延续性。,（3）科学问题的提出是基于申请者博士论文的新发现，课题立项具有原始创新性申请者在对自己研究新发现的基础上，通过文献论证，确证细胞外基质在骨骼肌生长发育中具有重要作用，大胆提出假设：细胞外基质通路相关基因可能是中外猪产肉性状遗传差异产生的重要分子机制，而通过进一步的大量文献检索，细胞外基质对骨骼肌的生长发育具有重要作用。,（十）研究基础：项目前期进展可用图表等表述 （直接与间接）不 是只写申报者一个人的工作基础，而是指整个团队和这个学校（设备）基础。 （十一）个人简介：学历
16、、简历、研究工作（方向与成果）简介、人才培养与学术兼职、重要学术论文与成果。,七、撰写申请书时的注意事项,（十二）特别是青年基金，主要看申请人的科研潜力 与项目的创新思路，而科研潜力则主要通过简历与工作基础来体现。 （十三）如果主持人成果较弱，只有很少文章时，不妨写写这些文章的意义及别人给出的评价。,七、撰写申请书时的注意事项,（十四）文字上：科学术语规范、文笔流畅、简洁概括、逻辑清晰、 无错别字，体现认真、严谨，让评委从申请书看出申请人是一个能胜任科学研究的人。 （十五）工作条件和研究队伍：根据目标和研究内容、方法、写出工作条件和研 究队伍，每一部分工作有相应的条件和人员担任。 （十六）经费
17、写上限。,七、撰写申请书时的注意事项,（十七）基金委鼓励围绕某一科学问题开展连续系 统深入的研究：,七、撰写申请书时的注意事项,猪生长激素基因的定位与多态性及其与生产性状的关系 1991年国家基金，彭中镇教授 猪GH基因及其连锁群的PCR-RFLP和PCR-SSCP研究 1993 年国家基金 ，彭中镇教授 用PRINS技术构建猪12号二价染色体高精度框架图的研究 1995 年国家基金，李奎 猪12号染色体上新基因的CATS法分离及其定位和效应研究 1998 年国家基金，李奎 猪PA28相关基因的结构、表达、功能及与免疫性状的关联 2002 年国家基金，李奎 猪泛素-蛋白酶体途径关键酶E-3的基
18、因间相关、蛋白质互作及与经济性状的关联 2005 年国家基金，李奎,猪脂肪和肌细胞发育或分化阶段比较转录谱和差 异表达基因的结构与功能,申请单位：华中农业大学动物科学技术学院,申 请 人： 李 奎,八、关于重点项目,（一） 学术思想,1. 综合运用分子生物学、生物信息学和数量遗传学方法，揭示猪瘦肉生长和脂肪沉积的分子基础。 2. 既研究脂肪和肌细胞系分化前后差异表达基因，又研究我国优良地方猪不同生长阶段差异表达基因，以及中外猪品种间差异表达基因，构建猪瘦肉生长和脂肪沉积基因差异转录谱。 3. 克隆、鉴定猪瘦肉生长和脂肪沉积相关的基因。 4. 将肌肉生长和脂肪沉积调控作为一个整体，同时研究基因生
19、物学功能及基因间互作。,（二）方法及 技术路线,SAGE文库的构建 ：选择锚定酶和标签酶，完成序列的拼接，形成多连体序列标签,（二）方法及技术路线,研究猪脂肪和肌细胞分化发育基因互作机制技术路线,（三） 特色与创新之处,1.将脂肪和肌细胞生长发育调控作为一个有机整体，系统研究脂肪和肌细胞发育过程中基因表达调控关系，以阐明基因的互作机制。 2.用细胞系研究猪脂肪和肌肉细胞转录谱及猪基因生物学功能。 3.SAGE技术高通量分析猪基因表达，能较大规模筛选和发现新的重要功能基因。 4.拓展比较转录谱内涵、实验流程和相关统计方法。,中外猪种胎儿骨骼肌表型差异分子基础及其影响产肉性状形成的比较发育遗传学研
20、究,申请人：李 奎,申请单位：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,符合重点项目“农业动物（畜禽及水生经济动物）和牧草种质资源的遗传基础研究”方向,（一）关键科学问题,确定中外猪种妊娠中后期胎儿骨骼肌发育最大差异时间点,妊娠中后期 （第6080天 ） 是不同猪种间骨骼肌 生长发育差异 的关键时期,胚胎时期对生后 生长性能起决定作用,最大差异点 的确定,？,（一）关键科学问题,中外猪种胎儿骨骼肌发育相关调控通路差异分析,骨骼肌发育相关调控 通路的差异分析,骨骼肌组织的 基因表达表型 在中外猪种之间 差异极为显著,下一步,中外猪骨骼肌 比较转录组,引起这种基因表达差异的原因,（一）关键科学问题,表观遗
21、传及非编码RNA对肌肉发育差异的调控,已有基础,已有基础,已有基础,肌肉发育的 调控机制,表观遗传 调控,非编码 RNA调控,遗传调控,（一）关键科学问题,中外猪种骨骼肌发育在多层次调控网络水平差异的综合分析,地方猪骨骼肌 发育的多层次 调控网络,国外猪骨骼肌 发育的多层次 调控网络,比较中外品种骨骼肌发育在多层次调控网络水平的差异,调控,表观遗传修饰,蛋白互作,蛋白互作,调控,表观遗传修饰,信息整合分析,信息整合分析,（一）关键科学问题,深入认识产肉性状形成的遗传学基础,节点基因的筛选,性状关联分析,育种中的验证与应用,群体SNP分型,（二） 方法与技术路线,总体技术路线,通城猪、长白猪妊娠
22、55、60、63、65、67、70、75、80天胎儿骨骼肌,骨骼肌发育相关调控通路的差异分析,根据转录谱和组织学特征确定最大差异时间点,表观遗传及非编码RNA调控差异分析,. 解析通城、长白猪妊娠中后期骨骼肌发育差异的分子遗传学机理； . 获取胎儿骨骼肌发育的多层次调控网络，解析产肉性状形成的遗传学基础； . 新信号通路、关键基因的鉴定以及功能分析，确定其在猪育种工作中的意义,关键基因和通路确定,(二) 方法与技术路线,差异时间点分析，关键的调控信号以及因子分析,两品种猪胎儿骨骼肌组织学、组织化学差异研究,通城猪与长白猪妊娠第55、60、63、65、67、70、75、80天胎儿骨骼肌样品,确定
23、妊娠中后期骨骼肌发育最大差异点,基因表达的时序分析,基因表达的原位分析,新基因和通路的确定以及表达调控模式研究,(二) 方法与技术路线,骨骼肌发育相关调控通路的差异分析技术路线,通城和长白胎儿成肌细胞,增殖、分化时期的比较转录谱,重要基因互作网络构建及比较,骨骼肌发育相关调控通路以及品种间差异分析,转录谱芯片分析,酵母双杂交分析,(二) 方法与技术路线,表观遗传及非编码RNA调控差异分析技术路线,(二)方法与技术路线,差异表达基因的关联分析,(三) 特色与创新之处,在前期研究成果的基础上，进一步以妊娠中后期的胎儿骨骼肌为重点，精细确定中外猪种产肉性状显著差异的关键时间点。可弥补当前产肉性状研究
24、的不足。从遗传调控与表观遗传调控互作的角度，以更高的视角探讨中外猪品种产肉性状的显著差异及其互补性的调控机制。,(三) 特色与创新之处,鉴定关键的节点基因，结合这些基因与经济性状关联以及相应的生物学功能研究，确定具有重要贡献的基因和分子标记。 综合利用多学科相关技术精细描述中外猪品种出生前骨骼肌发育的差异；差异表达新基因鉴定方法有改进。,(三) 特色与创新之处,把比较发育遗传学思路引入到中外猪骨骼肌的表型差异分子机制研究中，将一定程度上有利于我国动物遗传育种学科和畜禽发育遗传学科的发展；研究结果将为我国猪产肉性状的改良提供一定的理论基础。,九、关于重大研究计划“微进化过程的多基因作用机制”重大
25、研究计划2012年度项目指南 （三）人工选择下的基因组变异与适应人工环境的分子机制。 家养动植物是在短短的一万多年内，通过人工选择的作用，从野生祖先驯化而来的。人工选择的特点是强度高、方向明确。本研究方向要求通过比较家养动植物与其野生近缘物种群体的全基因组水平上的差异，探讨人工选择下基因组变异的规律，鉴别出重要的适应性基因，揭示人工选择下家养动植物适应人工环境的遗传机制。本方向优先支持驯化历程相对清晰、有望对进化理论做出崭新贡献的研究系统。研究内容应着眼于了解选择压推动微进化的分子机制，而不是农业经济性状的改良。,立项很重要 七人专家组 重点项目（强度与重点项目相似）和培育项目 函评5-7人，
26、2名海外评委 重点项目需答辩 农科院专家需围绕微进化调整写作思路,第二部分 课题组长的作用,课题组长在基金申报中的作用,一、使团队成员认识到基金的重要性，激发兴趣。二、把握研究方向：基础/应用基础研究，结合国家需求与自己积累，符合指南，避免重复研究。三、组织好申请（一个团队内研究方向较近，如何处理？）把握投送方向：（一）学科分开：申报不同学科（畜牧、遗传、发育等）。（二）方向分开：同一物种可以侧重不同性状或问题进行申请。实力强的投送其他学科 是否限制申请？,四、充分利用团队内前期研究基础扬长避短，团队成员基本不申请团队没有任何基础的项目五、申请书质量把关（一）不要盲目写，写之前要团队内开会先讨
27、论思路、拿提纲；（二） 确定思路后要尽早拿出初稿；（三） 找申请成功的人提意见；（四）平时注意对科技写作方面的锻炼。,课题组长在基金申报中的作用,六、人员匹配：人员队伍合理安排。七、关注团队中多次申请失败的成员：分析原因、 找突破口。八、注意在同行中对团队成员的宣传：小同行、初审评议人，初审最关键！九、适当注意让基金委管理人员了解团队研究水平：实力最重要，领导了解会有所帮助。十、关注并督促青年基金研究进展，维持团队声誉，在申请基金方面形成良性循环。,课题组长在基金申报中的作用,唐代诗人贾岛行走坐卧吟咏不辍，是一位苦吟诗人。一日骑驴行于长安道上，偶得一诗句：“鸟宿池边树，僧推月下门”。其中“推”字又想用“敲”字，沉吟未决之际，冲撞京兆尹韩愈的行驾。开道侍从将贾岛押到韩愈驾前，贾岛据实陈述。韩愈听后驻马良久曰：“敲”字好！月下敲门境界更静。由此相识交往，留下一段佳话。“推敲”二字由此传用。,谢谢！,
