1、1第 8 课时 专题复习一、核心概念整理训练 1 下表表示在不同培养基中细菌的生长繁殖情况。(A、B 、C 、H、I、J、K、M 为培养基的成分， “”表示生长， “”表示不生长) ，请分析下列哪种物质细菌不能合成( )培养基成分 A、B、C A、B、C 、I 、M A、B、C 、H、K A、B、C、M、J生长状态 培养基成分 A、B、C、I、K A、B 、C 、H、 J A、B 、C 、K、 M生长状态 2A.H BI CK DM训练 2 实验测定链霉素对 3 种细菌的抗生素效应，用 3 种细菌在事先准备好的琼脂平板上画 3 条等长的平行线(3 条平行线与含链霉素的带接触 )，将平板置于 3
2、7条件下恒温培养 3 天，结果如下图所示，从实验结果看，以下关于链霉素的叙述不正确的是( )A它能阻止结核杆菌生长B它对结核杆菌比对霍乱菌更有效C它对结核杆菌比对伤寒菌更有效D它可以用于治病伤寒病人二、微生物技术1培养基的制备：(以牛肉膏蛋白胨固体培养基为例 )计算 称量溶化灭菌倒平板。2无菌技术(1)实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌等，常用的消毒方法有煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法等，对不同的对象需采用不同的消毒或灭菌方法。(2)微生物培养时获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。无菌技术围绕着如何避免杂菌的污染展开，主要包括以下内容：对实验操作的空间、操作者
3、的衣着和手进行清洁和消毒。将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。为避免周围环境中微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。3倒平板操作：待培养基冷却至 50左右时，在酒精灯火焰附近倒平板，严 格遵循教材上的操作步骤。4平板划线操作：平板划线法通过接种 环在琼脂固体培养表面连续划线的操作，将聚集 的菌种逐步稀释分解到培养基的表面。5稀释涂布平板法：先将菌液进行系列稀释，然后涂布平板，在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分解成单个细胞，从而在培养基表面形成单个菌落。训练 3 在微生物培养过程中，需要对培养基等进行灭
4、菌，其标准是( )A杀死所有的病原微生物B杀死所有的微生物C杀死所有微生物的细胞、芽孢和孢子D使病原菌不生长训练 4 请根据所学知识回答以下问题。(1)有 2 位同 学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品的细菌数。在对应稀释倍数为 106的培养基中，得到以下两种统计结果：甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为 230；乙同学在该浓度下涂布了 3 个平板，统计的菌落数分别为 21、212、256，并且取平均值 163 作为统计结果。请评价这两位同学的实验结果的合理性。甲同学_，原因是_。乙同学_，原因是_。正确做法是_。3稀释涂布平板法所用培养基按物理性质划分属于_培养基；倒平板前保证培养基
5、无菌的常用方法是_。(2)生物工程常需分离酵母菌和 Taq 耐热菌，分离方法常用选择培养基。如用加高浓度食盐的适宜培养基，分离金黄色葡萄球菌。请提出从含细菌、酵母菌和 Taq 耐热菌的培养液中分离酵母菌和 Taq 耐热菌的方案。分离酵母菌：_。分离 Taq 耐热菌：_。三、微生物的代谢类型及选择培养基在微生物培养中的应用1微生物的代谢类型(1)根据能否将 CO2 合成有机物可分为 ：自养型生物与异养型生物。营养类型 碳源 氮源 生长因子自养型微生物 CO2、 NaHCO3等含碳无机物 NH3、铵盐、硝酸盐等 一般不需 要异养型微生物 糖类、脂肪酸等 铵盐、硝酸盐、 蛋 白质等 有些微生 物需要
6、(2)划分依据：自养微生物与异养微生物类型划分的主要依据是能否以无机碳作为生长的主要或唯一碳源，而与氮源无关。自养微生物 以 CO2 或碳酸盐为主要或唯一碳源进行代谢生长；异养微生物必须以有机物作为碳源进行代谢生长。2选择培养基在微生物培养中的应用(1)在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。在配制选择培养基时，往往要在培养基中加入某种化学物质。例如，当 需要酵母菌和霉菌时，可以在培养基中加入青霉素，以抑制细菌和放线菌的生长，从而分离出酵母菌和霉菌；在培养基中加入高浓度的食盐溶液可以抑制多种细菌的生长，但不影响金黄色葡萄球菌的生长，可
7、以将金黄色葡萄球菌分离出来。(2)分离某种目的菌株，应根据它对营养和环境的特殊要求，设计合理的选择培养基。训练 5 若大肠杆菌和圆褐固氮菌混合在一起，采用下列哪组培养基可将它们分离( )A加食盐的培养基和牛肉膏蛋白胨培养基B伊红美蓝培养基和无氮培养基C斜面培养基和液体培养基D加青霉素的培养基和液体培养基训练 6 微生 物与人类关系密切。虽然有些微生物能使动植物患病，但多数微生物对人类是有益的。请回答有关微生物及其应用的问题。(1)表一、表二为两种微生物的培养基配方。表一成分 含量KH2PO4 1.4 gNa2HPO4 2.1 gMgSO47H2O 0.2 g葡萄糖 10.0 g尿素 1.0 g
8、琼脂 15.0 g表二成分 含量纤维素粉 5.0 gNaNO3 1.0 gNa2HPO47H2O 1.2 gKH2PO4 0.9 gMgSO47H2O 0.5 gKCl 0.5 g酵母膏 0.5 g4水解酪素 0.5 g上述两种培养基中的物质溶解后，均与蒸馏水定容到 1 000 mL。如果要进行土壤中分解尿素的细菌的分离，则需要选择哪种培养基？_，该培养基能分离尿素分解菌的原因是_ _。在该培养基中可加入_指示剂，根据指示剂的颜色，可鉴定该种细菌能够分解尿素。从功能上来看，上述两种培养基均属于_培养基。(2)在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的倒平板操作时，平板冷凝后，应将 平板_放置，这样做的目的
9、可防止_造成污染。(3)微生物接种的方法很多，在用平板划线法操作结束时，为什么仍需要灼烧接种环？_。一、选择 题1有关培养基配置原则表述正确的是( )A任何培养基都必须含有碳源、氮源、矿质元素、水及生长因子B碳源和氮源必须具有一定比例，碳元素的含量最多，其次为氮元素C微生物的生长除受营养因素影响外，还受到温度、pH、氧、渗透压等的影响D营养物质的浓度越高越好2下列操作与消毒灭菌无关的是( )A接种前用肥皂洗双手，再用酒精擦试双手B接种前用火焰灼烧接种针(环)C培养基在 50左右时搁置斜面D在酒精灯的火焰旁完成倒平板的操作3不能够与刚果红反应生成红色复合物的是( )A纤维二糖 B纤维素CCMCN
10、a D淀粉4鉴别培养基是根据微生物的代谢特点在培养基中加入一些物质配制而成的，这些物质是( )A指示剂或化学药品B青霉素或琼脂C高浓度食盐D维生素或指示剂5产生标准形态菌落的细菌的最初数目和培养基分别是( )A一个细菌、液体培养基B许多细菌、液体培养基C一个细菌、固体培养基D许多细菌、固体 培养基6下列属于菌落特征的是( )菌落的形状 菌落的大小 菌落的多少隆起程度 颜色 有无荚膜A BC D7在做分离分解尿素的细菌实验时，A 同学从对应 106 培养基上筛选出大约 150 个菌落，而其他同学只选择出大约 50 个菌落。A 同学的结果产生原因不可能有( )A由于土样不同 B由于培养基污染C由于
11、操作失误 D没有设置对照8下列关于细菌的叙述，错误的是( )A硝化细菌能以 NH3 作为氮源和能源物质B某些细菌可以利用光能固定 CO2 合成有机物5C生长因子是某些细菌生长过程中需要额外补充的营养物质D含伊红和美蓝试剂的培养基不能用来鉴别牛奶中的大肠杆菌二、简答题9某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察与计数。请回答与此实验相关的问题。(1)培养基中含有的蛋白胨、淀粉，分别为细菌培养提供了_和_。除此之外，培养基还必须含有的基本成分是_和_。(2)对培养基进行灭菌，应该采用的方法是_。(3)为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种
12、了湖水样品的平板置于_中培养，培养的温度设定在 37。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种_作为对照进行实验。(4)培养 20 小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明湖水样品中有_种细菌。一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越_。(5)如果提高培养基中 N aCl 的浓度，可以用于筛选耐_细菌，这种培养基被称为_。10自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们在研究微生物时一般要将它们分离提纯，然后进行数量测定。下面是对大肠杆菌进行数量测定的实验，请回答有关问题。步骤如下：A制备稀释倍数为 102、10 3、10 4、10 5、10 6 的系列稀释液。B为了得到
13、更加准确的结果，你选用_(稀释混合平板法、稀释涂布平板法)接种样品。C适宜温度下培养。结果分析：(1)测定的大肠杆菌数，在对应稀释倍数为 106 的培养基中，得到以下几种统计结果，正确可信的是( )A一个平板，统计的菌落数是 23B两个平板，统计的菌落数是 22 和 26，取平均值 24C三个平板，统计的菌落数分别是 21、5 和 52，取平均值 26D四个平板，统计的菌落数分别 是 21、30、24 和 25，取平均值 25(2)一同学在稀释倍数为 105 的培养基中测得平板上菌落数的平均值为 23.4，那么每毫升样品中的菌落数是(涂布平板时所用稀释液的体积为 0.2 mL)_。(3)用这种
14、方法测定密度，实际活菌数量要比测得的数量_ ，因为_ _。(4)某同学在测定大肠杆菌的密度时发现，在培养基上还有其他杂菌的菌落，能否肯定该大肠杆菌的品系被污染了？为什么？_ _。第 8 课时 专题复习专题整合一、固体 液体 选择 鉴别 碳源 氮源溶化 调 pH 分装 灭菌 干热 高压蒸汽 煮沸 巴氏 稀释涂布平板法 平板划线法 利于 刚果红染色体 透明圈训练 1 C训练 2 D训练 3 C 灭菌是指利用强 烈的物理或化学手段杀死所有微生物的细胞、芽 孢和孢子。训练 4 (1)不合理 没有设置重复组 ，结果不具有说服力 不合理 其中 1 个计6数结果与另 2 个相差太远(或在操作过程中可能出现错
15、误，或只简单地计算了平均值)在设计实验时，一定要涂布至少 3 个平板作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否相当，结果差距太大，意味着操作有误，需要重新实验 固体 高压蒸汽灭菌法(2)用加抗生素的选择培养基分离酵母菌 用高温培养条件分离 Taq 耐热菌训练 5 B 大肠杆菌的代谢产物可与伊红美蓝结合，使菌落呈深紫色，并带金属光泽，圆褐固氮菌能自行固氮，可用无氮培养基选择培养。 训练 6 (1)表一 培养基中尿素为唯一氮源，只有能分解尿素的微 生物才能生长繁殖 酚红 选择 (2)倒过来 皿盖上的水珠落入培养基 (3)杀死接种环上残留的菌体，避
16、免细菌污染环境和感染操作者。解析 要筛选微生物，应根据微生物 对培养物质的不同要求 选择不同的培养基，在 筛选培养过程中要注意无菌操作。达标测试1C 培养基中碳源和氮源必 须具有一定比例，但含量最多的元素不应是碳，应是氧。营养物质的浓度并不是越多越好， 浓度过高会导致培养物 细胞失水。 2C3A 刚果红可以与像纤维 素这样的多糖物质形成红色复合物，但不与纤维二糖、葡萄糖、麦芽糖发生反应。4A 在培养基中加入青霉素或高 浓度食盐的目的是抑制某些微生物的生长，而加维生素一般是为微生物提供生长因子，起不到 选择或鉴别作用，只有在加入某种指示剂或化学药品后，某些微生物会与特定的 化学物质发生特定的化学
17、反应，而表现出特有的菌落特征，我们可以根据这些特征去判断属于哪种微生物。5C 在液体培养基中生活的 细菌，无 论是一个还是许多，肉眼都是看不见 的。在固体培养基上的细菌，当数目较少 时也是看不见的。当固体培养基上有许多细菌并且集中在较小范围内时 ，肉眼可 见。而菌落是一个细菌或几个细菌的子细胞群体，形成于固体培养基上，有一定的形态结构，所以肉眼可 见。同种 细菌形成的菌落，形态结构是相同的。如果有许多细菌形成的菌落，就不可能有比较标准的形态，因 为这许多 细菌第一不可能是同一种细菌，第二不可能在培养基的同一个点上。6B 不同种类的细菌所形成的菌落大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等方面具有
18、一定特征，所以，每种细 菌在一定条件下所形成的菌落， 可以作为鉴定的重要依据。单个细菌用肉眼是看不见的， 故 细菌的个体特征不能作为菌种 鉴定的依据。7D 实验结论是否正确与是否 设置对照有直接关系，但实验结果与是否设置对照无关。8D 某些细菌如蓝细菌(蓝藻)、光合 细菌以及红螺菌都能进行光合作用。生 长因子是指微生物生长不可缺少的微量有机物，主要包括维生素、氨基酸和碱基等。而微生物的 营养物质包括水、无机盐、碳源、氮源和生长因子，它 们都要从外界获得补充。常用的伊 红美蓝乳糖培养基，可用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大 肠杆菌等 细菌，如果有大 肠杆菌，因其强烈分解乳 糖而产生大量的混合酸，
19、菌体带 H ，故菌落被染成深紫色，从菌落表面的反射光中还可以看到 金属光泽。9(1)氮源(碳源不作要求 ) 碳源 无机盐 水(2)高压蒸汽灭菌 (3) 恒温培养箱 无菌水 (4) 多 高 (5) 盐(或 NaCl) 选择培养基解析 培养基是供微生物生长 、繁殖、代谢的混合养料。由于微生物具有不同的 营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异；但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐以及水分等。另外，培养基还应具有适宜的 pH、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压等。培养基在使用前要 进行彻底的灭菌，多采用高压蒸汽灭菌。通过观察培养基上菌落的多少，可确定湖水细菌污染的程度。含高 浓 度 NaCl 的培养基可筛选出耐盐的细菌。10步骤 B：稀释混合平板法 结果分析：(1)D7(2)1.17107 (3) 多 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察的是一个菌落 (4)不能。因为不能排除杂菌来自培养基或来自培养过程
